Подача документов в ифнс: Подача документов на государственную регистрацию в электронном виде

Содержание

Передача заявлений в ИФНС в электронном виде, передача электронных заявлений в налоговую

Краткое описание услуги

Наша нотариальная контора предоставляет возможность передачи заявлений и документов для регистрации в налоговую инспекцию сведений в отношении юридических лиц и индивидуальных предпринимателей, а также возможность внесения в электронном виде изменений в сведения ЕГРЮЛ. Нотариус уполномочен самостоятельно передавать заявления в инспекцию по налогам и сборам, в том числе и документы со своей ЭЦП. Адлейба С.П. — нотариус с ЭЦП.

Подробное описание услуги передачи заявления в налоговую в электронном виде

Передача заявления в электронном виде в Инспекцию по налогам и сборам – это нотариальное действие, при котором посредником между отправителем и получателем заявления является нотариус.

Нотариальная контора Адлейба Светланы Павловны, в рамках эксплуатации программы «Электронная регистрация» проекта по передаче заявлений и электронных документов в ИФНС, подписанных с помощью ЭЦП нотариуса, имеет право подавать в налоговую инспекцию, а именно в ИФНС №46 по Москве или любую ИФНС России, электронные документы, в том числе и заявления по формам 11001, 13001, 14001, 24001, 21001, 34001 и другим для регистрации и вносить изменения при перерегистрации ЮЛ и ИП в регистрирующем органе.

Передача заявлений в налоговую инспекцию происходит в два шага.

Шаг 1

Нотариус свидетельствует подлинность подписи обратившегося лица на заявлении по формам 11001, 13001, 14001, 21001 или других.

Шаг2

Нотариус предлагает лицу подписать заявление с просьбой о передаче своего заявления (по установленной регистрирующим органом форме) в ИФНС. Гражданин вместе с заявлением, указанным выше, передает нотариусу форму, удостоверенную на первом шаге и все необходимые документы, прикладываемые к заявлению в ИФНС. При передаче на регистрацию документов в электронном виде нотариусом, государственная пошлина не оплачивается.

Получив от заявителя весь комплекс требуемых документов, нотариус с помощью сканирования создает их электронные образцы, из которых формирует контейнер и подписывает его с помощью своей ЭЦП, после чего отправляет в ИФНС. Подлинники отправленных документов остаются у нотариуса. После прохождения предварительной проверки документов уполномоченным лицом регистрирующего органа на адрес эл. почты нотариуса поступает транспортный контейнер, в котором содержится расписка регистрирующих органов о получении электронных документов, подписанная с помощью ЭЦП уполномоченного лица данных органов и предполагаемая дата регистрации.

По желанию Заявителя документы из ИФНС могут быть отправлены ему по почте или получены им лично у нотариуса. Нотариус, по просьбе заявителя, может распечатать расписку, полученную от ИФНС о получении заявления.

Нотариус после осуществления государственной регистрации сообщает о результатах гос. регистрации и если ИФНС откажет в регистрации, нотариус сообщает об этом Заявителю.

Дополнительная информация

Если заявитель — ИП или физическое лицо (при создании юридического лица или ИП), необходимо предоставить:

  • Действительный общегражданский паспорт гражданина РФ
  • Заявление в ИФНС, по установленной регистрирующим органом форме, подготовленное (заполненное надлежащим образом)
  • Полный комплект документов, которые были указаны в предыдущем заявлении и необходимы для государственной регистрации.

Если Вы желаете заказать копии устава, то Вам не нужно представлять в ИФНС требуемое число копий. Между ФНП и ИФНС существует договоренность, по которой последняя самостоятельно изготовит необходимое количество копий. Вам требуется только приложить заявление об этом и квитанции об оплате госпошлины за изготовление копий уставов.

Нотариус г. Москвы – Адлейба Светлана Павловна.

Лицензия № 000434. Выдана Главным Управлением Юстиции г. Москвы 12 мая 1994 г.

Назначена Приказом № 88-ч Министерства Юстиции г. Москвы 11 июня 1994 г.

В нашей конторе Вы можете оформить передачу заявлений в ИФНС с собственной ЭЦП нотариуса
и передачи электронного заявления в налоговую службу
и получить необходимую помощь по данному нотариальному действию.

Звоните по телефонам +7 (495) 668-26-03, +7 (495) 668-36-03, +7 (926) 871-66-65, +7 (925) 518-65-02

или оставляйте Ваши заявки на электронную почту [email protected]

Наш адрес: Москва, Большой Кисловский пер. , дом 6, этаж 1, офис 1
Ближайшие станции метро: Арбатская, Библиотека им. Ленина, Александровский сад
Время работы: Пн-Чт с 10-00 до 18-00 (без обеда), Пт с 10-00 до 17-00 (без обеда).

Приём осуществляется в максимально короткие сроки, возможна предварительная запись.
Мы делаем всё, чтобы принять Вас быстро и грамотно!

Предоставить документы в контролирующие органы

Предоставить документы в контролирующие органы

Предоставление документов в налоговые органы

Согласно Приказам ФНС России налоговая инспекция может направлять в адрес налогоплательщика требования о предоставлении первичных документов. Участник информационного обмена

не реже одного раза в сутки должен проверять поступление Требований о представлении документов, Истребуемых документов и технологических электронных документов.

В соответствии со ст. 93 Налогового кодекса Российской Федерации истребуемые документы могут быть представлены в налоговый орган лично или через представителя, направлены по почте заказным письмом или переданы в электронной форме по ТКС.

Получив данное требование, пользователи системы СБИС смогут быстро и просто отправить истребуемые документы в НИ в электронном виде.

Предоставление документов для аудиторов или в суды

На стороне данных органов установка специальных приемников производиться не будет. Процедура представления документов аудиторам или в суд останется прежней — документы будут передаваться на бумаге.

Вы можете распечатать из системы СБИС сами документы, на которых будет штамп о том, что документ прошел через оператора электронного документооборота, а также подтверждение оператора. Данные документы необходимо заверить своей подписью и печатью.

По спорным сделкам можно распечатать отчет о подписании документов реализации и приложить его к пакету документов.

В суде можно доказать исполнение своих обязательств по электронным документам без наличия соглашений с контрагентом.

  • Прежде всего в суд можно представлять электронные документы. Об этом говорит п. 3 ст. 75 Арбитражно-процессуального кодекса.
  • В суд предоставляются акты и накладные, которые и доказывают исполнение обязательств продавца по отношению к покупателю, а для этих документов, как мы говорили выше, никаких требований о необходимости заключения соглашений нет.
  • Электронный акт или накладная будет подписана электронной подписью покупателя, которая гораздо надежнее защищает документ от подделки, при этом она «признается действительной до тех пор, пока судом не установлено иное» ( ст. 11 Закона об электронной подписи 63-ФЗ).

Суды принимают электронные документы к рассмотрению. Вот несколько таких дел: Пример 1, Пример 2, Пример 3, Пример 4 и Пример 5.

Новый порядок электронного взаимодействия при регистрации ИП и организаций: что изменилось

Для формирования и электронной подачи документов ФНС рекомендует воспользоваться:

  1. Специальным программным обеспечением «Подготовка документов для государственной регистрации». Установочный файл и инструкции выложены на сайте ФНС.
    Программа используется только для подготовки (заполнения и проверки) заявления Р11001 или Р21001. Для направления документов в ИФНС она не подойдёт.
  2. Специальным сервисом. Он становится доступен после авторизации с помощью квалифицированного сертификата электронной подписи (УКЭП). Сервис позволяет подготовить заявление, загрузить документы (скан-копии), необходимые для регистрации юрлица или ИП, и направить весь комплект в ИФНС для принятия решения о регистрации.
  3. Мобильным приложением «Личный кабинет ИП». На странице входа в приложение есть пункт «Зарегистрировать ИП». Способ подходит только для предпринимателей, позволяет сформировать и направить заявление, но прийти в ИФНС всё равно придётся — для идентификации и завершения регистрации.

Самый удобный и быстрый способ, при этом обеспечивающий полностью удалённую регистрацию компании или ИП, — второй вариант.

Заявление для регистрации организации или ИП формируется в виде файла формата ods (ГОСТ Р ИСО/МЭК 26300-2010), xls (xlsx), tif, или pdf. Другие документы сканируются с бумажных носителей и преобразуются в файл формата tif или pdf. Для направления документов через мобильное приложение допускаются форматы jpeg или xls (xlsx). Многостраничные бумажные документы сканируются и преобразуются в один файл.

На каждый электронный документ, подписанный УКЭП, формируется файл с электронной подписью.

В итоге перед отправкой все документы упаковываются в архив формата zip. Помимо основных документов, в архиве должна присутствовать опись вложения и описание транспортной информации. Оба этих файла должны иметь формат xml.

При направлении документов в ИФНС через специальный сервис на сайте Федеральной налоговой службы необходимо подписать каждый электронный документ электронной подписью. У ИП должен быть оформлен квалифицированный сертификат на имя физического лица. При регистрации юридического лица заявителю также понадобится сертификат электронной подписи, оформленный на физическое лицо. Обычно сертификат оформляется на имя одного из учредителей, который будет выступать заявителем на этапе регистрации компании.

После поступления документы для регистрации проходят контроль в МИ ФНС России по ЦОД. ИФНС, куда подано заявление о регистрации, ежечасно проверяет наличие направленных в её адрес документов для регистрации ИП или юридического лица.

При наличии архива ИФНС его запрашивает, распаковывает и регистрирует. Документы рассматриваются в течение трёх дней. Решение готовится в виде электронного документа, подписанного УКЭП, и направляется заявителю согласно указанным им контактным данным, например на адрес электронной почты.

Новости — Официальный сайт администрации Волгограда

Подача электронных документов на государственную регистрацию юридических лиц и индивидуальных предпринимателей

Федеральной налоговой службой разработан сервис «Подача документов на государственную регистрацию в электронном виде»

Федеральной налоговой службой разработан сервис «Подача документов на государственную регистрацию в электронном виде», предоставляющий возможность направить в регистрирующий (налоговый) орган документы для государственной регистрации юридических лиц и индивидуальных предпринимателей в электронном виде с использованием сети Интернет.

        Услуги по представлению документов в регистрирующий орган для государственной регистрации юридических лиц и индивидуальных предпринимателей в электронном виде оказывают так же нотариусы и многофункциональные центры Волгоградской области (МФЦ).

        Для того, чтобы самостоятельно направить документы в электронном виде через сайт ФНС России www.nalog.ru или Единый портал государственных и муниципальных услуг www.gosuslugi.ru заявителю необходимо иметь электронную-цифровую подпись.

       С помощью бесплатного программного обеспечения, размещенного на сайте ФНС России, заполняются соответствующие заявления которые подписываются ЭЦП заявителя. Затем формируется транспортный контейнер с необходимыми документами и отправляется в регистрирующий орган (налоговую инспекцию).

       Для организаций и предпринимателей Волгоградской области регистрирующим органом является ИФНС России по Дзержинскому району г. Волгограда

       В установленный законом срок на указанный в заявлении электронный адрес от налогового органа придут документы с решением регистрирующего органа.

       Государственная пошлина за регистрацию в электронном виде не уплачивается!

       Кроме того, направление документов в электронном виде через сайт ФНС, Единый портал Госуслуг и МФЦ освобождает компанию или индивидуального предпринимателя от затрат на платные услуги, значительно экономит время на оформление документов и посещение регистрирующего органа для сдачи документов на бумаге.

Передача документов ИП и юр. лиц в налоговые органы в электронном виде

Федеральной налоговой службой разработан сервис «Подача документов на государственную регистрацию в электронном виде», предоставляющий возможность направить в налоговый орган при государственной регистрации юридических лиц и индивидуальных предпринимателей электронные документы с использованием сети Интернет.

Указанный сервис, начиная с 31 мая 2012 года, действует на территории всех субъектов Российской Федерации.

Направление электронных документов в налоговый орган осуществляется заявителем (одним из заявителей) либо нотариусом или лицом, замещающим временно отсутствующего нотариуса, засвидетельствовавшим подлинность подписи заявителя (заявителей), на соответствующем заявлении (уведомлении, сообщении) (далее — отправитель). Указанные лица должны иметь квалифицированный сертификат ключа проверки электронной подписи и соответствующий ему ключ электронной подписи (далее — СКП), являющиеся действительными на момент подписания электронного документа и на день направления электронных документов в регистрирующий орган.

СКП заявителям выдается аккредитованными удостоверяющими центрами, аккредитация которых действительна на день выдачи сертификата, входящими в сеть доверенных удостоверяющих центров, участником которой является ФНС России.

Нотариусам (лицам, замещающим временно отсутствующего нотариуса) СКП выдается удостоверяющим центром Федеральной нотариальной палаты.

Список удостоверяющих центров, входящих в сеть доверенных удостоверяющих центров, участником которой является ФНС России.

Сведения о размещении на сайтах нотариальных палат субъектов Российской Федерации информации о нотариусах, предоставляющих услуги по подаче электронных документов на государственную регистрацию.

Направление документов в электронном виде осуществляется с использованием электронного сервиса «Подача документов на государственную регистрацию в электронном виде», размещенного на сайте ФНС России, или через Единый портал государственных и муниципальных услуг в соответствующем сервисе раздела ФНС России, предусмотренном для направления электронных документов в налоговый орган. Там же можно ознакомиться с ходом рассмотрения налоговым органом представленных документов, а также получить документы, подготовленные налоговым органом в электронном виде.

Кроме того, сформированные налоговым органом в электронном виде документы будут также направлены заявителю по адресу электронной почты, указанному им при направлении документов. Документы на бумажном носителе выдаются регистрирующим органом по запросу заявителя.

Способы подачи документов в ФНС

В данной статье рассмотрим существующие способы предоставления документов  в налоговый орган для государственной  регистрации компаний  при создании (например, регистрация ООО) и внесении изменений в Устав и ЕГРЮЛ (Единый государственный реестр юридических лиц).

Регистрация ИП, будь то регистрация физ. лица в качестве ИП или изменение сведений об ИП, или прекращение деятельности физ. лица в качестве ИП также возможны нижеперечисленными способами.

Существует два основных способа подачи документов:  лично и удаленно.

Каждый из них в свою очередь включает несколько вариантов. Подача документов лично включает как собственно подачу документов лично заявителем (будь то учредитель или генеральный директор), так и через представителя по  доверенности, оформленной нотариально.  Подать документы лично  заявителем (или через представителя) можно обратившись непосредственно в налоговую инспекцию (для Москвы – МИФНС 46), так и через многофункциональный центр (МФЦ).

При подаче документов для регистрации юр. лица при создании лично заявителем (учредителем) имеется существенный плюс —  не требуется удостоверять подпись на заявлении у нотариуса.  Если учредителей у создаваемой организации несколько, то соответственно налоговый орган необходимо посетить всем вместе.

Если же Ваша фирма уже зарегистрирована и требуется внести изменения в Устав или ЕГРЮЛ без нотариального удостоверения подписи уже не обойтись даже в случае если заявитель (в данном случае заявителем является генеральный директор) предоставит документы  в МИФНС лично. В данном случае требуется проверка полномочий заявителя (генерального директора), что собственно и делает нотариус в момент удостоверения подписи на заявлении.  При удостоверении подписи на заявлении при регистрации изменений нотариус обязательно ознакомится в  актуальной выпиской, действующим уставом, свидетельством о гос. регистрации и постановке на учет, а также решением (протоколом) которым был назначен генеральный директор.

При подаче документов через представителя, как при регистрации создания, так и при регистрации изменений уже существующего юридического лица в любом случае потребуется удостоверить подпись на заявлении нотариально и подготовить  нотариальную доверенность. Данный способ особенно удобен, если заявителей несколько, так как не обязательно посещать нотариуса или налоговою одновременно.  Да и просто у занятого человека не всегда достаточно времени для подачи, а затем получения документов в ФНС – достаточно одного посещения нотариуса. При регистрации ООО или ИП под ключ компании, осуществляющие соответствующие услуги, как правило, предлагают вариант подачи документов в налоговую по доверенности – это быстрый и удобный вариант для заказчика.

К вариантам удаленной подачи документов относятся: подача документов по почте,  через курьерские службы DHL Express и Pony Express (данный вариант возможен пока только в пределах г. Москвы),  в электронном виде (самостоятельно или через нотариуса).

По почте документы направляются  письмом с объявленной ценностью и описью вложения. Подпись на заявлении при таком варианте подачи документов обязательно удостоверяется в нотариальном порядке.  Недостатком данного способа можно назвать не высокую степень надежности и достаточно долгий срок.

Способ подачи документов через курьерские службы появился совсем недавно. Курьерские службы DHL Express и Pony Express заключили соглашение с ФНС о доставке документов в налоговую и обратно заявителю.  Подпись на заявлении в данном случае удостоверяется нотариусом, а вот нотариальная доверенность не потребуется. Данный вариант схож с подачей документов почтовым отправлением, но его преимуществом является  более короткий срок выполнения.

Подача документов электронно (самостоятельно или через нотариуса) осуществляется посредством  интернет-сервиса «Подача электронных документов на государственную регистрацию». Для того чтобы воспользоваться данным способом необходимо иметь электронную подпись , т. е. получить ключ электронной подписи, выдаваемый сертифицированными удостоверяющими центрами.  Готовые документы будут отправлены Вам  электронно в  сформированном транспортном контейнере, а на бумажном носителе документы можно получить в налоговом органе или по почте, в зависимости от того какой вариант Вы указали в заявлении.

Для подачи документов в электронной форме через нотариуса  иметь свою электронную подпись не требуется  — нотариус формирует транспортный контейнер самостоятельно и подписывает своей электронной подписью.  Данная процедура не из дешевых, так как помимо стандартного удостоверения подписи на заявлении оплата берется за каждую страницу, отправляемых документов, а при первичной регистрации это – заявление как минимум 9 стр. , решение 1-2  стр., Устав  5 – 20 стр, гарантийное письмо от собственника 1―2 стр., квитанция об оплате гос. пошлины ― 1 стр.

При подаче документов лично ИП нотариально удостоверять подпись на заявлении не требуется при любых регистрационных действиях. При предоставлении  документов ИП  в регистрационный орган через представителя подпись удостоверяется нотариально и подготавливается нотариальная доверенность. При отправке документов через почту или курьерскую службу нотариальная доверенность не потребуется, а вот подпись на заявлении нужно будет удостоверить у нотариуса.

Какой бы способ подачи документов Вы не выбрали необходимо помнить, что подготовлены они должны быть специалистом, так как никто, ни оператор на почте, ни оператор курьерской службы не проверяет документы. К сожалению, и нотариусы в данном случае не берут на себя за ответственность за  правильность оформления отправляемых  документов, т. е. осуществляют услугу только технического характера ― принял ― передал. Компании же, осуществляющие услуги регистрации юр. лиц и ИП, как правило предоставляют гарантию, отвечая за правильность подготовленных документов, компенсируют Ваши затраты в случае совершенных ошибок или повторно осуществляют регистрацию за свой счет.

Возможно, Вам будет интересно…

 

 

Гражданам разрешили общаться с налоговой через МФЦ — Российская газета

У граждан появился еще один способ общения с налоговой службой — через многофункциональные центры госуслуг «Мои документы» (МФЦ). С их помощью можно будет направлять в инспекцию документы и получать ответ. Такие поправки в Налоговый кодекс РФ вступают с 29 октября.

Через МФЦ можно будет подать заявление о предоставлении льготы по транспортному и земельному налогам, а также налогу на имущество, уведомление о выбранных объектах для получения льгот и вычетов, сообщить о гибели или уничтожении объекта, чтобы на него не начислялся налог. Закон предусматривает, что при получении документов сотрудники МФЦ будут проставлять дату их приема, а в налоговую инспекцию отправлять самое позднее на следующий день.

Если человек захочет получить ответ от налоговых органов через МФЦ, ему потребуется заявить об этом в письменной форме. В этом случае налоговики должны будут передать документ в МФЦ не позже чем через два дня после того, как он будет готов.

Сегодня такими услугами пользуются жители Москвы и некоторых других регионов. Поправки делают их доступными по всей стране.

Но есть одно но: такой формат общения между налогоплательщиками и налоговиками будет возможен при условии, что региональные власти примут соответствующее решение.

Как разъясняла Федеральная налоговая служба (ФНС), граждане также смогут получать налоговые уведомления (в этом году их рассылка уже завершена) через многофункциональные центры независимо от того, какой налоговый орган их направил. Для этого достаточно будет обратиться в МФЦ с заявлением. Подать через «посредника» в лице сотрудника МФЦ можно будет и налоговую декларацию. Блок поправок, внесенных в Налоговый кодекс, также дает гражданам такое право.

При создании системы МФЦ в России в ее основу заложили принцип «одного окна», который позволяет освободить человека от необходимости ходить по инстанциям и стоять в очередях. От получателя требуется только подать заявление и получить результат в оговоренный срок, а всю остальную работу, в том числе межведомственное согласование, должны проводить сотрудники МФЦ и органы власти.

Сейчас по всей стране работают около 2,8 тысячи МФЦ и свыше 10,5 тысячи небольших офисов в малонаселенных пунктах. Услугами МФЦ охвачены около 98 процентов населения. Среднее время в очереди за предоставлением госуслуг — меньше 15 минут.

В мае 2019 года минэкономразвития сообщило о разработке концепции обновления системы многофункциональных центров под рабочим названием «МФЦ 2.0». По словам замглавы ведомства Саввы Шипова, в перспективе такие центры должны стать единственной площадкой очного взаимодействия граждан и бизнеса со всеми органами власти, начиная с муниципальных, заканчивая контрольно-надзорными и правоохранительными. «Сейчас функции по оказанию госуслуг фактически дублируются в МФЦ и ведомствах. Это лишняя трата ресурсов и не всегда удобно для граждан, поэтому фронт-офис должен остаться один — МФЦ», — уточнял он.

Электронная нормативная подача и рассмотрение

Некоммерческая / исследовательская работа, соответствующая руководству IND, должна быть представлена ​​либо в формате eCTD, либо в папке, содержащей файлы, не являющиеся eCTD
  • Для отправки теста eCTD следуйте инструкциям выше 
  • Для представлений, не относящихся к eCTD (только для некоммерческих представлений IND), выберите «CDER» в качестве центра и выберите «EIND» в качестве типа представления 
  • Выберите папку с документами eIND. Не отправляйте ни одного файла, так как он не пройдет проверку.Не включайте .exe, zip-файлы, файлы RAR или другие архивы, так как они не пройдут проверку.

* Рекомендуется использовать инструмент публикации eCTD для автоматического создания папки последовательности eCTD и файловой структуры. FDA не рекомендует конкретных поставщиков инструментов, однако их можно найти через поиск в Интернете.

Информацию о формате eCTD см. На сайте www.fda.gov/ectd

Вопросы и общая информация относительно подготовки заявок в электронном формате может быть направлена ​​в CDER по адресу esub @ fda.hhs.gov или CBER по адресу [email protected] Вопросы относительно подачи наборов данных в CDER можно отправлять по адресу [email protected]

Выписка

Наверх


Как отправить заявку на eCTD в FDA:

Инструкции по отправке ваших материалов eCTD можно найти в Спецификации передачи электронных материалов с использованием спецификаций eCTD.

FDA предпочитает подавать заявки через электронный шлюз FDA Electronic Submissions Gateway (ESG).Для получения дополнительной информации см. Веб-страницу Электронного шлюза отправки.

Для автоматической обработки ваших заявок используйте ESG и отправляйте заполненную форму FDA при каждой отправке. Включение правильно заполненной заполняемой формы FDA с действительным отформатированным представлением позволяет персоналу FDA быстрее получить доступ к заявке после того, как она успешно получена Центром через ESG.

Инструкции и адреса для отправки на физическом носителе, когда это становится необходимым, также включены в спецификацию.

Наверх


Защищенная электронная почта:

Защищенная электронная почта между CDER и промышленностью полезна для неформального общения, когда в сообщение может быть включена конфиденциальная информация (например, коммерческая тайна или информация о пациенте). Защищенную электронную почту не следует использовать для официальных нормативных документов (например, NDA, IND, поправок и дополнений).

Для получения дополнительной информации об установлении связи защищенной электронной почты с CDER, свяжитесь с SecureEmail @ fda.hhs.gov.


Предоставление данных цифровой электрокардиограммы (ЭКГ)

Почему:
FDA заинтересовано в получении доступа к данным кривой ЭКГ, собранным в ходе «окончательных» исследований воздействия лекарств на реполяризацию желудочков и аннотированным для интервальных измерений. Основа этого интереса подробно описана в концептуальном документе «Клиническая оценка удлинения интервала QT и проаритмического потенциала для неантиаритмических препаратов», подготовленного совместно с U.С. и канадских регулирующих органов и обсуждались на совместном заседании FDA / DIA в январе 2003 г.

Как:
В 2004 году FDA объявило о своем намерении принимать аннотированные данные кривых ЭКГ в электронном формате (XML) в соответствии со Стандартом аннотированных данных ЭКГ седьмого уровня (HL7), аккредитованным Американским национальным институтом стандартов. Вы можете найти более подробную информацию о стандарте сообщений ЭКГ и вспомогательных материалах, посетив страницу ЭКГ HL7 версии 3 и следуя «материалам обзора аннотационных сообщений ЭКГ».«Чтобы облегчить доступ к данным АЭКГ, FDA заключило Соглашение о совместных исследованиях и разработках (CRADA) с Mortara Instruments для разработки и внедрения цифрового хранилища данных для сбора, хранения и архивирования данных АЭКГ из контролируемых клинических испытаний. доступ к этому хранилищу данных для поддержки их оценки риска, связанного с новыми лекарствами.

Вы можете загрузить данные на склад для доступа FDA на складе Mortara ECG. По вопросам обращайтесь к менеджеру проекта в соответствующем отделе проверки.

Наверх

Набор для ELISA гамма IFN человека (ab174443)

Обзор

  • Название продукта

  • Метод обнаружения

    Колориметрический

  • точность

    Интра-анализ
    Образец n Среднее SD CV%
    Всего 5 1. 1%
    Между анализами
    Образец n Среднее SD CV%
    Всего 3 7.9%
  • Тип образца

    Супернатант клеточной культуры, сыворотка, плазма

  • Тип анализа

    Сэндвич (количественный)

  • Чувствительность

    470 пг / мл

  • Диапазон

    0. 468 нг / мл — 30 нг / мл

  • Восстановление

    Извлечение для конкретного образца
    Тип образца Среднее значение% Диапазон
    Сыворотка 102 98% — 104%
    Среды для культивирования клеток 86 77% — 93%
    Плазма гепатита 244 197% — 298%
    Плазма EDTA 122 117% — 124%
    Cit плазма 107 96% — 115%
  • Время анализа

    1ч 30м

  • Продолжительность анализа

    Одностадийный анализ

  • Активность видов

    Реагирует с: Человек

  • Обзор продукции

    Набор для ИФН-гамма-ИФН человека (ab174443) представляет собой 90-минутный сэндвич-ИФА с однократной промывкой, разработанный для количественного измерения ИФН-гамма-белка в надосадочной жидкости культуры клеток человека, образцах плазмы и сыворотки. Он использует нашу запатентованную технологию SimpleStep ELISA®. Определите количество гамма-интерферона человека с чувствительностью 470 пг / мл.

    Технология SimpleStep ELISA® использует захватывающие антитела, конъюгированные с аффинной меткой, которая распознается моноклональным антителом, используемым для покрытия наших планшетов SimpleStep ELISA®. Такой подход к сэндвич-ELISA позволяет формировать сэндвич-комплекс антитело-аналит за один этап, что значительно сокращает время анализа. Дополнительные сведения см. В сводке протокола SimpleStep ELISA® в разделе изображений.Наша технология SimpleStep ELISA® обеспечивает несколько преимуществ:

    — Протокол однократной промывки сокращает время анализа до 90 минут или меньше
    — Высокая чувствительность, специфичность и воспроизводимость превосходных антител
    — Полностью подтверждена на биологических образцах
    — Планшет с 96 лунками, разбиваемый на Стрипы 12 x 8 лунок

    384-луночный микропланшет SimpleStep ELISA® (ab203359) можно использовать в качестве альтернативы 96-луночному микропланшету, поставляемому с наборами SimpeStep ELISA®.

    СПЕЦИФИЧНОСТЬ АНАЛИЗА

    Этот набор распознает как нативный, так и рекомбинантный человеческий гамма-белок интерферон только в образцах сыворотки, плазмы и супернатанта клеточной культуры.

    Образцы мочи, молока, экстрактов клеток и тканей не тестировались с помощью этого набора.

    ПОМЕХИ ПРИ АНАЛИЗЕ

    Этот набор несовместим с образцами плазмы (гепарин).

  • Банкноты

    IFN гамма (IFNG) продуцируется лимфоцитами, активируемыми специфическими антигенами или митогенами.IFN гамма, помимо противовирусной активности, выполняет важные иммунорегуляторные функции. Это мощный активатор макрофагов, он оказывает антипролиферативное действие на трансформированные клетки и может усиливать противовирусные и противоопухолевые эффекты интерферонов типа I.

  • Платформа

    Микропланшет

Недвижимость

  • Инструкции по хранению

    Хранить при + 4 ° C. См. Протоколы.

  • Компоненты 1 x 96 тестов
    Захватывающее антитело человека к IFNG 10X 1 x 600 мкл
    Детектор антител к IFNG человека 10X 1 x 600 мкл
    Промывочный буфер 10X PT (ab206977) 1 x 20 мл
    Разбавитель антител CPI — блокатор HAMA (ab193969) 1 x 6 мл
    Лиофилизированный рекомбинантный белок IFNG человека 2 флакона
    Пластинчатые уплотнения 1 шт.
    Разбавитель образца NBP 1 x 20 мл
    Разбавитель образца NS (ab193972) 1 x 12 мл
    96-луночный микропланшет SimpleStep с предварительно нанесенным покрытием (ab206978) 1 шт.
    Стоп-раствор 1 x 12 мл
    TMB Development Solution 1 x 12 мл
  • Направления исследований

  • Функция

    Производится лимфоцитами, активированными специфическими антигенами или митогенами.IFN-гамма, помимо противовирусной активности, выполняет важные иммунорегуляторные функции. Это мощный активатор макрофагов, он оказывает антипролиферативное действие на трансформированные клетки и может усиливать противовирусные и противоопухолевые эффекты интерферонов типа I.

  • Специфичность ткани

    Высвобождается в основном из активированных Т-лимфоцитов.

  • Поражение болезнями

    У европейцев генетическая изменчивость IFNG связана с риском апластической анемии (АА) [MIM: 609135].АК — редкое заболевание, при котором уменьшение количества циркулирующих клеток крови происходит в результате повреждения пула стволовых клеток в костном мозге. У большинства пациентов поражение стволовых клеток вызвано аутоиммунной атакой. Т-лимфоциты, активируемые эндогенным или экзогенным и чаще всего неизвестным антигенным стимулом, секретируют цитокины, включая IFN-гамма, которые, в свою очередь, способны подавлять кроветворение.

  • Сходство последовательностей

    Относится к семейству интерферонов типа II (или гамма).

  • Посттрансляционный


    Модификации

    Протеолитический процессинг приводит к С-концевой гетерогенности с белками, оканчивающимися альтернативно на Gly-150, Met-157 или Gly-161.

  • Сотовая локализация

    Секретно.

  • Информация от UniProt
  • Альтернативные названия

    • IFN гамма
    • Иммунный к IFN
    • IFN, иммунный
    • IFN-гамма
    • IFNG
    • IFNG_HUMAN
    • Иммунный интерферон
    • Интерферон гамма
    • Интерферон II типа

    посмотреть все

  • Ссылки на базу данных

Изображения

  • Другое — набор для ИФН гамма-ИФН человека (ab174443)

    Технология

    SimpleStep ELISA позволяет формировать комплекс антитело-антиген за один этап, сокращая время анализа до 90 минут. Добавьте образцы или стандарты и смесь антител в лунки сразу, инкубируйте, промойте и добавьте окончательный субстрат. См. Подробное пошаговое руководство в протоколе.

  • Пример стандартной кривой IFNG для измерений образцов супернатанта клеточной культуры.

    Значения данных за вычетом фона (среднее +/- SD) нанесены на график.

  • Пример стандартной кривой гамма-интерферона человека в разбавителе образца NS (для образцов супернатанта)

    Стандартная кривая интерферон-гамма была построена, как описано.Значения исходных данных показаны в таблице. Значения данных за вычетом фона (среднее +/- SD) нанесены на график.

  • Пример стандартной кривой IFNG для измерений образцов сыворотки / плазмы.

    Значения данных за вычетом фона (среднее +/- SD) нанесены на график.

  • Пример стандартной кривой гамма-интерферона человека в разбавителе образца NBP (для образцов сыворотки / плазмы)

    Стандартная кривая интерферон-гамма была построена, как описано.Значения исходных данных показаны в таблице. Значения данных за вычетом фона (среднее +/- SD) нанесены на график.

  • Сравнение секретируемого IFNG в нестимулированных и PHA-стимулированных PBMC человека.

    PBMC выращивали в отсутствие или в присутствии фитогемагглютинина (PHA) в течение 2 дней. Концентрации IFNG измеряли в супернатантах культур клеток, разведенных в 12 и 6 раз, нестимулированных PBMC и стимулированных PBMC, а также в среде.Значения исходных данных (среднее +/- SD, n = 3) нанесены на график. Пунктирная линия соответствует нулевому фону образца.

  • Интерполированные концентрации секретируемого IFNG в нестимулированных и PHA-стимулированных PBMC человека.

    Концентрации IFNG были интерполированы из значений данных, показанных на рисунке 3, с использованием стандартной кривой IFNG и скорректированы на разбавление образца. Средняя концентрация IFNG составила 1.8 нг / мл в супернатантах нестимулированных PBMC и 177,2 нг / мл в супернатантах стимулированных PBMC.

  • Линейность разбавления определяется на основе интерполированных значений стандартной кривой. Линейность разбавления определяет интервал концентрации образца, в котором интерполированные целевые концентрации прямо пропорциональны разбавлению образца.

    Нативный гамма-интерферон измеряли в образцах супернатанта культуры клеток PBMC, стимулированных PHA, в серии 2-кратных разведений.Разведения образцов производятся в Sample Diluent NS.
    Рекомбинантный гамма-интерферон вводили в образцы сыворотки и плазмы человека (цитрат и ЭДТА) и разводили в серии 2-кратных разведений в разбавителе образцов NBP.

    Чистые объединенные образцы сыворотки и плазмы (ЭДТА и цитрат) от здоровых доноров измеряли в двух экземплярах. Все значения были ниже определяемого диапазона анализа.

    Чистая сыворотка от десяти отдельных здоровых людей-доноров женского / мужского пола была измерена в двух экземплярах. Все значения были ниже определяемого диапазона анализа.

Таблицы данных и документы

  • SDS скачать

    Страна / регион Выберите страну / регион

    Язык Выбор языка

  • Скачать брошюру

Список литературы (6)

ab174443 упоминается в 6 публикациях.

  • Wu J et al. lncRNA-CD160 снижает иммунитет CD8 + Т-клеток через эпигенетические механизмы при инфекции вирусом гепатита B. Oncol Lett 20: 235-247 (2020). PubMed: 32565950
  • Шен DD и др. Капсулы Liuweibuqi улучшают легочную функцию при стабильной хронической обструктивной болезни легких с синдромом дефицита ци легких путем регулирования STAT4 / STAT6 и MMP-9 / TIMP-1. Фарм Биол 57: 744-752 (2019). PubMed: 31679431
  • Ислам M и др. Значение оси RANTES-CCR5 и связанной нижестоящей иммуномодуляции в патогенезе денге: исследование из Гувахати, Индия. J Med Virol 91: 2066-2073 (2019). PubMed: 31368534
  • Qiao HB et al. Эффекты интерлейкина 2 и rAd-p53 при лечении глиобластомы. Mol Med Rep 17: 4853-4859 (2018). PubMed: 29328445
  • Yamamoto M et al. Стадия дакриоаденита и сиаладенита, связанных с IgG4, по среде цитокинов сыворотки. Mod Rheumatol Н / Д: 1-5 (2018). PubMed: 29385874
  • Costantini A et al. Прогностическая роль плазматических биомаркеров в распространенном немелкоклеточном раке легкого, леченном ниволумабом. Онкоиммунология 7: e1452581 (2018). PubMed: 30221046

Отзывы клиентов, вопросы и ответы

Частота цитидинового редактирования вирусной ДНК по-разному зависит от Vpx и нуклеозидов во время инфицирования дендритных клеток ВИЧ-1 или SIVMAC

% PDF-1.4 % 1 0 объект > эндобдж 5 0 obj /Заголовок /Предмет / Автор /Режиссер / Ключевые слова / CreationDate (D: 20210421021401-00’00 ‘) / ModDate (D: 20160502105514 + 02’00 ‘) / PDFВерсия (1.4) >> эндобдж 2 0 obj > эндобдж 3 0 obj > эндобдж 4 0 obj > поток 2016-05-02T15: 18: 31 + 02: 002016-05-02T15: 18: 31 + 02: 00Arbortext Advanced Print Publisher 11.0.2857 / W Unicode-x64

  • Частота редактирования вирусной ДНК цитидином зависит от Vpx и нуклеозиды во время инфицирования дендритных клеток ВИЧ-1 или SIVMAC
  • Суан-Ни Нгуен, Вероник Барато, Наннан Ву, Грегори Бергер, Андреа Чимарелли
  • конечный поток эндобдж 6 0 obj > эндобдж 7 0 объект > эндобдж 8 0 объект > эндобдж 9 0 объект > эндобдж 10 0 obj > эндобдж 11 0 объект > эндобдж 12 0 объект > эндобдж 13 0 объект > эндобдж 14 0 объект > эндобдж 15 0 объект > эндобдж 16 0 объект > эндобдж 17 0 объект > эндобдж 18 0 объект > эндобдж 19 0 объект > эндобдж 20 0 объект > эндобдж 21 0 объект > эндобдж 22 0 объект > эндобдж 23 0 объект > эндобдж 24 0 объект > эндобдж 25 0 объект > эндобдж 26 0 объект > эндобдж 27 0 объект > эндобдж 28 0 объект > эндобдж 29 0 объект > эндобдж 30 0 объект > эндобдж 31 0 объект > эндобдж 32 0 объект > эндобдж 33 0 объект > эндобдж 34 0 объект > эндобдж 35 0 объект > эндобдж 36 0 объект > эндобдж 37 0 объект > эндобдж 38 0 объект > эндобдж 39 0 объект > эндобдж 40 0 объект > эндобдж 41 0 объект > эндобдж 42 0 объект > эндобдж 43 0 объект > эндобдж 44 0 объект > эндобдж 45 0 объект > эндобдж 46 0 объект > эндобдж 47 0 объект > эндобдж 48 0 объект > эндобдж 49 0 объект > эндобдж 50 0 объект > эндобдж 51 0 объект > эндобдж 52 0 объект > эндобдж 53 0 объект > эндобдж 54 0 объект > эндобдж 55 0 объект > эндобдж 56 0 объект > эндобдж 57 0 объект > эндобдж 58 0 объект > эндобдж 59 0 объект > эндобдж 60 0 объект > эндобдж 61 0 объект > эндобдж 62 0 объект > эндобдж 63 0 объект > эндобдж 64 0 объект > эндобдж 65 0 объект > эндобдж 66 0 объект > эндобдж 67 0 объект > эндобдж 68 0 объект > эндобдж 69 0 объект > эндобдж 70 0 объект > эндобдж 71 0 объект > эндобдж 72 0 объект > эндобдж 73 0 объект > эндобдж 74 0 объект > эндобдж 75 0 объект > эндобдж 76 0 объект > эндобдж 77 0 объект > эндобдж 78 0 объект > эндобдж 79 0 объект > эндобдж 80 0 объект > эндобдж 81 0 объект > эндобдж 82 0 объект > эндобдж 83 0 объект > эндобдж 84 0 объект > эндобдж 85 0 объект > эндобдж 86 0 объект > эндобдж 87 0 объект > эндобдж 88 0 объект > эндобдж 89 0 объект > эндобдж 90 0 объект > эндобдж 91 0 объект > эндобдж 92 0 объект > эндобдж 93 0 объект > эндобдж 94 0 объект > эндобдж 95 0 объект > эндобдж 96 0 объект > эндобдж 97 0 объект > эндобдж 98 0 объект > эндобдж 99 0 объект > эндобдж 100 0 объект > эндобдж 101 0 объект > эндобдж 102 0 объект > эндобдж 103 0 объект > эндобдж 104 0 объект > эндобдж 105 0 объект > эндобдж 106 0 объект > эндобдж 107 0 объект > эндобдж 108 0 объект > эндобдж 109 0 объект > эндобдж 110 0 объект > эндобдж 111 0 объект > эндобдж 112 0 объект > эндобдж 113 0 объект > эндобдж 114 0 объект > эндобдж 115 0 объект > эндобдж 116 0 объект > эндобдж 117 0 объект > эндобдж 118 0 объект > эндобдж 119 0 объект > эндобдж 120 0 объект > эндобдж 121 0 объект > эндобдж 122 0 объект > эндобдж 123 0 объект > эндобдж 124 0 объект > эндобдж 125 0 объект > эндобдж 126 0 объект > эндобдж 127 0 объект > эндобдж 128 0 объект > эндобдж 129 0 объект > эндобдж 130 0 объект > эндобдж 131 0 объект > эндобдж 132 0 объект > эндобдж 133 0 объект > эндобдж 134 0 объект > эндобдж 135 0 объект > эндобдж 136 0 объект > эндобдж 137 0 объект > эндобдж 138 0 объект > эндобдж 139 0 объект > эндобдж 140 0 объект > эндобдж 141 0 объект > эндобдж 142 0 объект > эндобдж 143 0 объект > эндобдж 144 0 объект > эндобдж 145 0 объект > эндобдж 146 0 объект > эндобдж 147 0 объект > эндобдж 148 0 объект > эндобдж 149 0 объект > эндобдж 150 0 объект > эндобдж 151 0 объект > эндобдж 152 0 объект > эндобдж 153 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC / ImageB / ImageI] >> эндобдж 154 0 объект > поток х ڝ XɎ6 + Hm ты ҷ q. 07ww / 8ǘ

    Определение механизма, с помощью которого IFN-β доурегулирует экспрессию c-myc в клетках меланомы человека: основная роль полинуклеотидфосфорилазы (hPNPase old-35)

    Регулирование

    hPNPase old-35 Экспрессия мРНК c- myc с помощью IFN- β

    Чтобы определить потенциальную корреляцию между регуляцией экспрессии hPNPase old-35 и c- myc с помощью IFN- β , HO- 1, клетки меланомы человека WM35 и MeWo и SV40 T / t Ag-иммортализованные меланоциты человека (FM-516-SV, далее обозначаемый как FM-516) обрабатывали 1000 ед / мл IFN- β в разное время. в диапазоне от 12 до 48 часов, а экспрессия мРНК hPNPase old-35 и c- myc была определена с помощью Нозерн-блоттинга (рис. 1а).В базовых условиях экспрессия мРНК hPNPase old-35 была незначительной или едва заметной в различных типах клеток. После обработки IFN- β было обнаружено заметное увеличение экспрессии мРНК hPNPase old-35 через 12 часов после обработки. В клетках HO-1, WM-35 и FM-516 экспрессия мРНК hPNPase old-35 постепенно снижалась со временем, и через 48 часов после обработки IFN- β возвращалась к базальному уровню.Однако в клетках MeWo экспрессия мРНК hPNPase old-35 сохранялась даже через 48 часов после обработки IFN- β . В то время как экспрессия мРНК hPNPase old-35 была увеличена за счет IFN- β , экспрессия мРНК c- myc снизилась при той же обработке, и была временная корреляция в регуляции экспрессии этих двух мРНК с помощью IFN. — β . Значительное зависимое от времени снижение экспрессии мРНК c- myc , опосредованное IFN- β , также было очевидным во всех четырех клеточных линиях.В клетках MeWo при сохранении экспрессии мРНК hPNPase old-35 экспрессия мРНК c- myc полностью исчезла через 48 ч после обработки IFN- β .

    Рисунок 1

    Обработка IFN- β активирует hPNPase old-35 и подавляет мРНК и белки c- myc . ( a ) Различные клеточные линии обрабатывали IFN- β (1000 Ед / мл) в течение указанных периодов времени и экспрессии hPNPase old-35 , c- myc и МРНК GAPDH анализировали методом Нозерн-блоттинга.( b ) Указанные клетки обрабатывали IFN- β (1000 Ед / мл) в течение 1 и 2 дней или 1, 10, 100 или 1000 Ед / мл IFN- β в течение 2 дней и Экспрессию hPNPase old-35 , Myc и EF1- α белков анализировали с помощью Вестерн-блоттинга. ( c ) Клетки фибросаркомы человека 2fTGH и его четыре варианта, U1A (Tyk2-), U3A (STAT1-), U4A (JAK1-) и U5A (IFN2AR-), обрабатывали IFN- β (1000 Ед / мл) в течение 2 дней, и экспрессию указанных белков анализировали с помощью вестерн-блоттинга.

    Результаты экспрессии мРНК были подтверждены на уровне белка с помощью вестерн-блоттинга (фиг. 1b).В базовых условиях белок hPNPase old-35 не обнаруживался во всех четырех клеточных линиях. При обработке IFN- β экспрессия белка hPNPase old-35 была заметно индуцирована и сохранялась даже через 2 дня после обработки. За исключением клеток MeWo, соответствующие уровни мРНК снижались через 48 ч в клетках HO-1, WM-35 и FM-516. Уровни белка Myc также показали временное снижение после обработки IFN- β .

    Была также очевидна прямая корреляция между индуцированными IFN- β дозозависимыми изменениями в hPNPase old-35 и белках Myc. В клетках HO-1 и WM-35 индукция hPNPase old-35 и подавление Myc были обнаружены при 100 и 1000 Е / мл IFN- β , но не при 1 или 10 Е / мл ( Рисунок 1б). В клетках MeWo и FM-516 изменения в уровнях белка можно было обнаружить с помощью всего лишь 1 или 10 Ед / мл IFN- β , соответственно.В обработанных IFN- β клетках FM-516 в дополнение к полосе Myc была обнаружена более быстро мигрирующая полоса, которая может представлять продукт деградации белка Myc. Эти результаты подтверждают, что концентрация IFN- β , необходимая для повышения регуляции hPNPase old-35 , также необходима для подавления белка Myc, что указывает на потенциальную кооперативную регуляцию экспрессии этих двух генов.

    Регуляция экспрессии hPNPase old-35 и Myc с помощью IFN- β была подтверждена в клетках фибросаркомы человека 2fTGH и в ее четырех вариантах, U1A (Tyk2-), U3A (STAT1-), U4A (JAK1-) и U5A (IFNAR2-), которые имеют мутации в различных молекулах, участвующих в пути передачи сигналов IFN. 13 Как показано на рисунке 1C, повышающая регуляция hPNPase old-35 и подавление Myc IFN- β наблюдались только в родительских клетках 2fTGH, но не в его мутантных клонах, которые не реагируют на IFN типа I.

    IFN-

    β подавляет рост клеток меланомы и меланоцитов

    Влияние IFN- β на рост клеток HO-1, WM35, MeWo и FM-516 анализировали с помощью стандартных анализов выживаемости клеток MTT (рисунок 2а). Клетки обрабатывали 1, 10, 100, 1000 и 2000 Ед / мл IFN- β в течение до 6 дней. Клетки HO-1, WM-35 и FM-516 не реагировали на 1 или 10 Е / мл IFN- β . При дозе 100 Ед / мл наблюдалось значительное ингибирование роста клеток, а при дозах 1000 и 2000 Ед / мл наблюдалось ингибирование роста примерно на 90% через 6 дней после обработки IFN- β . Рост клеток MeWo значительно подавлялся даже при использовании 1 ед. / Мл IFN- β , который становился маркированным 100 или более ед. / Мл IFN- β .Эти исследования документально подтверждают прямую корреляцию между изменениями экспрессии генов и уровнями IFN- β , необходимыми для того, чтобы вызвать ингибирование роста в конкретных клетках-мишенях. Это открытие особенно актуально в случае клеток MeWo, в которых соответствующие изменения можно было наблюдать даже с 1 ед. / Мл IFN- β .

    Фиг. 2

    Обработка IFN- β подавляет рост и образование колоний клеток меланомы человека и иммортализованных меланоцитов человека. ( a ) Различные типы клеток обрабатывали указанными концентрациями IFN- β , и жизнеспособность клеток оценивали стандартным анализом MTT на 3 и 6 дни после обработки.Данные представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение. из трех независимых экспериментов, каждый из которых был проведен в октапликатах. ( b ) Различные клетки высевали на чашки диаметром 6 см при плотности 1000 клеток на чашку и затем обрабатывали указанными концентрациями IFN- β . Колонии подсчитывали через 2 недели. По крайней мере, четыре чашки использовались для каждой точки данных в каждом эксперименте. Данные представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение. из двух независимых экспериментов

    Результаты, полученные с использованием анализов жизнеспособности клеток, были подтверждены анализами образования колоний (рис. 2b).В клетках HO-1, WM-35 и FM-516 образование колоний значительно ингибировалось 100 ед. / Мл IFN- β , а при 1000 ед. / Мл образование колоний ингибировалось более чем на 90%. В случае клеток MeWo 10 Ед / мл IFN- β значительно ингибировали образование колоний, а 1000 Ед / мл IFN- β образование колоний ингибировалось более чем на 95%.

    Анализ клеточного цикла был проведен для характеристики ингибирования роста. Обработка IFN- β (1000 Ед / мл) в клетках HO-1, WM-35, MeWo и FM-516 привела к начальной (день 1) остановке клеточного цикла в фазе клеточного цикла G 1 , с сопутствующее снижение фазы синтеза ДНК, что подтверждается сокращением фазы S (таблица 1).При более длительном воздействии IFN- β клетки постепенно становились апоптозными, о чем свидетельствует постоянное увеличение популяции клеток sub-G 1 (A 0 ).

    Таблица 1 IFN- β индуцирует G 1 остановку клеточного цикла и апоптоз в клетках меланомы и нормальных меланоцитах

    hPNPase old-35 регулирует IFN- β -опосредованное подавление Поскольку hPNPase old-35 является 3 ‘, 5’-экзорибонуклеазой и одним из ее субстратов является мРНК c- myc , мы проверили, индуцируется ли hPNPase old-35 под действием IFN- β , способствует подавлению Myc. Мы определили siRNA, активно подавляющую hPNPase old-35 , и создали лентивирус, экспрессирующий эту siRNA. Стабильные клоны на фоне HO-1, экспрессирующие либо контрольную миРНК, либо hPNPase old-35 миРНК, были получены селекцией с бластицидином. Как показано на рисунке 3A, были идентифицированы три клона, клон 1, 4 и 5, которые экспрессируют hPNPase old-35 -siRNA, которые значительно ингибировали IFN- β индукцию hPNPase old. -35 , причем клон 1 является наиболее эффективным, вызывая почти 100% ингибирование индукции hPNPase old-35 .Клон, экспрессирующий контрольную миРНК, сохранял способность индуцировать hPNPase old-35 после обработки IFN- β . Примечательно, что в то время как родительские клетки HO-1 и клон, экспрессирующий контрольную siRNA, могли подавлять Myc в ответ на обработку IFN- β , все три клона, экспрессирующих siRNA hPNPase old-35 , утратили эту способность. Однако эти клоны сохранили свою способность отвечать на IFN- β , о чем свидетельствует индукция другого IFN-индуцируемого гена mda- 5.Эти данные показывают, что hPNPase old-35 специфически опосредует подавление Myc, но не модуляцию других генов IFN- β . Наблюдение аналогичных ответов у нескольких клонов исключает возможность того, что наблюдаемые эффекты являются просто следствием клональной изменчивости в ответ на IFN- β .

    Фигура 3

    клонов HO-1, экспрессирующих hPNPase old-35 siRNA устойчивы к опосредованной IFN- β подавлению регуляции c- myc .( a ) Родительские клетки HO-1, клоны HO-1, экспрессирующие hPNPase old-35 siRNA (old-35-si клон 1, клон 4 и клон 5) и клоны HO-1, экспрессирующие контрольную siRNA (контрольный-si клон 1) обрабатывали IFN- β (1000 Ед / мл) в течение 2 дней и экспрессировали hPNPase old-35 , Myc, MDA-5 и EF1- α белки анализировали методом вестерн-блоттинга. (b ) Для анализа периода полужизни мРНК c- myc клетки либо не обрабатывали, либо обрабатывали IFN- β (1000 Ед / мл) в течение 24 часов, а затем подвергали действию Act-D (5 μ г / мл) для 0.5, 1, 2, 4 и 8 часов, после чего клетки собирали для экстракции общей РНК и Нозерн-блот-анализа с использованием указанных зондов

    Период полужизни мРНК c- myc с или без IFN- β Обработку анализировали в клетках HO-1 и контрольной siRNA и hPNPase old-35 -siRNA-экспрессирующих клонах (рис. 3b). Клетки обрабатывали IFN- β (1000 Ед / мл) в течение 24 часов, а затем подвергали действию актиномицина D (Act D; 5 μ мкг / мл) в течение 0.5–8 ч (рис. 3б). В необработанных клетках период полужизни мРНК c- myc составлял ~ 1 час. В клетках HO-1 и контрольных клонах, экспрессирующих миРНК, обработка IFN- β приводила к значительному подавлению мРНК c- myc , так что через 0,5 часа обработки Act D в этих клетках не могла быть обнаружена мРНК c- myc . клетки. Это подавление коррелировало с усилением мРНК hPNPase old-35 , период полужизни которой составлял ~ 4 часа. Напротив, обработка IFN- β не индуцировала экспрессию мРНК hPNPase old-35 в hPNPase old-35 -siRNA-экспрессирующие клоны и период полужизни c- myc МРНК осталась неизменной по сравнению с контрольными необработанными клетками (рис. 3b).Эти данные показывают, что в базовых условиях hPNPase old-35 не экспрессируется и, следовательно, не влияет на оборот мРНК c- myc . Однако при обработке IFN- β этот фермент индуцируется, и он разрушает мРНК c- myc .

    Устойчивость

    hPNPase old-35 -siRNA клонов к IFN- β -опосредованному подавлению роста

    Сверхэкспрессия hPNPase old-35 вызывает ингибирование роста клеток c- myc — положительный регулятор роста клеток, позволяющий клеткам проходить фазу G 1 клеточного цикла. Основываясь на этих соображениях, мы проверили, может ли отсутствие этих двух событий в клонах, экспрессирующих hPNPase old-35 -siRNA, сделать их устойчивыми к ингибированию роста, опосредованному IFN- β . Как показано на фиг. 4b, в то время как родительские клетки HO-1 и контрольные клоны, экспрессирующие siRNA, были чувствительны к обработке IFN- β , по данным стандартных анализов МТТ, hPNPase old-35 -siRNA- экспрессирующие клоны показали значительную устойчивость к IFN- β , которая стала более выраженной после 6 дней обработки IFN- β .Эти результаты были подтверждены анализами образования колоний, которые также продемонстрировали значительную устойчивость клонов, экспрессирующих hPNPase old-35 -siRNA, к ингибированию образования колоний, индуцированному IFN- β (фиг. 5).

    Фигура 4

    клонов HO-1, экспрессирующих hPNPase old-35 siRNA устойчивы к опосредованному IFN- β ингибированию роста, которое может быть обращено siRNA c- myc . ( a ) Клетки HO-1 трансфицировали либо контрольной миРНК, либо миРНК c- myc , и экспрессию белков Myc и EF1- α анализировали с помощью вестерн-блоттинга.( b ) Клетки HO-1, клоны HO-1, экспрессирующие hPNPase old-35 siRNA (old-35-si клон 1, клон 4 и клон 5) и клоны HO-1, экспрессирующие контрольную siRNA ( control-si clone 1) были либо ложно-трансфицированы (контроль), либо трансфицированы контрольной siRNA или c- myc siRNA, а затем обработаны указанными концентрациями IFN- β , и жизнеспособность клеток оценивалась стандартным анализом MTT на 3-й и 6-й день после лечения. Данные представляют собой среднее значение ± S.D. трех независимых экспериментов, каждый из которых был проведен в октапликатах.

    . с помощью миРНК c- myc . Клетки HO-1, клоны HO-1, экспрессирующие hPNPase old-35 siRNA (old-35-si клон 1, клон 4 и клон 5) и клоны HO-1, экспрессирующие контрольную siRNA (control-si клон 1 ) были либо ложно-трансфицированы (контроль), либо трансфицированы контрольной миРНК или миРНК c- myc , а затем обработаны указанными концентрациями IFN- β , и был проведен анализ образования колоний. Колонии подсчитывали через 2 недели. По крайней мере, четыре чашки использовались для каждой точки данных в каждом эксперименте. Данные представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение. из двух независимых экспериментов

    Результаты, полученные при анализе выживания клеток и образования колоний, были подтверждены анализом клеточного цикла с использованием проточной цитометрии. Как показано на фиг. 6 и в таблице 2, родительские клетки HO-1 и контрольные клоны, экспрессирующие siRNA, показали начальную остановку G 1 , и в конечном итоге клетки подверглись апоптозу. Однако hPNPase old-35 -siRNA-экспрессирующие клоны показали заметную устойчивость к ингибированию роста IFN- β без статистически значимого увеличения фазы G 1 или количества A 0 клетки.В этих контекстах блокирование экспрессии hPNPase old-35 предотвращает остановку клеточного цикла и апоптоз, индуцированный IFN- β .

    Фигура 6

    клонов HO-1, экспрессирующих hPNPase old-35 siRNA устойчивы к IFN- β -индуцированной G 1 остановке клеточного цикла и апоптозу. Клетки HO-1, клоны HO-1, экспрессирующие hPNPase old-35 siRNA (old-35-si клон 1 и клон 4) и клоны HO-1, экспрессирующие контрольную siRNA (контрольный si-клон 1), обрабатывались с IFN- β (1000 Ед / мл) и клеточный цикл анализировали с помощью проточной цитометрии на 1-й и 3-й день после обработки

    Таблица 2 Клоны HO-1, экспрессирующие hPNPase old-35 siRNA устойчивы к IFN- β -индуцированный G 1 остановка клеточного цикла и апоптоз, которые могут быть ингибированы c-myc siRNA

    Подтвердить, что механизм, лежащий в основе устойчивости hPNPase old-35 -siRNA -экспрессирующие клоны IFN- β опосредованы их неспособностью подавлять c- myc , клетки HO-1 и контрольные siRNA- и hPNPase old-35 -siRNA-экспрессирующие клоны были трансфецированы либо контроль или миРНК c- myc и обработанные IFN- β , и были выполнены анализы жизнеспособности клеток, образования колоний и клеточного цикла. Трансфекция миРНК c- myc привела к заметному подавлению активности белка Myc (рис. 4а), что указывает на подлинность его функции. Жизнеспособность клеток и способность к образованию колоний были сходными между контрольными нетрансфицированными клетками и контрольными клетками, трансфицированными siRNA (Фигуры 4b и 5), с hPNPase old-35 -siRNA-экспрессирующие клоны, демонстрирующие устойчивость к IFN- β и Клетки HO-1 и контрольные клоны, экспрессирующие siRNA, демонстрируют чувствительность к IFN- β .Трансфекция только миРНК c- myc снижает жизнеспособность клеток и способность образовывать колонии всех клеточных линий, а вместе с IFN- β заметно ингибирует жизнеспособность клеток и способность образовывать колонии во всех клеточных линиях, включая hPNPase. old-35 -siRNA-экспрессирующие клоны (фигуры 4b и 5). Анализ клеточного цикла также показал, что трансфекция миРНК c- myc рендерила hPNPase old-35 -siRNA-экспрессирующие клоны, чувствительные к остановке клеточного цикла и апоптозу, опосредованной IFN- β (Таблица 2). В целом, эти данные показывают, что ингибирование подавления экспрессии c- myc в hPNPase old-35 -siRNA-экспрессирующие клоны придает их устойчивость к ингибированию роста IFN- β .

    Устойчивость клонов, сверхэкспрессирующих c

    -myc , к опосредованному IFN- β ингибированию роста

    Затем мы оценили участие подавления c- myc в опосредованном IFN- β ингибировании роста. Для этой цели были разработаны стабильные клоны НО-1, сверхэкспрессирующие Myc (НО-1-Myc), путем трансфекции вектором экспрессии c -myc и отбора с помощью гигромицина.Аналогичным образом были получены контрольные устойчивые к гигромицину клоны (HO-1-Hygro). На рис. 7а представлены данные двух репрезентативных клонов НО-1, сверхэкспрессирующих Myc. Обработка IFN- β в течение 3 дней приводила к заметному подавлению эндогенного белка Myc в клонах HO-1-Hygro (фигура 7a). Однако экзогенный белок Myc в клонах HO-1-Myc существенно не подавлялся IFN- β . Конструкция экспрессии c- myc содержит только открытую рамку считывания, а не 3′- или 5′-нетранслируемые области (UTR) кДНК.Неспособность IFN- β подавлять экзогенный c- myc указывает на то, что 3′-UTR эндогенной последовательности c- myc может придавать его чувствительность к hPNPase old-35 с hPNPase old-35 представляет собой 3 ‘, 5’ экзорибонуклеазу. Рост клонов HO-1-Hygro (клоны 1 и 4) значительно ингибировался обработкой IFN- β (1000 Ед / мл), как было подтверждено анализами жизнеспособности клеток (фигура 7c).Клоны HO-1-Myc, сверхэкспрессирующие Myc, обеспечивали частичную, но значительную защиту от ингибирования роста, опосредованного IFN- β (фиг. 7c). Эти результаты были также подтверждены анализами образования колоний (рис. 7b). Клоны HO-1-Myc, но не клоны HO-1-Hygro, показали устойчивость к ингибированию образования колоний IFN- β . Эти результаты указывают на то, что модуляция c- myc IFN- β является важным фактором, связанным с индуцированным IFN- β подавлением роста в клетках HO-1.

    Фиг. 7

    Клоны HO-1, сверхэкспрессирующие Myc, устойчивы к опосредованному IFN- β ингибированию роста и образования колоний. ( a ) Экспрессию Myc и EF1- α анализировали с помощью Вестерн-блоттинга в контрольных клонах HO-1 (HO-1-Hygro-clone-1 и HO-1-Hygro-clone-4) и Myc-сверхэкспрессии клоны (HO-1-Myc-clone-1 и HO-1-Myc-clone-2), обработанные или не обработанные IFN- β (1000 Ед / мл) в течение 2 дней. ( b ) Контрольные клоны HO-1 (HO-1-Hygro-clone-1 и HO-1-Hygro-clone-4) и клоны со сверхэкспрессией Myc (HO-1-Myc-clone-1 и HO-1 -Myc-clone-2) обрабатывали указанными концентрациями IFN- β и проводили анализы образования колоний.Колонии подсчитывали через 2 недели. По крайней мере, четыре чашки использовались для каждой точки данных в каждом эксперименте. Данные представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение. двух независимых экспериментов. ( c ) Контрольные клоны HO-1 (HO-1-Hygro-clone-1 и HO-1-Hygro-clone-4) и клоны со сверхэкспрессией Myc (HO-1-Myc-clone-1 и HO-1 -Myc-clone-2) обрабатывали указанными концентрациями IFN- β , и жизнеспособность клеток оценивали стандартным анализом MTT на 3 и 6 день после обработки. Данные представляют собой среднее значение ± S.D. трех независимых экспериментов, каждый из которых был проведен в октапликатах

    Эти интересные результаты были подтверждены анализом клеточного цикла. Обработка IFN- β индуцировала начальную остановку G 1 и, в конечном итоге, апоптоз в клонах HO-1-Hygro (таблица 3). Клоны HO-1-Myc показали небольшое увеличение процента G 1 фазы и апоптотических клеток после обработки IFN- β , что не было статистически значимым. Эти результаты показывают, что как повышающая регуляция hPNPase old-35 , так и понижающая регуляция c- myc являются центральными событиями в опосредовании способности IFN- β ингибировать рост клеток меланомы человека (фиг. 8).

    Таблица 3 Клоны HO-1, сверхэкспрессирующие Myc, устойчивы к IFN- β -индуцированному G 1 остановка клеточного цикла и апоптоз Рисунок 8

    Схематическая модель регуляции hPNPase old-35 и c- myc по IFN- β . Связывание IFN- α / β с родственными рецепторами IFNAR1 и IFNAR2 приводит к перекрестному фосфорилированию и активации TYK2 и JAK1 с последующим фосфорилированием STAT1 и STAT2.Фосфорилированный гетеродимер STAT1 / STAT2 перемещается в ядро, связывается с p48 с образованием комплекса ISGF3, который связывается с промотором hPNPase old-35 и усиливает его транскрипцию. hPNPase old-35 Белок входит в цитоплазму и связывает и расщепляет мРНК c- myc за счет своей 3 ‘, 5’ экзорибонуклеазной активности. Подавление c- myc приводит к остановке клеточного цикла в фазе G 1 с последующим апоптозом

    Информация о документах, представленных в IFNS 46.Как узнать результат регистрации ООО? Порядок и документы

    Регистрация вашей компании — процедура, которая часто приводит к затруднениям. От них никто не застрахован, и каждый конкретный случай требует своего личного решения. Единственное, что объединяет все те десятки и сотни ежедневных регистраций компаний, которые проходят через основной регистрирующий орган капитала, — это необходимость участия в них специалистов — будь то прямое или косвенное, а участие -.

    Услуги Стоимость
    Подача документов по доверенности на регистрацию 1 000 руб.
    Получение комплекта учетных документов 1 000 руб.
    Проверка документов после поступления на предмет ошибок в налоговом органе от 800 рублей
    Подача документов по доверенности на исправление ошибки после регистрации 1 000 руб.
    Подготовка и подача заявления в ФНС о внесении и внесении новых паспортных данных в Единый государственный реестр юридических лиц / ЕГРИП 1 000 руб.
    Консультации и помощь в проверке комплектности регистрационных документов от 500 рублей
    Узнать причину отказа в случае отказа в регистрации * 500 руб.
    Помощь в получении консультации для юридических лиц или индивидуальных предпринимателей от 500 рублей
    Получение выписки из Единого государственного реестра юридических лиц 1500 руб.
    Получение дубликатов по доверенности ** от 2000 рублей

    Самостоятельная регистрация компании тоже возможна, но если вы приступили к этой процедуре без достаточного опыта и знаний, на определенном этапе вам может понадобиться помощь.Предлагаем Вам юридическую помощь в решении любых вопросов и трудностей при регистрации компании в налоговой инспекции, а также при проведении иных регистрационных действий в МИФНС № 46.

    Информация и документы

    • Доверенность от заявителя.
    • Решение об отказе в государственной регистрации *.
    • Название юридического лица.
    • Номер
    • ОГРН (для получения выписки из Единого государственного реестра юридических лиц).
    • Квитанция о приеме документов, представленных заявителем в регистрирующий орган **.
    • Полный адрес юридического лица ***.

    Дополнительная информация

    Кратко о МИФНС № 46

    С января 2004 года налоговые органы проводят официальную регистрацию организаций и предпринимателей в Российской Федерации. Эти изменения в свое время были связаны с необходимостью централизации контрольных функций и ужесточения налогового надзора за работой многочисленных коммерческих предприятий.

    В Москве основной организацией, имеющей право осуществлять любые корпоративные процессы в работе частных предпринимателей и компаний, является Межрайонная инспекция Федеральной налоговой службы №46 в Москве. Этот орган налогового контроля наделен достаточно серьезными функциями в области контроля законности и правильного внесения всех видов изменений в деятельность юридических лиц, зарегистрированных в Москве.

    МИФНС № 46 также контролирует взаимоотношения между бизнес-сообществом и действующими органами налоговой инспекции, у которых есть свои требования и устоявшиеся правила, которым должны следовать все юридические лица. лица и граждане, прошедшие процедуру регистрации.

    Кратко о МИФНС № 46

    Если заявитель правильно заполнил все документы и подал заявление в ФНС, то решение о регистрации ООО принимается в течение 5 дней.

    Уважаемые читатели! В статье рассказывается о типовых способах решения юридических вопросов, но каждый случай индивидуален. Если вы хотите узнать, как решит вашу проблему — обратитесь к консультанту:

    ЗАЯВКИ И ЗВОНКИ ПРИНИМАЮТСЯ 24/7 И БЕЗ ДНЕЙ .

    Быстро и БЕСПЛАТНО !

    В течение 1 рабочего дня после принятия положительного решения заявитель уведомляется об этом лично или через Интернет-ресурсы.

    Представитель участника может получить квитанцию ​​при наличии нотариально заверенной квитанции.

    Информация из Единого государственного реестра юридических лиц станет основой для переговоров с контрагентами и принятия других важных коммерческих решений.

    На сайте

    Узнать, было ли зарегистрировано ООО, можно на сайте ФНС. Информацию из Единого государственного реестра юридических лиц от 15.09.2015 могут использовать любые компании в своих информационных системах.

    Для получения информации об ООО необходимо:

    • на учете в Федеральной налоговой службе;
    • получить реквизиты доступа к реестру юридических лиц.

    Документы можно подавать в электронном виде и копировать на электронный носитель.Государственные и муниципальные органы власти имеют право получать эту информацию бесплатно. Для граждан и юридических лиц услуги ФНС платные.

    Готовность документов и другой важной информации можно получить с учетом Постановления Правительства № 462. Абонентское обслуживание юридического лица по предоставлению общедоступной информации в год составит 150 тыс. Руб.

    За разовое получение информации в полном объеме комиссия составит 50 тыс. Руб.За разовое получение обновленной информации — 5 тыс. Руб.

    Информация из Единого государственного реестра юридических лиц через сеть Интернет предоставляется на основании запроса, форма которого утверждена приказом ФНС от 15.01.2015 5н.

    Следует указать:

    • информация о компании;
    • информация, которую желает знать заявитель.

    Органы государственной власти и муниципальные образования заполняют запрос в соответствии с Приказом ФНС от 15 февраля 2015 года.Такая информация также выдается для внебюджетных фондов, арбитражных судов и судов общей юрисдикции.

    Электронный запрос устанавливает атрибуты доступа к базам данных EGUL, в том числе:

    • имя получателя;
    • Пароль
    • ;
    • Срок действия пароля
    • (для юридических и физических лиц — 1 год) и комбинация цифр, позволяющая подтвердить реальность пользователя ресурса ФНС.

    Информация о доступе к Единому государственному реестру юридических лиц отправляется на адрес электронной почты заявителя.

    Сюда входят:

    1. Уведомление об отправке.
    2. Пароли (подробности).
    3. Сертификат
    4. (файлы в формате * p12).
    5. Инструкция по настройке атрибутов и работе с информацией и памяткой.

    Пароль для государственных и муниципальных органов не имеет срока действия. Начать следует с раздела «Доступ к базе данных Единого государственного реестра юридических лиц и Единого государственного реестра юридических лиц».Вы также можете отслеживать статус регистрации там.

    Единый государственный реестр юридических лиц вправе проверить достоверность полученной информации. Сделать это он может как по собственной инициативе, так и по желанию желающего.

    Срок проверки достоверности предоставленной информации — не более 1 месяца.

    В настоящее время приостановлена ​​регистрация, что также внесено в реестр юридических лиц.

    результаты

    Результатом запроса на получение информации из Единого государственного реестра юридических лиц будет справка или выписка с информацией об ООО, либо отказ в получении информации.

    В первом случае контрагент выясняет статус компании: находится ли она в процессе банкротства или успешно занимается коммерческой деятельностью.

    Выписка также необходима для судебного разбирательства. Он понадобится при подаче искового заявления и должен быть составлен не позднее, чем за 30 дней до дня обращения в арбитражный суд (АПК РФ — п. 9 ч. 1 ст. 126).

    Дальнейшие действия

    Они зависят от цели обращения в Единый государственный реестр юридических лиц.Если выписка получена в судебное разбирательство, то нужно составить исковое заявление по правилам АПК РФ — статьи 125, 126.

    Когда информация составляется для обеспечения надежности делового партнера, последующие решения уже зависят от компании-заявителя и ее коммерческой политики.

    Что делать в случае поломки?

    Предоставляется письменно.

    Необходимо изучить ответ ФНС и определить причину:

    1. В регистрации компании может быть отказано, если предоставлен неполный пакет документов и заявитель своевременно не представил недостающие свидетельства и другую письменную информацию.
    2. Частой причиной отказа является неправильное заполнение заявки или предоставление недостоверной информации.

    Отказ в предоставлении информации о другом предприятии — при выдаче выписки из Единого государственного реестра юридических лиц, может быть связан с тем, что такое предприятие действует нелегально, без надлежащей регистрации.

    Вариации зародышевой линии интерферона-лямбда (IFNL) и их значение для прогрессирования HCC и PDAC: анализ данных Атласа генома рака (TCGA) | BMC Cancer

    Образец TCGA

    База данных TCGA содержит данные о 377 пациентах с гепатоцеллюлярной карциномой (HCC, C22.0) и 185 пациентов с протоковой аденокарциномой поджелудочной железы (PDAC, C25.-). Им присвоены афроамериканцы, азиаты, коренные американцы, белые или лица неизвестного происхождения (в цифрах: 17 (4,5%) / 161 (42,7%) / 2 (0,5%) / 187 (49,6%) / 10 (2,7%) ) и 7 (3,8%) / 11 (5,9%) / 0 (0%) / 162 (87,6%) / 5 (2,7%) соответственно). Помимо демографических параметров, TCGA предоставляет исчерпывающую клиническую документацию. Например, указаны потенциальные факторы риска развития ГЦК, а также инфекции, вызываемые вирусами гепатита (например,грамм. HBV, HCV), интоксикации (например, потребление этанола), метаболические состояния (например, жировая болезнь печени) или другие, или их комбинации. Описательный и внимательный взгляд на данные, как и ожидалось, показал, что инфекция HBV и коинфекция HBV / HCV более распространены среди азиатских пациентов, в то время как изолированные инфекции HCV и невирусной этиологии преобладают среди белых пациентов (данные не показаны). Кроме того, пациенты с инфекциями HBV имели более высокие степени опухоли, а пациенты с коинфекциями HBV / HCV имели более высокие стадии опухоли (данные не показаны).Чтобы избежать предвзятости из-за различий в окружающей среде, связанных с этнической принадлежностью, эти наблюдения побудили нас ограничиться максимально возможной однородной выборкой, то есть белыми пациентами TCGA, которые составляли n = 187 для HCC и n = 162 для PDAC.

    Что касается этиологии, пациенты с ГЦК делятся на пациентов без или неизвестных в анамнезе первичных факторов риска ( n = 54), с невирусными факторами риска ( n = 43), с подтвержденным HBV ( n = 42). ) или инфекции HCV ( n = 31) или сочетанной инфекции HBV / HCV ( n = 41) (данные не показаны).Большинство из них — в возрасте 63,3 года. в среднем на момент постановки диагноза — имели опухоль G2 степени (55,7%) и опухоли I стадии (47,3%) (табл. 1). Начиная с момента постановки диагноза, средняя продолжительность периода наблюдения за прогрессированием заболевания с точки зрения конкретного PFI составляла 12,0 мес. В течение этого периода 99 пациентов столкнулись с происшествием, а 88 были подвергнуты цензуре. Что касается времени ОС, средний период наблюдения составил 22,1 мес. За это время скончались 77 пациентов, а 110 подверглись цензуре. Медиана удельного PFI составляет 19.7 мес., Среднее время OS составило 45,9 мес. (Табл. 1).

    Таблица 1 Характеристики пациентов

    Пациенты с PDAC в возрасте 65,4 лет. в среднем на момент постановки диагноза также представлялась опухоль степени G2, но по сравнению с когортой ГЦК, в большинстве случаев была более поздняя стадия опухоли. Подробные сведения о средних периодах наблюдения и событиях приведены в таблице 1. Среднее время OS составило 20,2 мес., Что вдвое меньше, чем для когорты с ГЦК.

    Генотипирование

    Генотипы пациентов были увеличены до пяти полиморфных сайтов в кластере генов IFNL путем выравнивания всей экзомной ДНК и последовательности РНК, считанных из доброкачественного материала, с эталонным геномом.Покрытие IFNL4 rs368234815 оказалось недостаточным для большинства образцов HCC и PDAC. Анализ LD, основанный на данных 1000 Genomes Project и скорректированный для европейской популяции, показывает, что все исследуемые полиморфные сайты находятся в почти полной LD по отношению друг к другу (рис. 1). Из-за сходных частот минорных аллелей (MAF) четыре из них квалифицируются как взаимные tagSNP (рис. 1). Основываясь на степени охвата секвенированием, IFNL3, rs4803217 и IFNL3, rs28416813 были выбраны в качестве суррогатов динуклеотидного полиморфизма IFNL4 rs368234815 для пациентов с HCC и PDAC соответственно.

    Для пациентов с ГЦК распределение генотипов суррогатного SNP IFNL3 rs4803217 составляло 79 (42,2%): 89 (47,6%): 19 (10,2%) (CC: CA: AA), что соответствует HWE. При MAF 0,340 носители аллеля A ( n = 108) должны соответствовать носителям функционального белка IFN-λ 4 , в то время как гомозиготы по аллелю C напоминают нокауты IFNL4 (табл.

    Суррогат IFNL3 rs28416813 Распределение генотипов пациентов с PDAC составило 76 (46.9%): 69 (42,6%): 17 (10,5%) (CC: CG: GG) и также соответствует HWE. При MAF 0,318 предполагается, что 86 пациентов, являющихся носителями аллеля G, способны экспрессировать белок IFN-λ 4 (Табл. 1).

    Анализ прогрессирования заболевания в отношении генотипов

    IFNL

    Продолжительность конкретного PFI и время OS были выбраны в качестве клинических конечных точек для прогрессирования заболевания. С помощью анализа Каплана-Мейера оба параметра были проанализированы в отношении генотипов IFNL пациентов.

    Для пациентов с ГЦК длина средней специфической PFI не связана с числом аллелей IFNL3 rs4803217 (доза гена) (т.е. 18,4 мес .: 21,0 мес .: 14,9 мес. Для CC: CA: AA). Отсутствие этой связи стало очевидным и на графиках Каплана-Мейера (рис. 2). Логранговый тест подтвердил отсутствие значимой разницы в длине специфической PFI между гомозиготами по аллелю C IFNL3 rs4803217 и носителями аллеля A ( p = 0,65). Аналогичные несущественные результаты были получены, когда время ОС как конечная точка прогрессирования заболевания было проанализировано в отношении генотипов IFNL3 ( p = 0.87, тест логарифмического ранга).

    Рис. 2

    Анализ времени до события для продолжительности определенного PFI и времени OS согласно Каплан-Мейеру для пациентов с HCC и PDAC. Пациенты с HCC и PDAC были стратифицированы по генотипам IFNL3, rs4803217 и IFNL3, rs28416813, соответственно. Вероятность отсутствия события, то есть прогрессирования (верхние панели) или смерти (нижние панели), представлена ​​на графиках Каплана-Мейера для каждого генотипа в течение 4 лет. для HCC или 3 года.для PDAC, как указано. Пунктирными линиями обозначены средние значения PFI и среднее время OS. В таблицах указано абсолютное и относительное количество пациентов группы риска (живых и не прошедших цензуру). Логранговый тест выявил значимую взаимосвязь между генотипами IFNL и исходом заболевания для пациентов с PDAC (p (PFI) = 0,01 и p (OS) = 0,05, IFNL3 rs28416813 CC против CG / GG), но не для пациентов с HCC (p ( PFI) = 0,65 и p (OS) = 0,87, IFNL3 rs4803217 CC против CA / AA). Этот тест был проведен путем сравнения носителей вариантов SNP, которые соответствуют их способности экспрессировать IFNL4 (голубой и желтый), с гомозиготами с нокаутным вариантом (темно-синий)

    Для пациентов с PDAC длина медианы специфического PFI была короче для IFNL3. rs28416813 гомозигот по СС, чем носители аллеля G (i.е., 12,8 мес: 19,5 мес: 17,9 мес для CC: CG: GG). Эта взаимосвязь проявляется на графиках времени до события Каплана-Мейера (рис. 2). Логранговый тест выявил значительную разницу в длине специфического PFI с гомозиготами CC (соответствующих пациентам, не кодирующим IFNL4 ), показывающее более раннее прогрессирование заболевания, чем носители аллеля G ( p = 0,01). Аналогичные результаты были получены для времени ОС в качестве дополнительной клинической конечной точки ( p = 0,05, логранговый тест).

    Одномерный и многомерный анализ прогрессирования заболевания

    Чтобы выяснить, является ли генотип IFNL независимым параметром, относящимся к прогрессированию заболевания, была применена многомерная модель пропорциональных рисков Кокса.Параметры, которые выявили значительную связь в одномерном анализе, рассматривались как ковариаты. Это возраст пациентов, степень опухоли и стадия опухоли для пациентов с ГЦК, а также возраст пациентов, степень опухоли, стадия опухоли и генотип IFNL для пациентов с PDAC, соответственно.

    Что касается ГЦК, то одномерный анализ показал, что степень опухоли и стадия опухоли в значительной степени связаны с продолжительностью конкретного PFI, в то время как возраст пациентов, как было установлено, в значительной степени зависит от времени ОС (Табл.2). Многофакторный анализ показал, что более низкая степень злокачественности опухоли по сравнению с более высокой степенью (G1 против G2), как правило, независимо связана с удвоенной продолжительностью специфического PFI. Было обнаружено, что более высокая стадия связана с удвоенным сокращением специфического PFI. Что касается времени общей выживаемости, то многомерный анализ показал, что возраст пациентов на момент постановки диагноза является единственным независимым предиктором (табл. 2).

    Таблица 2 Одномерный и многомерный анализ пропорциональных рисков Кокса для прогрессирования заболевания у пациентов с ГЦК

    Для PDAC однофакторный анализ аналогичным образом показал, что степень и стадия опухоли связаны с длиной конкретного PFI в дополнение к IFNL генотипы (табл.3). Множественный анализ подтвердил, что стадия опухоли и генотип IFNL независимо и значимо связаны с прогрессированием заболевания с точки зрения длины конкретного PFI. Пациенты со стадией опухоли I имеют на 63% меньшую вероятность прогрессирования по сравнению с пациентами со стадией II ( p = 0,03). Пациенты с генотипом IFNL , соответствующим способности экспрессировать функциональный белок IFN-λ 4 , имели на 39% меньший риск прогрессирования, чем пациенты с нокаутным гаплотипом IFNL4 ( p = 0.02) (Табл.3).

    Таблица 3 Одномерный и многомерный анализ пропорциональных рисков Кокса для прогрессирования заболевания у пациентов с PDAC

    Что касается времени общей выживаемости, возраст пациентов также существенно связан с этой конечной точкой в ​​одномерной модели. Многофакторная модель показала, что пациенты со стадией опухоли II сталкиваются с более высоким риском смертности, чем пациенты со стадией опухоли I ( p = 0,06), однако с оговорками (табл. 2). Кроме того, многомерный анализ выявил тенденцию ассоциации для IFN-λ 4 , создающую генотипы, и более низкий риск смерти (32%) по сравнению с гаплотипами с нокаутом IFNL4 ( p = 0.09).

    (PDF) Генная инженерия гемопоэза для целевой доставки IFN ингибирует прогрессирование рака молочной железы

    Ф. Бернаудин, Р. Гирот, Р. Дорацио, Дж. Дж. Малдер, А. Полак, А. Банк, Дж. Сулье, Дж. Ларгеро ,

    N.Kabbara, B.Dalle, B.Gourmel, G.Socie, S.Chretien, N.Cartier, P.Aubourg, A.Fischer,

    K. Cornetta, F. Galacteros, Y. Beuzard, E Gluckman, F. Bushman, S. Hacein-Bey-Abina, P. Leboulch,

    Независимость от переливания и активация HMGA2 после генной терапии b-талассемии человека.

    Природа 467 318–322 (2010).

    16. A. Biffi, E. Montini, L. Lorioli, M. Cesani, F. Fumagalli, T. Plati, C. Baldoli, S. Martino, A. Calabria,

    S. Canale, F. Bene dicenti , Г. Валланти, Л. Биаско, С. Лео, Н. Каббара, Г. За нетти, У. Б. Риццо,

    Н. А. Мехта, депутат Чикалезе, М. Казираг и, Дж. Дж. Боеленс, У. Де л Карро, DJ Dow, M. Sc hmidt,

    A. Assanelli, V. Neduva, C. Di Serio, E. Stupka, J. Gardner, C. von Kalle, C. Bordignon, F. Ciceri,

    A.Rovelli, M. G. Roncarolo, A. Aiuti, M. Sessa, L. Naldini, Лентивирусные гемопоэтические стволовые клетки

    генная терапия способствует метахроматической лейкодистрофии. Наука 341, 1233158 (2013).

    17. A. Aiuti, L. Biasco, S. Scaramuzza, F. Ferrua, MP Cicalese, C. Baricordi, F. Dionisio, A. Calabria,

    S. Giannelli, MC Castiello, M. Bosticardo, C. Евангелио, А. Ассанелли, М. Казираги, С. Ди Нунцио,

    Л. Каллегаро, К. Бенати, П. Риццарди, Д. Пеллин, К. Ди Серио, М. Шмидт, К.Фон Калле, Дж. Гарднер,

    Н. Мехта, В. Недува, DJDow, А. Гали, Р. Миньеро, А. Финокки, А. Метин, П. П. Банерджи, JSOrange,

    С. Галимберти, М. Г. Вальсекки , A. Biffi, E. Montini, A. Villa, F. Ciceri, MG Roncarolo, L. Naldini,

    Лентивирусная генная терапия гемопоэтическими стволовыми клетками у пациентов с синдромом Вискотта-Олдрича.

    Наука 341, 1233151 (2013).

    18. J. J. Kiladjian, C. Chomienne, P. Fenaux, Интерфероновая терапия при bcr-abl-отрицательных миело-

    пролиферативных новообразованиях.Лейкемия 22, 1990–1998 (2008).

    19. M. A. Essers, S. Offner, W. E. Blanco-Bose, Z. Waibler, U. Kalinke, M. A. Duchosal, A. Trumpp,

    IFNa активирует спящие гемопоэтические стволовые клетки in vivo. Nature 458, 904–908 (2009).

    20. M. De Palma, M. A. Venneri, L. Na ldini, Нацеливание in vivo на опухолевые эндотелиальные клетки посредством системной доставки

    лентивирусных векторов. Гул. Gene Ther. 14, 1193–1206 (2003).

    21. Л. Д. Шульц, Б. Л. Лайонс, Л. М. Бурзенский, Б.Gott, X. Chen, S. Chaleff, M. Kotb, SD Gillies, M. King,

    J. Mangada, DL Greiner, R. Handgretinger, Развитие лимфоидных и миелоидных клеток человека

    в NOD / LtSz-sc id IL2Rg

    null

    мыши прививаются мобилизованными человеческими гемопоэтическими стволовыми клетками.

    J. Immunol. 174, 647 7–6489 (2005).

    22. Ф. Исикава, М. Ясукава, Б. Лайонс, С. Йошида, Т. Миямото, Г. Йошимото, Т. Ватанабе, К. Акаси,

    Л. Д. Шульц, М. Харада, Развитие функциональной крови человека и иммунные системы в

    NOD / SCID / IL2 рецептор gchain

    null

    мышей.Кровь 106, 1565–1573 (2005).

    23. F. Arai, A. Hirao, M. Ohmura, H. Sato, S. Matsuoka, K. Takubo, K. Ito, GY Koh, T. Suda, Tie2 /

    Передача сигналов ангиопоэтина-1 регулирует гематопоэтический ствол покой клеток в костном мозге —

    рядная ниша. Cell 118, 149–161 (2004).

    24. Т. Сато, Н. Онаи, Х. Йошихара, Ф. Араи, Т. Суда, Т. Охтеки, Фактор регуляции интерферона-2

    защищает покоящиеся гемопоэтические стволовые клетки от интерферон-зависимого истощения типа I. .

    Нат. Med. 15,696–700 (2009).

    25. ER Lechman, B. Gentner, P. van Galen, A. Giustacchini, M. Saini, FE Boccalatte, H. Hiramatsu,

    U. Restuccia, A.Bachi, V. Voisin, GD Bader, JE Dick , L. Naldini, Ослабление активности miR-126

    увеличивает HSC in vivo без истощения. Cell Stem Cell 11, 799–811 (2012).

    26. Б. Гентнер, И. Визигалли, Х. Хирамацу, Э. Лехман, С. Унгари, А. Джустаккини, Г. Шира, М. Амендола,

    А.Quattrini, S. Martino, A. Orlacchio, J. E. Dick, A. Biffi, L. Naldini, Идентификация гематопоэтических

    стволовых миРНК, специфичных для стволовых клеток, позволяет проводить генную терапию лейкодистрофии глобоидных клеток. Sci. Пер. Med.

    2, 58ра84 (2010).

    27. S. Wang, AB Aurora, BA Johnson, X. Qi, J. McAnally, JA Hill, JA Richardson, R. Bassel-Duby,

    EN Olson, Специфическая для эндотелия микроРНК miR-126 регулирует целостность сосудов и анги-

    генезис. Dev. Cell 15, 261–271 (2008).

    28. Меткалф Д. Гематопоэтические цитокины. Кровь 111, 485–491 (2008).

    29. М. Кованец, X. Wu, J. Lee, M. Tan, T. Hagenbeek, X. Qu, L. Yu, J. Ross, N. Korsisaari, T. Cao,

    H. Bou- Reslan, D. Kallop, R. Weimer, MJ Ludlam, JS Kaminker, Z. Modrusan, N. van Bruggen,

    FV Peale, R. Carano, YG Meng, N. Ferrara, Гранулоцитарный колониестимулирующий фактор способствует

    легкому метастазирование за счет мобилизации гранулоцитов Ly6G + Ly6C +. Proc. Natl.Акад. Sci. США

    107, 21248–21255 (2010).

    30. A. Rongvaux, H. Takizawa, T. Strowig, T. Willinger, E. E. Eynon, R. A. Flavell, M. G. Manz,

    Мыши с гемолимфоидной системой человека: текущее использование и будущий потенциал для медицины.

    Анну. Rev. Immunol. 31, 635–674 (2013).

    31. Г. Бергер, С. Дюран, К. Гужон, Н. Н. Нгуен, С. Кордей, Дж. Л. Дарликс, А. Чимарелли, простой,

    , универсальный и эффективный метод генетической модификации дендритных клеток

    , полученных из моноцитов человека. с лентивирусными векторами, происходящими от ВИЧ-1.Nat. Protoc. 6. С. 806–816 (2011).

    32. M. Streuli, A. Hall, W. Boll, WE Stewart II, S. Nagata, C. Weissmann, Специфичность клеток-мишеней

    двух видов человеческого интерферона, продуцируемого в Escherichia coli, и гибридных молекул

    происходит от них. Proc. Natl. Акад. Sci. США 78, 2848–2852 (1981).

    33. Г. Вебер, Д. Валенсуэла, Г. Люйбер, М. Габлер, К. Вайсманн, Singleaminoacid

    изменяет биологически активный IFN-a2 человека в клетках мыши. EMBO J.6,

    591–598 (1987).

    34. М. Де Пальма, Л. Налдини, Tie2-экспрессирующие моноциты (ТЕМ): новые мишени и носители

    противоопухолевой терапии? Биохим. Биофиз. Acta 1796,5–10 (2009).

    35. A. Ehninger, A. Trumpp, Ниша стволовых клеток костного мозга растет: мезенхимальные стволовые клетки

    и макрофаги перемещаются. J. Exp. Med. 2011. Т. 208. С. 421–428.

    36. J. C. Hartner, C. R. Walkley, J. Lu, S. H. Orkin, ADAR1 необходим для поддержания кроветворения

    и подавления передачи сигналов интерферона.Nat. Иммунол. 10,109–115 (2009).

    37. KY King, MT Baldridge, DC Weksberg, SM Chambers, GL Lukov, S. Wu, NC Boles,

    SY Jung, J. Qin, D. Liu, Z. Songyang, NT Eissa, GA Taylor, MA Goodell, Irgm1

    защищает гематопоэтические стимуляторы путем негативной регуляции передачи сигналов IFN. Кровь 118,

    1525–1533 (2011).

    38. B. N. Bi dwell, C. Y. Slaney, N. P. Withana, S. Forster, Y. Cao, S. Loi, D. Andre ws, T. Mikeska,

    N.Э. Манган, С. А. Са мараджива, Н. А. де Верд, Дж. Гулд, П. Аргани, А. Моллер, М. Дж. Смит,

    Р. Л. Андерсон, П. Дж. Херцог, Б. С. Паркер, Заглушение путей Irf7 в клетках рака молочной железы

    способствует метастазу костей за счет ускользания от иммунной системы. Nat. Med. 18, 1224–1231 (2012).

    39. С.Куриан, М.Казилбаш, Дж. Фэй, С. Вольф, Р. Херциг, Г. Хоббс, П. Баннер, Р. Вайзенборн, М. Айя-Ай,

    Дж. Линч, С. Эриксон, Полный ответ после высокодозной химиотерапии и трансплантации аутологичных гемо-

    поэтических стволовых клеток при метастатическом раке молочной железы приводит к увеличению выживаемости.Грудь J.

    12, 531–535 (2006).

    40. К. Фаркуар, Дж. Марджорибанкс, Р. Бассер, С. Хетрик, А. Летаби, Высокодозная химиотерапия и трансплантация аутологичного костного мозга или стволовых клеток

    по сравнению с традиционной химиотерапией

    для женщин с метастатическим раком молочной железы. Кокрановская база данных Syst. Ред. 3, CD003142 (2005).

    41. С. Е. Салмон, Дж. Дж. Кроули, Т. М. Гроган, П. Финли, Р. П. Пью, Б. Барлоги, Комбинация

    химиотерапии, глюкокортикоидов и интерферона альфа в лечении множественной миеломы:

    Исследование Юго-Западной онкологической группы.J. Clin. Онкол. 12. С. 2405–2414 (1994).

    42. F. Lansigan, F. М. Фосс, Текущие и новые стратегии лечения кожной Т-клеточной лимфомы

    . Наркотики 70, 273–286 (2010).

    43. П. Балдо, М. Руполо, А. Компаньони, Р. Лаццарини, А. Бирц, Р. Канниццаро, С. Спаццапан, И. Трукколо,

    Л. Мойа, Интерферон-альфа для лечения фолликулярной лимфомы . Кокрановская база данных Syst. Ред. 1,

    CD004629 (2010).

    44. А. Фолленци, Л. Налдини, Создание лентивирусных векторов, полученных из ВИЧ-1.Методы Энзимол. 346,

    ,

    , 454–465 (2002).

    45. М. Де Пальма, Л. Налдини, Трансдукция кассеты экспрессии гена с использованием лентивирусных векторов усовершенствованного поколения. Методы Энзимол. 346, 514–529 (2002).

    46. M. De Palma, E. Montini, FR Santoni de Sio, F. Benedicenti, A. Gentile, E. Medico, L. Naldini,

    Захват промотора выявляет значительные различия в выборе сайта интеграции между MLV

    и Векторы ВИЧ в первичных кроветворных клетках.Кровь 105, 2307–2315 (2005).

    47. М. Де Пальма, М. А. Веннери, С. Рока, Л. Налдини, Нацеливание экзогенных генов на опухолевый ангио-

    генез путем трансплантации генетически модифицированных гемопоэтических стволовых клеток. Nat. Med. 9,

    789–795 (2003).

    Благодарности: Мы благодарим А. Мондино, П. Дженовезе, А. Джустаккини и М. Новиелло за

    помощь в проведении некоторых экспериментов; К. Рэдфорду за научные советы; Л. Серги Серги за производство векторов —

    ; С.Indraccolo за предоставление IFN-акДНК человека; Б. Камисе за техническую помощь с ИФА IL-7

    и IL-15; E. Ferrero для предоставления HUVEC; и A. Ci marelli за предоставление упаковочной конструкции SI V3

    +

    для генерации SIV-подобных частиц. Финансирование: это исследование было выделено

    при поддержке грантов Associazione per la Ricerca sul Cancro (AIRC IG-10732, L.N.),

    Европейского исследовательского совета (расширенный грант ERC TARGETINGGENETHERAPY для L.N .; ERC

    , стартовый грант TIE2

    +

    MONOCYTES для MDP), Министерство здравоохранения Италии (Bando Cellule Staminali

    для LN; Bando Giovani Ricercatori GR-2009-1471693 для AK-R.) И «мой первый AIRC. грант «AB

    Автор: G.E. провел исследование, проанализировал данные и написал рукопись;

    Д.М. и А. выполнил исследование; P.O.-B. сгенерированная линия клеток MDA3; M.L.S. генерировали

    hTIE2-IFN LV и проводили иммунофлуоресцентное окрашивание опухолей человека; А.К.-Р. разработан протокол трансдукции моноцитов

    ; А.Б. помогал в разработке и интерпретации логических тестов иммуно-

    и внес интеллектуальный вклад; Б.Г. оптимизированная регуляция miRNA для LV,

    обеспечила интеллектуальный вклад и отредактировала рукопись; M.D.P. руководил M.L.S., обеспечивал интеллектуальный ввод и редактировал рукопись; Л.Н. и Р. разработал и координировал поиск повторно

    , проанализировал данные и написал рукопись.Конкуренция интересов:

    авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов. G.E. провел это исследование как частичное выполнение

    своей докторской степени в области молекулярной и клеточной биологии в Университете Сан-Раффаэле, Милан, Италия.

    Отправлено 15 апреля 2013 г.

    Принято 6 ноября 2013 г.

    Опубликовано 1 января 2014 г.

    10.1126 / scitranslmed.3006353

    Цитирование: Г.

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *