Регистрация деятельности в ифнс: полная инструкция в 2021 году

Содержание

Государственная регистрация юридических лиц, индивидуальных предпринимателей и фермерских хозяйств В избранное

I. В случае предоставления государственной услуги по государственной регистрации создаваемого юридического лица заявитель в обязательном порядке представляет:

  1. Подписанное заявителем заявление о государственной регистрации юридического лица при создании по форме №Р11001.
  2. Решение о создании юридического лица в виде протокола, договора или иного документа в соответствии с законодательством РФ.
  3. Учредительный документ юридического лица, за исключением случая, если юридическое лицо будет действовать на основании типового устава, предусмотренного подпунктом «е» пункта 1 статьи 5 Федерального закона от 08.08.2001 №129-ФЗ.
  4. Выписка из реестра иностранных юридических лиц соответствующей страны происхождения или иное равное по юридической силе доказательство юридического статуса иностранного юридического лица — учредителя.
  5. Договор с Международным олимпийским комитетом и (или) Международным паралимпийским комитетом или уполномоченными ими организациями — в случае использования олимпийской и (или) паралимпийской символики в наименовании юридического лица, его фирменном наименовании.
  6. Документ, подтверждающий присвоение выпуску (выпускам) акций регистрационного номера.

Уведомление о переходе на упрощенную систему налогообложения (предоставляется по желанию заявителя).

II. В случае предоставления государственной услуги по внесению в ЕГРЮЛ записи о том, что юридическое лицо (юридические лица) находится (находятся) в процессе реорганизации, заявитель в обязательном порядке представляет:

  1. Подписанное заявителем уведомление о начале процедуры реорганизации по форме №Р12003.
  2. Решение о реорганизации.

III. В случае предоставления государственной услуги по государственной регистрации юридического лица, создаваемого путем реорганизации (преобразования, слияния, разделения, выделения), заявитель в обязательном порядке представляет:

  1. Заявление о государственной регистрации в связи с завершением реорганизации юридического лица (юридических лиц), по форме №Р12016.
  2. Учредительный документ юридического лица, за исключением случая, если юридическое лицо будет действовать на основании типового устава, предусмотренного подпунктом «е» пункта 1 статьи 5 Федерального закона от 08.08.2001 №129-ФЗ.
  3. Договор о слиянии — в случаях, предусмотренных федеральными законами.
  4. Передаточный акт или разделительный баланс.
  5. Договор с Международным олимпийским комитетом и (или) Международным паралимпийским комитетом или уполномоченными ими организациями — в случае использования олимпийской и (или) паралимпийской символики в наименовании юридического лица, его фирменном наименовании при государственной регистрации юридического лица, создаваемого путем реорганизации (преобразования, слияния, разделения, выделения).
  6. Документ, подтверждающий присвоение выпуску или выпускам акций государственного регистрационного номера или идентификационного номера, в случае если юридическим лицом, создаваемым путем реорганизации, является акционерное общество.
  7. Документ, подтверждающий внесение изменений в решение о выпуске облигаций или иных (за исключением акций) эмиссионных ценных бумаг в части замены эмитента, в случае если реорганизуемым юридическим лицом является эмитент указанных эмиссионных ценных бумаг и в результате реорганизации его деятельность прекращается или в результате его реорганизации в форме выделения обязательства по эмиссионным ценным бумагам передаются юридическому лицу, создаваемому путем такого выделения.

Заявитель вправе по собственной инициативе представить:

IV. В случае предоставления государственной услуги по государственной регистрации изменений, вносимых в учредительные документы юридического лица, заявитель в обязательном порядке представляет:

  1. Подписанное заявителем заявление о внесении изменений по форме №Р13014.
  2. Решение о внесении изменений в учредительный документ юридического лица либо иное решение и (или) документы, являющиеся в соответствии с федеральным законом основанием для внесения данных изменений.
  3. Изменения, внесенные в учредительный документ юридического лица, или учредительный документ юридического лица в новой редакции.
  4. Документ, подтверждающий принятие Банком России решения о регистрации проспекта акций, если в учредительный документ юридического лица, являющегося непубличным акционерным обществом, внесены изменения о включении в его фирменное наименование указания на то, что оно является публичным.
  5. Документ, подтверждающий принятие Банком России решения об освобождении юридического лица, являющегося публичным акционерным обществом, от обязанности раскрывать информацию, предусмотренную законодательством Российской Федерации о ценных бумагах, если в учредительный документ юридического лица, являющегося акционерным обществом, внесены изменения об исключении из его фирменного наименования указания на то, что оно является публичным.
  6. Документ, подтверждающие наличие у юридического лица, либо лица, имеющего право без доверенности действовать от имени юридического лица, либо участника общества с ограниченной ответственностью, владеющего не менее чем пятьюдесятью процентами голосов от общего количества голосов участников данного общества, права пользования в отношении объекта недвижимости или его части, расположенных по адресу, относящемуся к месту нахождения, указанному в решении об изменении места нахождения юридического лица, — в случае изменения адреса юридического лица, при котором изменяется место нахождения юридического лица.
  7. Договор с Международным олимпийским комитетом и (или) Международным паралимпийским комитетом или уполномоченными ими организациями — в случае использования олимпийской и (или) паралимпийской символики в наименовании юридического лица, его фирменном наименовании.
  8. Решение об изменении места нахождения.
  9. Документы, подтверждающие наличие права пользования в отношении объекта недвижимости или его части, расположенных по новому адресу юридического лица (в том числе, в случае изменения адреса юридического лица, при котором изменяется место нахождения юридического лица).

V. В случае предоставления государственной услуги по внесению в ЕГРЮЛ изменений, касающихся сведений о юридическом лице, но не связанных с внесением изменений в учредительные документы, заявитель в обязательном порядке представляет:

  1. Подписанное заявителем заявление о внесении изменений по форме №Р13014.
  2. Документы, подтверждающие основание перехода доли или части доли, —  в случае внесения в ЕГРЮЛ изменений, касающихся перехода доли или части доли в уставном капитале общества с ограниченной ответственностью.

VI. В случае предоставления государственной услуги по внесению в ЕГРЮЛ изменений при реорганизации юридического лица в форме присоединения к нему другого юридического лица заявитель в обязательном порядке представляет:

  1. Подписанное заявителем заявление о внесении записи о прекращении деятельности присоединенного юридического лица по форме №Р16003.
  2. Договор о присоединении.

VII. В случае предоставления государственной услуги по внесению в ЕГРЮЛ изменений, касающихся сведений о том, что акционерное общество находится в процессе уменьшения уставного капитала, заявитель в обязательном порядке представляет:

  1. Подписанное заявителем заявление о внесении изменений в ЕГРЮЛ.
  2. Решение об уменьшении уставного капитала.

VIII. В случае внесения в ЕГРЮЛ изменений о том, что юридическим лицом принято решение об изменении места нахождения, для предоставления государственной услуги в инспекцию по месту нахождения юридического лица представляются:

  1. Подписанное заявителем уведомление о внесении изменений по форме №Р13014.
  2. Решение об изменении места нахождения.

IX. В случае предоставления государственной услуги при принятии решения о ликвидации юридического заявитель в обязательном порядке представляет:

  1. Подписанное заявителем уведомление о принятии решения о ликвидации юридического лица по форме №Р15016.
  2. Подписанное заявителем уведомление о формировании ликвидационной комиссии или о назначении ликвидатора.
  3. Подписанное заявителем уведомление о составлении промежуточного ликвидационного баланса.*

*Уведомление о составлении промежуточного ликвидационного баланса не может быть представлено в регистрирующий орган ранее срока:

  • установленного для предъявления требований кредиторами;
  • вступления в законную силу решения суда или арбитражного суда по делу (иного судебного акта, которым завершается производство по делу), по которому судом или арбитражным судом было принято к производству исковое заявление, содержащее требования, предъявленные к юридическому лицу, находящемуся в процессе ликвидации;
  • окончания выездной налоговой проверки, оформления ее результатов (в том числе рассмотрения ее материалов) и вступления в силу итогового документа по результатам этой проверки в соответствии с законодательством Российской Федерации о налогах и сборах в случае проведения в отношении юридического лица, находящегося в процессе ликвидации, выездной налоговой проверки.

X. В случае ликвидации юридического лица в результате принятия решения о ликвидации учредителями юридического лица заявитель в обязательном порядке представляет:

  1. Подписанное заявителем заявление о государственной регистрации по форме №Р16001.
  2. Ликвидационный баланс.

Заявитель вправе по собственной инициативе представить:

XI. В случае государственной регистрации при прекращении унитарного предприятия в связи с продажей или внесением его имущественного комплекса в уставный капитал акционерного общества, учреждения в связи с внесением его имущества в уставный капитал акционерного общества, унитарного предприятия или учреждения в связи с передачей имущественного комплекса унитарного предприятия или имущества учреждения в собственность государственной корпорации в качестве имущественного взноса Российской Федерации заявитель в обязательном порядке представляет:

  1. Подписанное заявителем заявление о внесении в ЕГРЮЛ записи о прекращении унитарного предприятия или учреждения по форме №Р16002.
  2. Решение об условиях приватизации имущественного комплекса унитарного предприятия или решение органа государственной власти, на основании которого осуществлены внесение имущественного комплекса унитарного предприятия или имущества учреждения в уставный капитал акционерного общества либо передача указанных имущественного комплекса или имущества в собственность государственной корпорации в качестве имущественного взноса Российской Федерации.

Заявитель вправе по собственной инициативе представить:

  • Копия документа, подтверждающего государственную регистрацию перехода права собственности на имущественный комплекс унитарного предприятия или на имущество учреждения.

XII. В случае ликвидации юридического лица через процедуру банкротства заявитель в обязательном порядке представляет:

  • Государственная регистрация осуществляется без участия заявителя на основании определения арбитражного суда о завершении конкурсного производства, поступившего в регистрирующий орган из арбитражного суда путем направления указанного определения заказным письмом с уведомлением о вручении либо в электронной форме с использованием информационно‑телекоммуникационных сетей общего пользования, в том числе сети Интернет.

XIII. В случае предоставления государственной услуги по внесению в ЕГРЮЛ сведений о юридическом лице, зарегистрированном до вступления в силу Федерального закона от 08.08.2001 №129‑ФЗ:

  • Подписанное заявителем сообщение, содержащее сведения, предусмотренные подпунктами «а» — «д», «л» пункта 1 статьи 5 Федерального закона от 08.08.2001 №129‑ФЗ, по форме №17001.

XIV. В случае предоставления государственной услуги по государственной регистрации физического лица в качестве индивидуального предпринимателя заявитель в обязательном порядке представляет:

  1. Подписанное заявителем заявление о государственной регистрации по форме №Р21001.
  2. Копия основного документа физического лица, удостоверяющего личность гражданина Российской Федерации на территории Российской Федерации (в случае если физическое лицо, регистрируемое в качестве индивидуального предпринимателя, является гражданином Российской Федерации).
  3. Копия документа, установленного федеральным законом или признаваемого в соответствии с международным договором Российской Федерации в качестве документа, удостоверяющего личность иностранного гражданина, регистрируемого в качестве индивидуального предпринимателя (в случае если физическое лицо, регистрируемое в качестве индивидуального предпринимателя, является иностранным гражданином).
  4. Копия документа, предусмотренного федеральным законом или признаваемого в соответствии с международным договором Российской Федерации в качестве документа, удостоверяющего личность лица без гражданства, регистрируемого в качестве индивидуального предпринимателя (в случае если физическое лицо, регистрируемое в качестве индивидуального предпринимателя, является лицом без гражданства).
  5. Копия свидетельства о рождении физического лица, регистрируемого в качестве индивидуального предпринимателя, или копия иного документа, подтверждающего дату и место рождения указанного лица в соответствии с законодательством Российской Федерации или международным договором Российской Федерации (в случае если представленная копия документа, удостоверяющего личность физического лица, регистрируемого в качестве индивидуального предпринимателя, не содержит сведений о дате и месте рождения указанного лица).
  6. Копия документа, подтверждающего право физического лица, регистрируемого в качестве индивидуального предпринимателя, временно или постоянно проживать в Российской Федерации (в случае если физическое лицо, регистрируемое в качестве индивидуального предпринимателя, является иностранным гражданином или лицом без гражданства).
  7. Подлинник или копия документа, подтверждающего в установленном законодательством Российской Федерации порядке адрес места жительства физического лица, регистрируемого в качестве индивидуального предпринимателя, в Российской Федерации (в случае если представленная копия документа, удостоверяющего личность физического лица, регистрируемого в качестве индивидуального предпринимателя, или документа, подтверждающего право физического лица, регистрируемого в качестве индивидуального предпринимателя, временно или постоянно проживать в Российской Федерации, не содержит сведений о таком адресе).
  8. Нотариально удостоверенное согласие родителей, усыновителей или попечителя на осуществление предпринимательской деятельности физическим лицом, регистрируемым в качестве индивидуального предпринимателя, либо копия свидетельства о заключении брака физическим лицом, регистрируемым в качестве индивидуального предпринимателя, либо копия решения органа опеки и попечительства или копия решения суда об объявлении физического лица, регистрируемого в качестве индивидуального предпринимателя, полностью дееспособным (в случае если физическое лицо, регистрируемое в качестве индивидуального предпринимателя, является несовершеннолетним).
  9. Решение комиссии по делам несовершеннолетних и защите их прав, созданной высшим исполнительным органом государственной власти субъекта Российской Федерации, о допуске к предпринимательской деятельности в сфере образования, воспитания, развития несовершеннолетних, организации их отдыха и оздоровления, медицинского обеспечения, социальной защиты и социального обслуживания, в сфере детско-юношеского спорта, культуры и искусства с участием несовершеннолетних (в случае если в отношении данного физического лица принято такое решение в соответствии с абзацем третьим пункта 4 статьи 22.1 Федерального закона от 08.08.2001 №129-ФЗ).
  10. Уведомление о переходе на упрощенную систему налогообложения (предоставляется по желанию заявителя).

Заявитель вправе по собственной инициативе представить:

  • Справка о наличии (отсутствии) судимости и (или) факта уголовного преследования либо о прекращении уголовного преследования по реабилитирующим основаниям, выданная физическому лицу, регистрируемому в качестве индивидуального предпринимателя, в порядке и по форме, которые устанавливаются федеральным органом исполнительной власти, осуществляющим функции по выработке и реализации государственной политики и нормативно‑правовому регулированию в сфере внутренних дел (в случае если данное физическое лицо намерено осуществлять определенные виды предпринимательской деятельности, указанные в подпункте «к» пункта 1 статьи 22. 1 Федерального закона от 08.08.2001 №129‑ФЗ).

Уведомление о переходе на упрощенную систему налогообложения (предоставляется по желанию заявителя).

XV. В случае предоставления государственной услуги по внесению изменений в сведения об индивидуальном предпринимателе, содержащиеся в ЕГРИП, заявитель в обязательном порядке представляет:

  1. Подписанное заявителем заявление о внесении в ЕГРИП изменений по форме №Р24001.
  2. Копия документа, подтверждающего изменение ранее внесенных в ЕГРИП сведений о фамилии, имени, отчестве, документе, удостоверяющем личность, месте жительства индивидуального предпринимателя — иностранного гражданина или лица без гражданства.
  3. Решение комиссии по делам несовершеннолетних и защите их прав, созданной высшим исполнительным органом государственной власти субъекта Российской Федерации, о допуске к предпринимательской деятельности в сфере образования, воспитания, развития несовершеннолетних, организации их отдыха и оздоровления, медицинского обеспечения, социальной защиты и социального обслуживания, в сфере детско‑юношеского спорта, культуры и искусства с участием несовершеннолетних (в случае если в отношении данного физического лица принято такое решение).
  4. Документ, удостоверяющий личность.
  5. Документ, подтверждающий адрес места жительства (пребывания) индивидуального предпринимателя на территории Санкт-Петербурга.

XVI. В случае предоставления государственной услуги при прекращения физическим лицом деятельности в качестве индивидуального предпринимателя в связи с принятием им решения о прекращении данной деятельности заявитель в обязательном порядке представляет:

  1. Подписанное заявителем заявление о государственной регистрации по форме №Р26001.
  2. Документ, удостоверяющий личность.
  3. Документ, подтверждающий адрес места жительства (пребывания) индивидуального предпринимателя на территории Санкт-Петербурга.

Заявитель вправе по собственной инициативе представить:

XVII. В случае предоставления государственной услуги по государственной регистрации крестьянского (фермерского) хозяйства заявитель в обязательном порядке представляет:

  1. Подписанное заявителем заявление о государственной регистрации по форме №Р21002.
  2. Копия основного документа физического лица, удостоверяющего личность гражданина Российской Федерации на территории Российской Федерации (в случае если глава крестьянского (фермерского) хозяйства, является гражданином Российской Федерации).
  3. Копия документа, установленного федеральным законом или признаваемого в соответствии с международным договором Российской Федерации в качестве документа, удостоверяющего личность иностранного гражданина, являющегося главой крестьянского (фермерского) хозяйства (в случае если глава крестьянского (фермерского) хозяйства является иностранным гражданином).
  4. Копия документа, предусмотренного федеральным законом или признаваемого в соответствии с международным договором Российской Федерации в качестве документа, удостоверяющего личность лица без гражданства, являющегося главой крестьянского (фермерского) хозяйства (в случае если глава крестьянского (фермерского) хозяйства является лицом без гражданства).
  5. Копия свидетельства о рождении главы крестьянского (фермерского) хозяйства, или копия иного документа, подтверждающего дату и место рождения указанного лица в соответствии с законодательством Российской Федерации или международным договором Российской Федерации (в случае если представленная копия документа, удостоверяющего личность главы крестьянского (фермерского) хозяйства, не содержит сведений о дате и месте рождения указанного лица).
  6. Копия документа, подтверждающего право главы крестьянского (фермерского) хозяйства временно или постоянно проживать в Российской Федерации (в случае если глава крестьянского (фермерского) хозяйства является иностранным гражданином или лицом без гражданства).
  7. Подлинник или копия документа, подтверждающего в установленном законодательством Российской Федерации порядке адрес места жительства главы крестьянского (фермерского) хозяйства в Российской Федерации (в случае если представленная копия документа, удостоверяющего личность главы крестьянского (фермерского) хозяйства, или документа, подтверждающего право главы крестьянского (фермерского) хозяйства временно или постоянно проживать в Российской Федерации, не содержит сведений о таком адресе).
  8. Нотариально удостоверенное согласие родителей, усыновителей или попечителя на осуществление главой крестьянского (фермерского) хозяйства предпринимательской деятельности, либо копия свидетельства о заключении брака главой крестьянского (фермерского) хозяйства, либо копия решения органа опеки и попечительства или копия решения суда об объявлении главы крестьянского (фермерского) хозяйства, полностью дееспособным (в случае если глава крестьянского (фермерского) хозяйства, является несовершеннолетним).
  9. Уведомление о переходе на упрощенную систему налогообложения (предоставляется по желанию заявителя).

XVIII. В случае предоставления государственной услуги по внесению изменений в сведения о крестьянском (фермерском) хозяйстве, содержащиеся в ЕГРИП, заявитель в обязательном порядке представляет:

  1. Подписанное заявителем заявление о внесении изменений с сведения, содержащиеся в ЕГРИП, по форме №Р24002.
  2. Копия документа, подтверждающего изменение ранее внесенных в ЕГРИП сведений о фамилии, имени, отчестве, документе, удостоверяющем личность, месте жительства главы крестьянского (фермерского) хозяйства — иностранного гражданина или лица без гражданства.
  3. Документ, подтверждающий адрес места жительства (пребывания) физического лица на территории Санкт-Петербурга.

XIX. В случае предоставления государственной услуги при прекращении крестьянского (фермерского) хозяйства по решению его членов заявитель в обязательном порядке представляет:

  1. Подписанное заявителем заявление о государственной регистрации по форме №Р26002.
  2. Документ, подтверждающий адрес места жительства (пребывания) физического лица на территории Санкт-Петербурга.

Заявитель вправе по собственной инициативе представить:

  1. Документ, подтверждающий представление в территориальный орган Пенсионного фонда Российской Федерации сведений в соответствии с подпунктами 1 — 8 пункта 2 статьи 6 и пунктом 2 статьи 11 Федерального закона от 01.04.1996 №27‑ФЗ и в соответствии с частью 4 статьи 9 Федерального закона от 30.04.2008 №56‑ФЗ.

XX. В случае предоставления государственной услуги по внесению в ЕГРИП записи о крестьянском (фермерском) хозяйстве, зарегистрированном до вступления в силу части первой Гражданского кодекса Российской Федерации, заявитель в обязательном порядке представляет:

  1. Подписанное заявителем заявление о государственной регистрации по форме №Р27002.
  2. Копия основного документа физического лица, удостоверяющего личность гражданина Российской Федерации на территории Российской Федерации (в случае если глава крестьянского (фермерского) хозяйства, является гражданином Российской Федерации).
  3. Копия документа, установленного федеральным законом или признаваемого в соответствии с международным договором Российской Федерации в качестве документа, удостоверяющего личность иностранного гражданина, являющегося главой крестьянского (фермерского) хозяйства (в случае если глава крестьянского (фермерского) хозяйства является иностранным гражданином).
  4. Копия документа, предусмотренного федеральным законом или признаваемого в соответствии с международным договором Российской Федерации в качестве документа, удостоверяющего личность лица без гражданства, являющегося главой крестьянского (фермерского) хозяйства (в случае если глава крестьянского (фермерского) хозяйства является лицом без гражданства).
  5. Копия свидетельства о рождении главы крестьянского (фермерского) хозяйства, или копия иного документа, подтверждающего дату и место рождения указанного лица в соответствии с законодательством Российской Федерации или международным договором Российской Федерации (в случае если представленная копия документа, удостоверяющего личность главы крестьянского (фермерского) хозяйства, не содержит сведений о дате и месте рождения указанного лица).
  6. Копия документа, подтверждающего право главы крестьянского (фермерского) хозяйства временно или постоянно проживать в Российской Федерации (в случае если глава крестьянского (фермерского) хозяйства является иностранным гражданином или лицом без гражданства).
  7. Подлинник или копия документа, подтверждающего в установленном законодательством Российской Федерации порядке адрес места жительства главы крестьянского (фермерского) хозяйства в Российской Федерации (в случае если представленная копия документа, удостоверяющего личность главы крестьянского (фермерского) хозяйства, или документа, подтверждающего право главы крестьянского (фермерского) хозяйства временно или постоянно проживать в Российской Федерации, не содержит сведений о таком адресе).
  8. Нотариально удостоверенное согласие родителей, усыновителей или попечителя на осуществление главой крестьянского (фермерского) хозяйства предпринимательской деятельности, либо копия свидетельства о заключении брака главой крестьянского (фермерского) хозяйства, либо копия решения органа опеки и попечительства или копия решения суда об объявлении главы крестьянского (фермерского) хозяйства полностью дееспособным (в случае если глава крестьянского (фермерского) хозяйства является несовершеннолетним).
  9. Документ, подтверждающий адрес места жительства (пребывания) физического лица на территории Санкт-Петербурга.

Комментарий:

  1. В случае ликвидации юридического лица через процедуру банкротства государственная регистрация осуществляется без участия заявителя на основании определения арбитражного суда о завершении конкурсного производства, поступившего в регистрирующий орган из арбитражного суда путем направления указанного определения заказным письмом с уведомлением о вручении либо в электронной форме с использованием информационно‑телекоммуникационных сетей общего пользования, в том числе сети Интернет.
  2. Необходимые для государственной регистрации заявление, уведомление или сообщение удостоверяются подписью заявителя, подлинность которой должна быть засвидетельствована в нотариальном порядке. Свидетельствование в нотариальном порядке подписи заявителя не требуется в случае:
  • представления документов, указанных в п. I, непосредственно в регистрирующий орган лично заявителем с представлением одновременно документа, удостоверяющего его личность;
  • представления документов, указанных в п.XIV, XV и XVI, в регистрирующий орган непосредственно лично заявителем с представлением одновременно документа, удостоверяющего его личность;
  • направления документов в регистрирующий орган в установленном порядке в форме электронных документов, подписанных усиленной квалифицированной электронной подписью заявителя.

Необходимо обязательно предоставить адрес электронной почты.

Инспекция ФНС России № 46

Адрес

Схема залов

Схема проездов

Все ИФНС г. Москвы

Инспекция Федеральной налоговой службы (ИФНС) № 46 это единственная налоговая которая осуществляет регистрацию юридических лиц в г. Москве. Процесс подачи и получения документов максимально упрощен и автоматезирован.

ФНС 46 — адрес

Адрес ФНС № 46: 125373, г. Москва, Походный проезд, домовладение 3, стр.2. Смотреть на Яндексе.

Телефон Контакт-центра: 8 (495) 276-22-22

Как добраться

Cпособ проезда:

  • ст. м. «Волоколамская», автобус № 837 до остановки «Таксомоторный парк», маршрутное такси № 441.
  • ст. м. «Сходненская», 1-й вагон из центра, маршрутное такси № 368; последний вагон из центра, автобусы № 678, № 199.
  • ст.м «Тушинская», последний вагон из центра, автобусы № 2, № 266 до ост. «пл. Трикотажная»; автобусы № 88, №177 до остановки «17 Таксомоторный парк».

Регистрация юридических лиц

Подача документов

Подача документов на государственную регистрацию происходит в залах № 1 и 2. Для того чтобы подать документы необходимо получить талон в терминале учета электронной очереди. Терминалы находятся в зале № 1. Там же есть терминал для оплаты государственной полшины за регистрацию ООО.

Получение документов

Получение документов происходит в зале № 5. Попасть в него можно через 4-й зал, где необходимо взять талон и дождаться своей очереди.

Схема залов ФНС № 46

ФНС 46 схема проезда

Система управления очередью в ФНС № 46

Очередь в 46-й налоговой управляется электронной системой, поэтому для подачи или получения документов необходимо взять талон (квитанцию) в терминале. Талон содержит информацию о Вашем номере и Вам необходимо следить за продвижением очереди на электронном табло (таких табло в залах ФНС достаточно много).

Чтобы взять необходимый талон нужно выбрать определенный раздел регистрационных действий. Ниже приведен список возможных регистрационных действий.

Название очереди и регистрационное действие 

  • A — Подача документов для государственной регистрации одного юридического лица при создании.
  • B — Подача документов для государственной регистрации нескольких юридических лиц при создании.
  • F — Подача документов для государственной регистрации юридического лица, создаваемого путем реорганизации. Ликвидация юридического лица.
  • H — Подача документов, представляемых для государственной регистрации изменений одного юридического лица.
  • W — Подача документов, представляемых для государственной регистрации изменений нескольких юридических лиц.
  • T — Подача документов по предварительной записи.
  • X — Предоставление запроса для получения выписки из единого государственного реестра юридических лиц (ЕГРЮЛ).
  • K — Государственная регистрация физического лица в качестве индивидуального предпринимателя.
  • C — Выдача документов о государственной регистрации одного юридического лица.
  • D — Выдача документов о государственной регистрации нескольких юридических лиц.
  • Q — Выдача документов о государственной регистрации изменений, реорганизации, ликвидации юридического лица.
  • M — Выдача документов о государственной регистрации индивидуального предпринимателя.
  • Y — Получение срочных выписок из ЕГРЮЛ (после предоставления запроса).
  • Z — Получение выписок из ЕГРЮЛ (после предоставления запроса).
  • P — Выдача решений об отказе в регистрации юридического лица. Консультация по отказам.
  • E — Консультация по вопросам регистрации юридических лиц.

Свидетельство о государственной регистрации ИП

Как выглядит свидетельство о государственной регистрации в качестве индивидуального предпринимателя? Этот вопрос волнует многих, поскольку с 2017 года произошли существенные изменения в официальных бланках при открытии ИП. С указанного периода, а именно с 01.01.17 г., налоговые органы более не выдают свидетельство о госрегистрации ИП, заменив этот привычный документ на лист записи из ЕГРИП.

Как изменилось свидетельство о государственной регистрации индивидуального предпринимателя

Ранее свидетельство о регистрации физического лица в качестве индивидуального предпринимателя выдавалось всем гражданам при открытии ИП. Документ имел форму Р61001 и действовал на основании Приказа Правительства № 439 от 19.06.02 г. (Приложение 22). С 2013 года форма изменилась на Р61003 по Приказу № ММВ-7-6/[email protected] от 13.11.12 г. (Приложение 3). Однако 12.09.16 г. ФНС утвердила Приказ № ММВ-7-14/[email protected], которым отменила и предыдущий приказ, введя в действие лист записи в ЕГРИП по форме Р60009.

Таким образом, свидетельство о государственной регистрации физического лица в качестве ИП более не оформляется, но все прежние, уже выданные, документы сохраняют свою законную силу, узаконивая правовой статус предпринимателя. Бланком, подтверждающим факт регистрации гражданина в реестре, является лист записи, который содержит все основные сведения о физлице и рабочих видах деятельности. Здесь же указывается № ОГРНИП, дата внесения записи (открытия ИП) и обязательные показатели. Привычное свидетельство о гос регистрации ИП физлицу теперь не выдаст ни одна налоговая, этот документ канул в прошлое.

Как изменилось свидетельство о постановке на учет индивидуального предпринимателя

Нововведения коснулись и такой формы, как свидетельство о постановке на учет ИП. Бланк является еще одним важным регистрационным документом предпринимателя, поскольку содержит данные об ИНН физлица и подлежит переоформлению при смене адреса проживания. Это свидетельство введено в действие актуальным Приказом ФНС № ЯК-7-6/[email protected] от 11.08.11 г. и пока не отменено. Но печатают документ не на специальном бланке с голограммой, а на обычной бумаге формата А4.

Почему же изменился прежний порядок налогового документооборота, а свидетельство о регистрации индивидуального предпринимателя более не выдается? Причина указана в Приказе № ММВ-7-14/[email protected], где сказано, что новый регламент утвержден в целях повышения эффективности процедуры регистрации хозяйствующих субъектов. Столь размытая формулировка, по-видимому, означает необходимость в экономии средств в связи с упрощением документооборота, а также ускорение регистрационных действий при открытии или ликвидации бизнеса.

Как бы то ни было, на практике для налогоплательщиков ничего не меняется. Как раньше бизнесмен вел законную деятельность, а подтверждением этого выступало свидетельство о госрегистрации ИП, так и теперь работа осуществляется согласно официальным бумагам. Только вместо ф. Р61003 выдается лист записи ф. Р60009. Если же гражданин открыл собственное дело до 01.01.17 г., в этом случае создан индивидуальный предприниматель, действующий на основании свидетельства. Так как уже выданная документация продолжает действовать, обновлению подлежат только бланки с 2017 г.

Как восстановить свидетельство ИП

А что делать тем физлицам, кто утратил свидетельство индивидуального предпринимателя? Можно ли получить дубликат этого документа? К кому обращаться и какие сведения предоставить? Как таковое восстановление свидетельства ИП, то есть получение повторного бланка, невозможно, поскольку нормативно-правовой акт, утвердивший форму, уже отменен. Но не спешите расстраиваться, в оформлении свидетельства нет никакой необходимости. Если документ утрачен, нужно запросить выписку из ЕГРИП.

Запрос делается в письменной форме, по обращению в ИФНС налогоплательщика или его представителя. Или же можно получить выписку на сайте налоговой инспекции, в соответствующем разделе. Документ, заверенный электронной подписью налоговиков, будет иметь полную юридическую силу. Таким образом, свидетельство предпринимателя более не нужно требовать и у контрагентов для проверки благонадежности поставщиков товаров или услуг. В качестве подтверждающей законную деятельность формы также будет выступать лист записи из единого реестра.

Свидетельство о регистрации ИП – как выглядит

Как уже говорилось ранее, старое свидетельство о государственной регистрации ИП, образец формы Р61003 выложен чуть ниже, по-прежнему имеет юридическое действие, если уже было выдано при открытии предпринимательства. Какая информация отражается в этом документе? Приложение 3 Приказа № ММВ-7-6/[email protected] от 13.11.12 г. содержит подробный ответ. Прежде всего, подобный документ распечатан не простой бумаге, а специальной, с несколькими степенями защиты – голограмма, рисунки и знаки, герб РФ, индивидуальные номер и серия и т.д. Кроме того, в бланке указывается основная регистрационная информация о предпринимателе.

Свидетельство индивидуального предпринимателя – обязательные реквизиты:

  • Точные и полные ФИО гражданина, отчество приводится только при его наличии.

  • Присвоенные ОГРНИП и дата записи о получении статуса предпринимателя.

  • Наименование территориального подразделения налоговых органов, проводящих регистрацию ИП.

  • Дата выдачи формы и печать ИФНС.

  • Личная подпись ответственного лица – проставляется с указанием должности и ФИО инспектора.

Обратите внимание! Серия и № свидетельства всегда состоят из 2 цифр (для серии) и 9 (для номера). При этом такие данные являются индивидуальными, присваиваются каждому предпринимателю отдельно и не могут повторяться ни при каких обстоятельствах.

В каких случаях требуется свидетельство о регистрации ИП

Этот бланк наравне с заменившим его листом записи является основным документом, подтверждающим факт регистрации гражданина в статусе ИП. Согласно нормам гражданского законодательства каждый человек вправе заниматься предпринимательством, без обязательного открытия юрлица, но при условии государственной регистрации в контрольных органах. Случаи нелегальной деятельности караются штрафными санкциями по уголовному и административному законодательству. Поэтому перед тем, как приступать к развитию собственного бизнеса, требуется официально зарегистрироваться в госорганах.

Кроме того, только с предъявлением свидетельства предприниматель сможет оформить лицензии и разрешения при ведении определенных видов деятельности, открыть расчетный счет и получить кредиты в банках, заказать изготовление печати, сдать отчетность, заключить договора с надежными партнерами и пр. Коротко говоря, выданный налоговой инспекцией документ о госрегистрации ИП – это официальное подтверждение законности вашего бизнеса.

Мы многое рассказали о том, как выглядит эта форма, далее приведены примеры образцов для всех видов обсуждаемых бланков – от Р61001 до Р60009. Внимательно изучите фотографии, чтобы точно знать, как оформляются документы по законодательным нормам и не столкнуться с подделкой.

Свидетельство ИП – образец

Рассмотрим, как выглядит свидетельство ИП – фото приведены для всех возможных форм. Начнем с бланка ф. Р61001 по Приказу №439 от 19.06.02 г. Как видно на фотографии этот документ содержит основной регистрационный № созданного предпринимателя, дату внесения соответствующей записи в ЕГРИП, наименование контрольного госоргана, подпись, ФИО и должность ответственного инспектора налоговой службы. Форма распечатана на специальном бланке, защищена всеми возможными способами и отмечена серией и номером. Именно такая форма выдавалась гражданам при создании ИП ранее.

Рисунок № 1 – свидетельство по ф. Р61001.

На смену ф. Р61001 пришла форма Р61003 по Приказу № ММВ-7-6/[email protected] от 13.11.12 г. Этот документ в принципе мало чем отличается от своего предшественника, что можно видеть на рисунке № 2. Также здесь указан регистрационный номер (ОГРНИП) физлица в статусе предпринимателя, дата внесения записей в реестр, наименование территориального подразделения ИФНС, должность и ФИО ответственного сотрудника, а также его личная подпись. Добавлена строка для даты выдачи ф. Р61003. Документ распечатан на специальной бумаге с голограммой и прочими уровнями защиты.

Рисунок № 2 – свидетельство по ф. Р61003.

Наконец, рассмотрим, как выглядит лист записи ф. Р60009, актуальный при регистрации предпринимателей с 01.01.17 г. Этот документ составлен на обычной бумаге, без каких-либо специальных степеней защиты, но также содержит все необходимые реквизиты, включая запись о приобретении гражданином статуса ИП. В первую очередь это подтверждается основным регистрационным номером (ОГРНИП), датой внесения такой записи, наименованием территориальной налоговой службы. Отдельно приводятся личные данные о физлице.

Рисунок № 3 – лист записи по ф. Р60009.

Для чего нужно свидетельство о закрытии ИП

Если предприниматель прекращает свою деятельность, как сдать свидетельство ИП? И нужно ли предоставлять этот документ в регистрирующий орган? Чтобы закрыть собственный бизнес, физлицу необходимо выполнить ряд обязательных действий, одно из которых включает подачу пакета документации в налоговую инспекцию. В такой перечень входит предоставление копии регистрационных свидетельств о факте открытия ИП. После того, как соблюден регламент юридической процедуры, гражданин получает «на руки» документы о закрытии ИП.

С 2017 года, как и при создании предпринимательства, прекращение деятельности ИП подтверждается оформлением листа записи ф. Р60009. Только в отличие от регистрации открытия бизнеса при его закрытии делается иная запись – об исключении физлица из Единого Реестра (ЕГРНИП). С момента отражения такой записи предприниматель официально считается прекратившим свою деятельность, но все неисполненные обязательства переходят к физлицу. Поскольку согласно стат. 24 ГК гражданин несет полную ответственность по долгам, возникшим в результате его коммерческой деятельности.

Вывод – мы разобрались, что права ИП, действующего на основании свидетельства, и ИП, действующего на основании листа записи, одинаковы, потому что два этих документа – равноценны. На приведенных фотографиях видно, в чем состоят отличия и сходства между унифицированными формами, актуальными ранее и сейчас. Основная разница заключается в прекращении использования специальных бланков с голограммами, но юридическая сила документов от этого не уменьшилась.

[ Янв. 16, 2018, 12:39 д.п. ]

Как индивидуальному предпринимателю вести деятельность в другом регионе

Организации, при осуществлении деятельности в других регионах, создают обособленные подразделения, филиалы и представительства. Встают на учет в налоговые органы по месту осуществления деятельности и уплачивают налоги. Как быть индивидуальному предпринимателю, если он работает в другом городе? Обязан ли ИП вставать на учет в ИФНС, ПФР, ФСС по месту осуществления деятельности? Куда платить налоги и взносы?

Индивидуальный предприниматель , согласно действующему законодательству, встает на учет по месту жительства. Если предприниматель нанимает работников, то становится на учет в ПФР, ФСС также по месту своего жительства, и туда же платит налоги и взносы с заработной платы работников.
Индивидуальный предприниматель не может создавать филиалы или обособленные подразделения. Как при этом вести деятельность в другом регионе и работать, не нарушая закон?


Итак, несмотря на то, что ИП состоит на учете в налоговом органе по месту жительства, не может создавать филиалы, он вправе осуществлять деятельность в любом другом регионе. А вот обязан ли он вставать на учет по месту осуществления деятельности, зависит от того, на какой системе налогообложения он находится.


В настоящее время, индивидуальные предприниматели могут применять следующие системы налогообложения:

  • ОСНО
  • УСН – доходы 6%
  • УСН – доходы минус расходы 15%

Наряду с указанными системами налогообложения, ИП может применять по отдельным видам деятельности следующие режимы НО:

  • ЕСХН – единый сельскохозяйственный налог
  • ПСН – патентная система налогообложения
  • ЕНВД – единый налог на вмененный доход

И так, с системой налогообложения индивидуальный предприниматель должен определиться еще до регистрации в качестве ИП.  Поскольку, если одновременно с документами на регистрацию не подать специальное заявление или уведомление о примени специального режима налогообложения, то автоматически ИП ставится на ОСНО. После регистрации, закон отводит еще некоторое время на раздумья, в течение которого, можно успеть подать заявление на «спецрежим».


Обратите внимание!

Индивидуальный предприниматель патентную систему налогообложения по видам деятельности может применять наравне с другими налоговыми режимами, предусмотренными законодательством РФ (ст. 346.43 НК РФ).

Рассмотрим, как предпринимателю вести деятельность в другом регионе, в зависимости от применяемой системы.


Предприниматель ведет деятельность в другом регионе и применяет ПСН (Патентную систему налогообложения)

С 2013 года ПСН – патентную систему налогообложения регулирует глава 26.5 Налогового кодекса. Если ИП применяет УСН, и вид деятельности попадает под перечень видов деятельности для применения ПСН, то предприниматель по данному виду деятельности может получить патент. Допустим, индивидуальный предприниматель  состоит на учете в одном городе, а в другом городе решил вести деятельность на патенте.

Как ИП на ПСН может встать на учет в другом городе и куда ему следует уплачивать налоги и сдавать отчетность?


Постановка на учет индивидуального предпринимателя на ПСН

 

Если предприниматель в другом регионе ведет деятельность, попадающую под ПСН, ему следует подать в налоговую инспекцию города, в котором ведется деятельность два заявления:

  • Заявление о постановке на учет;
  • Заявление на получение патента.

Без постановки на учет в другом субъекте РФ, индивидуальный предприниматель не сможет получить патент. Согласно п.5 ст.346.25.1 НК РФ, патент будет действовать только в том регионе, на территории которого он получен. Если ИП хочет вести деятельность еще и в других городах, то в каждом городе он должен получить патент. Если предприниматель осуществляет несколько видов деятельности, то патент ему следует получить на каждый вид деятельности.


Уплата налогов индивидуальным предпринимателем на ПСН

Предприниматель применяет УСН. Если, кроме видов деятельности на патенте, есть доходы от других видов деятельности, то единый налог по УСН, предприниматель уплачивает по месту жительства. По видам деятельности на патенте, уплачивается только стоимость патента, которую следует перечислить в бюджет региона, в котором получен патент. Если получены патенты в разных городах, то стоимость каждого патента оплачивается в бюджет субъекта, в котором он выдан.


Сдача отчетности при применении ПСН

Предприниматель сдает декларацию по УСН в налоговый орган по месту жительства. По деятельности на патенте налоговая декларация не сдается.
При ПСН ведется книга учета доходов и расходов. Если предприниматель ведет деятельность на УСН, он должен вести книгу учета доходов и расходов, применяемую при УСН. Иными словами, предприниматель ведет две книги учета доходов и расходов: УСН, и ПСН. При этом, в книге учета доходов при применении ПСН, отражаются только доходы.


Предприниматель на УСН ведет деятельность в других регионах

Если предприниматель применяет «упрощенку» следует ли ему вставать на учет в другом городе? Может ли он осуществлять деятельность без постановки на учет?


Постановка на учет ИП при применении УСН

Индивидуальный предприниматель, как было сказано, встает на учет в ИФНС по месту жительства. Если ИП планирует вести деятельность в других субъектах РФ, без применения ЕНВД, ПСН, действуя в рамках упрощенной или основной системы налогообложения, в другом регионе вставать на учет индивидуальный предприниматель не должен. Действующее законодательство в этом случае не обязывает предпринимателя повторно становиться на учет. Однако, согласно п.1 ст.83 НК РФ, если ИП в другом регионе приобретает в собственность нежилое помещение, он должен встать на учет по месту нахождения данного имущества.


Уплата налогов при применении УСН

Единый налог по УСН и авансовые платежи по нему уплачиваются, согласно п.6 ст.346.21 НК РФ, по месту постановки на учет ИП.

Индивидуальный предприниматель, применяющий УСН, на учете состоит по месту жительства, соответственно, независимо от того, что доходы получает в разных городах, налоги уплачивает только по месту постановки на учет, т.е. по месту жительства.

При определении налоговой базы, учитывается совокупный доход предпринимателя, полученный за определенный период по всем видам деятельности, независимо от географии их осуществления.


Однако, следует обратить внимание, что п.2 ст.346.20 НК РФ, установлено, что субъекты РФ могут понижать ставку налога, установленного для объекта «доходы минус расходы» вплоть до 5 процентов.

Поэтому, возможно, что в разных регионах будут действовать разные ставки налога. Но наш предприниматель, не сможет применять пониженную ставку, поскольку на учете в данном субъекте не состоит. ИП применяет ставку налога, которая принята в том регионе, в котором он поставлен на учет, независимо от места, в котором фактически получены доходы.


Сдача отчетности УСН

Декларацию по применению УСН ИП сдает раз в год по месту жительства, независимо от места осуществления деятельности.
Также, предприниматель заполняет Книгу учета доходов и расходов по УСН. Возникает вопрос, как правильно заполнять Книгу, если деятельность ведется в разных регионах?


Независимо от того, что деятельность предприниматель ведет в нескольких регионах, Книга учета доходов и расходов по УСН должна быть одна. В Книге отражаются доходы и расходы по всем видам деятельности на УСН в хронологическом порядке.


У Предпринимателя на УСН деятельность на ЕНВД

Предприниматель применяющий упрощенную систему налогообложения, в другом регионе осуществляет деятельность, облагаемую ЕНВД. Обязан ли предприниматель становиться на учет, куда платить налоги и сдавать отчеты?


Постановка на учет ИП при применении ЕНВД

Предприниматель, осуществляющий деятельность на ЕНВД в другом регионе, должен встать в течение пяти дней, с начала ведения деятельности, на учет в налоговой инспекции по месту ведения деятельности, в качестве плательщика ЕНВД.

Для этого в налоговую инспекцию предоставляется заявление о постановке на учет ИП в качестве налогоплательщика ЕНВД по отдельным видам деятельности.


Если предприниматель осуществляет развозную или разносную торговлю, он, независимо от того, в каком регионе ведет деятельность, встает на учет в качестве плательщика ЕНВД в налоговом органе по месту жительства.

Пусть вас не смущает, что ИП уже поставлен на учет в этой инспекции, ему следует встать на учет именно как плательщику ЕНВД.


Напоминаем, что с 2013 года применение ЕНВД не является обязательным. Поэтому, если предприниматель не планирует уплачивать ЕНВД, а хочет остаться на своей системе налогообложения, то закон его не обязывает вставать на учет и уплачивать ЕНВД.

В таком случае, индивидуальный предприниматель действует по схеме, описанной выше, для тех предпринимателей, которые применяют УСН.
До 2013 года действовал другой порядок, здесь мы его не будем рассматривать, поскольку это уже неактуально.


Уплата налогов при применении ЕНВД

Единый налог на вмененный доход предприниматель должен уплачивать по месту постановки на учет в качестве плательщика ЕНВД. Т.е. в бюджет того региона, в котором он состоит на учете как плательщик ЕНВД.
Если у ИП есть доходы по другим видам деятельности, то он уплачивает единый налог по УСН по основному месту учета, т.е. по месту жительства.


По видам деятельности на разных системах налогообложения ведется раздельный учет. И хотя для определения налога на вмененке, доходы не учитываются, т.к. расчет ведется исходя из физических показателей, доходы следует учитывать, чтобы не допустить превышения установленного лимита доходов при ЕНВД.


Сдача отчетности при применении ЕНВД

 

Декларация по ЕНВД сдается предпринимателем в налоговый орган субъекта РФ, в котором он состоит на учете в качестве плательщика ЕНВД.
Если деятельность относится к развозной или разносной торговле, ИП сдает отчетность в инспекцию по месту жительства, т.к. при осуществлении таких видов деятельности именно здесь он состоит на учете, как плательщик ЕНВД.
Декларацию по УСН ИП сдает по месту жительства.


Внимание!

Если у предпринимателя нет других видов деятельности, кроме тех, которые на «вмененке», он обязан сдавать в ИФНС по месту жительства нулевую декларацию по УСН.


Подведем итоги

Действия индивидуального предпринимателя при ведении деятельности в других регионах

Режим налогообложения в двух регионах

Постановка на учет

Уплата налога

Сдача отчетности

УСН и патент

В каждом регионе

В каждом регионе

Декларацию по УСН сдают по месту жительства.

По деятельности на ПСН декларация не сдается.

УСН и УСН

По месту жительства

По месту жительства

Декларацию по УСН сдают в ИФНС  по месту жительства

УСН и ЕНВД

В каждом регионе

В каждом регионе

Декларацию по УСН сдают в ИФНС по месту жительства.

Декларацию по ЕНВД сдают в ИФНС,  по месту ведения деятельности на «вмененке»

  • Единый налог по УСН, уплачивается и сдается декларация по УСН по месту жительства индивидуального предпринимателя, независимо от того, в каких городах ведется деятельность. По месту ведения деятельности вставать на учет индивидуальный предприниматель не должен.
  • При применении патентной системы налогообложения, предприниматель получает по каждому виду деятельности на ПСН, патент, в налогом органе региона, где ведется деятельность. Там же оплачивается стоимость патента. У ИП может быть неограниченное количество патентов, т.е. по патенту на каждый вид деятельности и в каждом регионе осуществления такой деятельности.
  • Если деятельность попадает под ЕНВД, и предприниматель принимает добровольное решение перейти на «вмененку», он должен встать на учет по месту ведения деятельности, как плательщик ЕНВД. Налог платится по месту ведения деятельности на «вмененке», туда же сдается декларация.
  • Если одновременно с деятельностью на ПСН, ЕНВД, осуществляется деятельность на УСН, единый налог и авансовые платежи по нему платятся по месту жительства, даже если эта деятельность ведется в других регионах. При этом ИП следует обеспечить раздельный учет доходов и расходов, получаемых от видов деятельности на разных системах налогообложения. 
  • Декларация по каждому виду деятельности сдается по месту постановки на учет, декларация по УСН сдается в налоговую по месту жительства, даже если деятельность на УСН не велась.
  • Фиксированный взнос за себя индивидуальный предприниматель всегда уплачивает по месту жительства. Отчеты в пенсионный фонд за себя предприниматель не сдает.
  • Если предприниматель нанимает работников, в качестве работодателя он встает в пенсионном фонде, фонде социального страхования по месту своего жительства. Даже если эти работники фактически работают и живут в другом регионе. При этом, НДФЛ удержанный с заработной платы работников, страховые взносы, начисленные на сумму выплат в пользу работников, предприниматель также уплачивает по месту жительства. Туда же, сдается вся отчетность по работникам.

Материалы по теме


 

Обособленные подразделения — кратко о самом важном

Как ИП на УСН может распоряжаться наличными денежными средствами

Документы, необходимые для регистрации ИП в качестве работодателя в ПФР и ФСС

Отчетность ИП на ОСНО

Отчетность ИП на УСН без работников

Отчетность ИП на УСН с работниками

Штрафы ИП за несвоевременную сдачу отчетности

ЕНВД 2013

Патентная система налогообложения 2013

Упрощенная система налогообложения 2013

Льготы для УСН 2012-2013

Льготы для ЕНВД 2012-2013

Стоимость патента в Москве на 2013 год

Размер фиксированных взносов ИП

Юридический адрес ИП: зачем нужен и как зарегистрировать

Понятие юридического адреса применяется только по отношению к организациям. Им может быть офис, склад, магазин, собственное помещение учредителя и даже квартира руководителя, в которой он прописан. В случае с ИП государственные органы не применяют термин «юридический адрес», а говорят и пишут «место жительства физического лица, вставшего на учёт в качестве ИП».

Предприниматель регистрируется только по месту жительства — постоянной прописки или временной регистрации, подтверждённых документами. Это может быть жилое помещение любого типа:

  • квартира;
  • жилой дом;
  • комната;
  • общежитие;
  • служебное жилье;
  • специализированное жилое помещение — приют, дом престарелых или инвалидов.

Прописка ИП указывается в договорах с клиентами, контрагентами и покупателями. С согласия предпринимателя по этому адресу налоговая может провести выездную проверку.

Регистрация ИП невозможна по месту пребывания: например, по адресу гостиницы, хостела, дома отдыха, пансионата, медицинского учреждения и т. п.

Ставить в известность налоговую и другие госорганы не нужно. Но учитывайте, что даже если вы находитесь по другому адресу, почта продолжит приходить по месту прописки ИП. Все письма, отправленные по «юридическому» адресу, считаются автоматически полученными.

Нет. Закон запрещает это, так как арендованные для бизнеса помещения могут не иметь точного адреса, как в случае павильонов в торговом центре.

При этом реальную деятельность можно вести по адресу магазина, мастерской, салона красоты и других объектов, как и снимать офис для работы и встреч с деловыми партнерами. Всё это законно, главное — не забывать, что вся официальная и деловая корреспонденция приходит именно по месту регистрации.

Да, при соблюдении двух условий:

  • у вас есть нотариально заверенная справка о том, что временная регистрация действует минимум 6 месяцев;
  • в паспорте нет штампа о регистрации по прописке.

Такая регистрация влечёт неудобства. Когда срок действия справки закончится, статус ИП будет автоматически аннулирован. Чтобы не допустить этого, нужно своевременно продлить прописку и сообщить об этом в местную налоговую.

Иностранцы и лица без гражданства могут встать на учёт в качестве ИП по адресу, где получили вид на жительство или разрешение на временное пребывание.

Зависит от применяемой системы налогообложения.

  • На УСН, ОСН или ЕСХН регистрация новой точки не нужна, так как вся отчётность и налоги направляются в ту же налоговую инстанцию.
  • На ЕНВД или патенте потребуется регистрация в ФНС по месту нахождения новых точек, поскольку в каждом регионе и даже районе действуют разные коэффициенты для расчёта налога.

Допустим, вы открываете новые точки продаж в двух районах города. Если применяете УСН, не нужно сообщать ФНС о расширении деятельности. А вот если вы на патенте, придётся поставить каждый из филиалов на учёт в налоговых инспекциях соответствующих районов.

С 2011 года не нужно уведомлять ФНС о смене прописки, все изменения вносятся в документы ИП без вашего участия.

Происходит это так:

  • Информацию о смене прописки в ИФНС в течение 10 дней передаёт Федеральная миграционная служба.
  • Далее сотрудники ФНС в течение 5 рабочих дней вносят изменения в ЕГРИП.
  • Через 15 дней изменения должны отобразиться на сайте ФНС — можно зайти и проверить их корректность в ЕГРИП.

Иногда система не срабатывает должным образом или нет возможности ждать 15 рабочих дней. В этих случаях можно самостоятельно подать уведомление в ИФНС о внесении изменений в ЕГРИП. Запрос обработают в течение 5 рабочих дней.

После смены прописки ИП закрепляют за другой налоговой инспекцией. В какую именно — можно посмотреть на сайте ФНС, по новому адресу система автоматически выдаст номер и реквизиты налогового отделения. ИНН и ОГРН остаются прежними, поэтому нет необходимости вставать на учёт повторно.

ИНН — идентификационный код, который присваивается физическому лицу для контроля уплаты налогов. Цифры этого кода не случайны и имеют конкретное значение:

  • первые 2 — указывают на субъект РФ;
  • вторые 2 — устанавливают место регистрации ИП;
  • следующие 6 — уникальны и не повторяются;
  • последние 2 — подтверждают подлинность регистрации.

Чтобы узнать адрес ИП по ИНН, обратитесь с письменным или электронным запросом в налоговую инспекцию и получите выписку из ЕГРИП.

Данные реестра постоянно обновляются — можно получить сведения даже о новых предпринимателях и ликвидированных ИП.

Вот пошаговая инструкция, как узнать адрес ИП с помощью ИНН:

Тонкости регистрации: основания отказа, о которых вы не знаете

Бытует мнение, что 90% отказов в госрегистрации сведений об учредителе (участнике) или руководителе организации объясняются формальными нарушениями закона о госрегистрации юрлиц. Но в 2016 году в него внесли специальные основания для отказа. Большинству директоров и учредителей они до сих пор неизвестны. Поэтому отказ в регистрации, а также его причины могут стать для заявителей полной неожиданностью. Как правильно подобрать руководителя или учредителя (участника) компании, расскажет старший консультант Департамента юридической практики Alliance Legal Consulting Group Никита Роженцов.

1 января 2016 года начали действовать новые основания для отказа в регистрации учредителей (участников) и руководителей (лиц, действующих от лица компании без доверенности). Кандидатуры не внесут в ЕГРЮЛ, если их прошлый опыт дает основания сомневаться в их добросовестности:


– лицо ранее было учредителем/участником ООО (с долей 50% и более в уставном капитале) или руководителем юридического лица иной организационно-правовой формы, которое было исключено из ЕГРЮЛ как недействующее (п. 2 ст. 21.1 закона о регистрации) и при этом имело долги, в том числе безнадежные, перед бюджетом;

– лицо является учредителем/участником ООО (с долей 50% и более в уставном капитале) или руководителем юридического лица иной организационно-правовой формы, сведения о котором в ЕГРЮЛ отмечены как недостоверные, либо имеется неисполненное решение суда о ликвидации компании.

Новые нормы внесли в п. «ф» ст. 23 закона «О государственной регистрации юридических лиц и индивидуальных предпринимателей». Указанные ограничения действуют в течение трех лет с момента исключения компании из ЕГРЮЛ либо внесения соответствующих сведений в реестр.

Ограничения в отношении учредителя (участника) либо руководителя компании де-факто дублируют положения КоАП РФ о дисквалификации (ст. 3.11) с той лишь разницей, что административное наказание в виде дисквалификации может быть назначено только судьей.

Стоит отметить, что введенные ограничения могут распространять свое действие применительно к случаям, когда управление юридическим лицом осуществляется управляющей компанией (см. Постановление Шестого арбитражного апелляционного суда № 06АП-6644/2016 по делу № А73-9926/2016 от 6 февраля 2017 г.).

«Бомба замедленного действия»

Логика законодателя проста и понятна: он стремился обеспечить достоверность ЕГРЮЛ, в частности, не допустить регистрации компаний, которые создаются для недобросовестной деятельности путем использования «номиналов» и т. д.

В то же время могут пострадать интересы лиц, которые занимались компанией, а затем потеряли к ней интерес и оставили с долгами перед бюджетом (пускай даже самыми незначительными). Для таких лиц нормы могут оказаться «бомбой замедленного действия»: они могут даже не подозревать об ограничениях, о которых узнают, как правило, лишь когда получат решение ИФНС об отказе в регистрации.

В более выигрышном положении те, кто имеет отношение к «проблемной» компании, которая еще не ликвидирована, но сведения о которой в ЕГРЮЛ отмечены как недостоверные. Они могут преодолеть ограничение, если внесут в реестр достоверную информацию или обжалуют соответствующую запись в административном или (или) судебном порядке.

Информация: как и что проверить

Хотя закон не регламентирует процедуру проверки указанных ограничений, не составляет большого труда узнать, участвовал ли человек в деятельности компании с «темным» прошлым. Достаточно проверить сведения в ЕГРЮЛ, это общедоступно. Куда сложнее выяснить, были ли долги у компании, прекратившей деятельность. Ее участник или руководитель могут просто не располагать достоверной информацией об этом.

Действующие правовые акты дают возможность получить справки от налоговых органов о том, платил ли налогоплательщик (плательщик сбора и/или страховых взносов, налоговый агент) налоги, сборы, страховые взносы, пени, штрафы, проценты, а также справки о состоянии расчетов по налогам, сборам, страховым взносам, пеням, штрафам, процентам организаций и индивидуальных предпринимателей.

Однако закон не регламентирует право бывшего учредителя (участника) либо руководителя юридического лица обратиться за такими справками в налоговый орган. В силу подп. 10 п. 1 ст. 32 НК РФ это могут сделать только налогоплательщик, плательщик сбора или налоговый агент. В то же время даже минимальная непогашенная задолженность перед бюджетом – вполне себе основание отказать в регистрации (см. Постановление Арбитражного суда Поволжского округа Ф06-21519/2017 по делу № А49-11258/2016 от 8 июня 2017 г.).

Остается надеяться, что обсуждаемые нормы Закона о государственной регистрации юридических лиц и индивидуальных предпринимателей позволят повысить достоверность содержащихся в ЕГРЮЛ сведений, а также послужат толчком к осознанному подбору кандидатур на должность участника либо руководителя компании.

что нужно перерегистрировать и как это сделать правильно

Я индивидуальный предприниматель. Постоянно зарегистрирован по месту жительства и имею небольшой бизнес в одном городе. Бизнес привязан к месту, то есть переместить его нельзя. По семейным обстоятельствам назревает переезд в другой регион. На новом месте мне придется сделать себе постоянную прописку.

В связи с этим у меня такие вопросы. Что делать с регистрацией ИП? Можно ли остаться зарегистрированным не по месту жительства или нужно вставать на учет в ИФНС по месту новой прописки? Какие действия от меня требуются в этой ситуации?

С уважением,

Сергей

Сергей, когда ИП меняет постоянное место жительства, это не означает, что бизнес, который был на прежнем месте, придется закрывать. С ним все останется как было.

Марина Суховская

юрист

Но ваш переезд в другой регион и смена адреса постоянного места жительства действительно повлечет за собой перерегистрацию в ИФНС и фондах — ПФР и, если есть работники, ФСС. Правда, по большей части этот процесс пройдет без вашего участия. Однако не исключено, что вам все же придется предпринять какие-то действия.

Перерегистрация в новой ИФНС

Когда вы зарегистрируетесь по новому месту жительства, миграционное управление МВД в течение 10 рабочих дней само уведомит об этом вашу новую налоговую инспекцию.

п. 3 ст. 85 НК РФ

Налоговики, как только получат эти сведения, за 5 рабочих дней должны сделать следующее:

Как только обновятся данные в ЕГРИП, инспекция сама в течение 5 рабочих дней сообщит новые сведения об адресе ИП в ПФР, ФСС и Росстат. Что касается фонда обязательного медстрахования (ФОМС), то налоговики еще с 2017 года ежеквартально сами направляют туда сведения обо всех изменениях.

п. 9 правил, утв. постановлением Правительства РФ от 22.12.2011 № 1092

То есть на этом этапе в отношении налоговой перерегистрации ИП самому ничего делать не нужно.

Важно. Человека снимают с учета в старой ИФНС только после того, как он зарегистрируется по новому месту жительства. Если ИП выпишется из старой квартиры и по каким-либо причинам не пропишется в новой, то так и будет числиться в своей старой налоговой.

Как вести бизнес по закону

Подпишитесь на нашу рассылку для предпринимателей, чтобы быть в курсе

Перерегистрация в ПФР и ФСС

Сейчас ИП может быть зарегистрирован в пенсионном фонде только как плательщик взносов за себя.

Для перерегистрации в ПФР предпринимателю ничего не нужно. Все сделают за него. Новый территориальный орган ПФР автоматом поставит его на учет в течение 3 рабочих дней после того, как получит из ИФНС данные о смене адреса. ИП придет электронное уведомление о регистрации: либо на электронную почту, если она есть в госреестре, либо на портал госуслуг. Если нужно бумажное уведомление, придется пойти в новое отделение ПФР и сделать там запрос об этом.

п. 1 ст. 6, пп. 1, 2 ст. 11 закона о пенсионном страховании

Важно. Если меняется регион места жительства ИП, то в уведомлении из ПФР будет указан его новый регистрационный номер как плательщика взносов, ведь в этот номер зашиты код субъекта РФ, код района (города) и порядковый номер записи о физлице в территориальном органе ПФР.

Если вы стоите на учете по этим двум основаниям, то у вас есть два регистрационных номера. Но в ФСС, в отличие от ПФР, эти номера при смене места жительства не меняются.

И в том и в другом случае перерегистрация в ФСС по новому месту жительства потребует от ИП самостоятельных действий. В течение 15 рабочих дней со дня изменения данных в паспорте ему надо будет подать — лично, по почте или через госуслуги — в свое прежнее отделение ФСС заявление по одной из следующих форм:

  1. форма заявления при наличии наемных работников;
  2. форма заявления, если ИП добровольно застрахован в ФСС.

Можно подать и оба заявления. Получив заявление, старое отделение ФСС в течение 5 рабочих дней передаст ваше учетное дело в новое отделение. А оно за 3 рабочих дня со дня получения дела должно зарегистрировать ИП и направить ему уведомление о регистрации.

Ну и что? 20.01.20

Страховые взносы ИП за себя в 2020 году: сколько и когда платить

Надо ли перерегистрировать ККТ, если у ИП она есть

Переоформление лицензии

Если ИП занимается деятельностью, для которой требуется лицензия, то при смене места жительства он должен переоформить текущую лицензию.

Поскольку в вашем случае адрес ведения бизнеса остается прежним, старая лицензия сохраняет свое действие до тех пор, пока не будет выдана новая.

Чтобы переоформить лицензию, надо уплатить госпошлину в размере 750 Р, а потом лично или по почте подать заявление в тот орган, который лицензию выдавал. В нем указать реквизиты документа об уплате госпошлины, приложить оригинал старой лицензии и выписку из ЕГРИП с новым адресом.

чч. 1, 2, 6, 7 ст. 8 закона № 294-ФЗ

Кого еще ИП должен уведомить о новом адресе

Есть целый перечень видов деятельности, о начале ведения которых юрлица и ИП обязаны уведомлять контролирующий орган. Например, о бизнесе в сфере общепита надо уведомить Роспотребнадзор, а о пассажирских перевозках — Ространснадзор. Если не подать такое уведомление, могут оштрафовать. Штраф для ИП — от 3000 до 5000 Р.

Если ИП должен подавать такое уведомление, то об изменении адреса регистрации ему также нужно сообщить в течение 10 рабочих дней с даты внесения записи в ЕГРИП.

И конечно же, предпринимателю обязательно надо сообщить об изменении адреса постоянной регистрации в свой банк и своим контрагентам.

Если у вас есть вопрос о личных финансах, дорогих покупках или семейном бюджете, пишите. На самые интересные вопросы ответим в журнале.

Интерфероны III типа: новые роли, выходящие за рамки антивирусной защиты

Среди семейства интерферонов (IFN) IFN типа III (или IFN-λ) были обнаружены совсем недавно. Четыре члена этого семейства известны у людей (IFN-λ1,2,3 и IFN-λ4), но только IFN-λ2,3 экспрессируется у мышей. С момента их открытия стало очевидно, что они имеют много общих характеристик с IFN типа I. Действительно, они индуцируют перекрывающиеся сигнатуры транскрипции, которые включают многие гены, стимулированные интерфероном, с противовирусными функциями.Однако с годами IFN-λ превратились в высокоспециализированную группу цитокинов, однозначно подходящих для обеспечения противовирусной защиты слизистых оболочек. Эта специализация IFN-λ связана не только с паттерном экспрессии их специфического рецептора, который в основном ограничен клетками эпителиального происхождения и выбранным пулом иммунных клеток, но и с их уникальными иммуномодулирующими свойствами, которые ограничивают повреждающие реакции, способствуя при этом защитному иммунитету. .

Роль IFN-λ в борьбе с вирусными инфекциями слизистых оболочек была тщательно изучена, однако недавние достижения в изучении биологии IFN-λ рисуют более сложную картину.Действительно, неизбыточная активность IFN-λ по сравнению с IFN I типа во время вирусной рестрикции появляется и все еще является объектом интенсивных исследований. Недавно было показано, что IFN-λ обладают способностью влиять на иммунный ответ при различных невирусных инфекционных патологиях, и было показано, что они вырабатываются в ответ и защищают от различных классов микробов, включая бактерии и грибы. Несколько исследований показывают, что IFN-λ могут иметь более широкие иммуномодулирующие функции с важными последствиями для регуляции врожденного и адаптивного иммунного ответа.Действительно, было показано, что IFN-λ важны при неинфекционных иммунных патологиях в легких и кишечнике. Таким образом, цель данной темы исследования состоит в том, чтобы осветить возникающие и интригующие свойства IFN-λ, понять уникальные механизмы, которые контролируют их сайт-специфические функции, и дать представление о том, как область IFN-λ развивается за пределы противовирусных препаратов для слизистых оболочек. иммунитет.

Мы приветствуем отправку обзоров и оригинальных исследовательских статей. Мы особенно рекомендуем подавать мини-обзоры и перспективы, охватывающие новые и малоизученные роли IFN-λ, с особым акцентом на то, как эти особенности могут развиваться в качестве вклада в область биологии IFN-λ.Мы также поощряем подачу оригинальных исследовательских работ, посвященных провокационным и новым функциям IFN-λ. Примеры тем, которые будут рассмотрены в этой теме исследования:

1. Неизбыточная роль IFN-λ в защите от вирусов

2. Базальные уровни IFN-λ на поверхности слизистой оболочки и их взаимосвязь с микробиомом

3 IFN-λ за пределами противовирусного иммунитета: защита от невирусных патогенов на участках слизистой оболочки

4. IFN-λ и иммунные клетки: врожденная и адаптивная иммуномодулирующая роль IFN типа III

5.Загадочная роль IFN-λ4 у человека: паттерны экспрессии и механизмы действия

6. Распределение и функции IFN-λ

7. IFN-λ как терапевтический цитокин

8. Регуляция передачи сигналов IFN-λ: эпигенетика и регуляция передачи сигналов IFN-λ ответов

Ключевые слова : Интерферон, микробиом, вирус, IFN-λ, воспаление, слизистые оболочки, бактериальные инфекции, грибковые инфекции, иммунная регуляция

Важное примечание : Все материалы по данной теме исследования должны находиться в рамках того раздела и журнала, в который они были отправлены, как это определено в их заявлениях о миссии.Frontiers оставляет за собой право направить рукопись, выходящую за рамки объема, в более подходящий раздел или журнал на любом этапе рецензирования.

Среди семейства интерферонов (IFN) IFN типа III (или IFN-λ) были обнаружены совсем недавно. Четыре члена этого семейства известны у людей (IFN-λ1,2,3 и IFN-λ4), но только IFN-λ2,3 экспрессируется у мышей. С момента их открытия стало очевидно, что они имеют много общих характеристик с IFN типа I.Действительно, они индуцируют перекрывающиеся сигнатуры транскрипции, которые включают многие гены, стимулированные интерфероном, с противовирусными функциями. Однако с годами IFN-λ превратились в высокоспециализированную группу цитокинов, однозначно подходящих для обеспечения противовирусной защиты слизистых оболочек. Эта специализация IFN-λ связана не только с паттерном экспрессии их специфического рецептора, который в основном ограничен клетками эпителиального происхождения и выбранным пулом иммунных клеток, но и с их уникальными иммуномодулирующими свойствами, которые ограничивают повреждающие реакции, способствуя при этом защитному иммунитету. .

Роль IFN-λ в борьбе с вирусными инфекциями слизистых оболочек была тщательно изучена, однако недавние достижения в изучении биологии IFN-λ рисуют более сложную картину. Действительно, неизбыточная активность IFN-λ по сравнению с IFN I типа во время вирусной рестрикции появляется и все еще является объектом интенсивных исследований. Недавно было показано, что IFN-λ обладают способностью влиять на иммунный ответ при различных невирусных инфекционных патологиях, и было показано, что они вырабатываются в ответ и защищают от различных классов микробов, включая бактерии и грибы.Несколько исследований показывают, что IFN-λ могут иметь более широкие иммуномодулирующие функции с важными последствиями для регуляции врожденного и адаптивного иммунного ответа. Действительно, было показано, что IFN-λ важны при неинфекционных иммунных патологиях в легких и кишечнике. Таким образом, цель данной темы исследования состоит в том, чтобы осветить возникающие и интригующие свойства IFN-λ, понять уникальные механизмы, которые контролируют их сайт-специфические функции, и дать представление о том, как область IFN-λ развивается за пределы противовирусных препаратов для слизистых оболочек. иммунитет.

Мы приветствуем отправку обзоров и оригинальных исследовательских статей. Мы особенно рекомендуем подавать мини-обзоры и перспективы, охватывающие новые и малоизученные роли IFN-λ, с особым акцентом на то, как эти особенности могут развиваться в качестве вклада в область биологии IFN-λ. Мы также поощряем подачу оригинальных исследовательских работ, посвященных провокационным и новым функциям IFN-λ. Примеры тем, которые будут рассмотрены в этой теме исследования:

1.Неизбыточная роль IFN-λ в защите от вирусов

2. Базовые уровни IFN-λ на слизистых оболочках и их связь с микробиомом

3. IFN-λ за пределами противовирусного иммунитета: защита от невирусных патогенов на участках слизистой оболочки

4. IFN-λ и иммунные клетки: врожденная и адаптивная иммуномодулирующая роль IFN типа III

5. Загадочная роль IFN-λ4 у человека: паттерны экспрессии и механизмы действия

6. Распределение IFN-λ и функции

7.IFN-λ как терапевтический цитокин

8. Регуляция передачи сигналов IFN-λ: эпигенетика и регуляция сигнальной трансдукции ответов IFN-λ

Ключевые слова : Интерферон, микробиом, вирус, IFN-λ, воспаление, слизистые оболочки, бактериальные инфекции, грибковые инфекции, иммунная регуляция

Важное примечание : Все материалы по данной теме исследования должны находиться в рамках того раздела и журнала, в который они были отправлены, как это определено в их заявлениях о миссии.Frontiers оставляет за собой право направить рукопись, выходящую за рамки объема, в более подходящий раздел или журнал на любом этапе рецензирования.

границ | Двойственная природа интерферонов типа I и типа II

Введение

Интерфероны типа I и II (IFN) — это цитокины, продуцируемые во время вирусной инфекции, которые являются неотъемлемой частью регуляции иммунного ответа. IFN типа I хорошо известны своей способностью напрямую вызывать противовирусный ответ в инфицированных и окружающих клетках за счет активации молекул, которые могут противодействовать репликации вируса (1).Поскольку они продуцируются довольно рано во время инфекции, IFN типа I также важны для активации противовирусного врожденного иммунного ответа, такого как эффекторные функции естественных киллеров (NK) (2). IFN типа II, известный как IFN-γ, хотя и имеет номенклатуру, аналогичную IFN типа I, передает сигналы через другой рецептор и имеет эффекты, независимые от IFN типа I. Как часть врожденного иммунного ответа, они преимущественно вырабатываются естественными клетками-киллерами во время инфекции (2). IFN-γ, как и IFN типа I, способствует противовирусному иммунитету за счет своего регулирующего воздействия на врожденный иммунный ответ и действует как ключевое звено между врожденным иммунным ответом и активацией адаптивного иммунного ответа (3).Помимо их противовирусных эффектов, все больше данных свидетельствует о том, что IFN типа I и типа II обладают иммунорегуляторными функциями, которые имеют решающее значение для ослабления иммунопатогенных механизмов и минимизации побочного ущерба от инфекции. В целом, этот обзор создаст основу и предоставит доказательства, демонстрирующие, что эти два цитокина имеют решающее значение для ограничения репликации вируса и содействия положительному ограничивающему ответ вирусу, одновременно ослабляя иммунопатологию. Однако, если мы рассмотрим мир за пределами вирусных инфекций, эта фундаментальная двойственность IFN типа I и II может быть применена к многочисленным патологическим процессам, от аллергии до аутоиммунных заболеваний.

Производство IFN типов I и II и передача сигналов

IFN типа I состоят из группы структурно схожих цитокинов и включают 13–14 подтипов IFN-α вместе с IFN-β, IFN-ε, IFN-κ, IFN-ω, IFN-δ, IFN-ζ и IFN. -τ (4, 5). Как часть противовирусного ответа врожденного иммунитета, эти цитокины быстро продуцируются после стимуляции рецептора распознавания образов (PRR) (5). Текущие исследования показывают, что начальная волна IFN-β и IFN-α4 продуцируется и зависит от фосфорилирования IRF3 и активации NFκb (6-8).Первоначальная волна IFN типа I впоследствии индуцирует фосфорилирование IRF7 и приводит к петле положительной обратной связи увеличения высвобождения IFN типа I. После образования все эти цитокины передают сигнал через один и тот же рецептор, рецептор IFN типа I (IFNAR). IFNAR состоит из двух субъединиц — IFNAR1 и IFNAR2, которые при связывании с IFN типа I подвергаются эндоцитозу и активируют связанные с ними тирозинкиназы Tyk2 и Jak1 (4, 9). Классический сигнальный каскад приводит к фосфорилированию STAT2 и STAT1, которые образуют комплекс с IRF9, известный как фактор 3 гена, стимулированный IFN (ISGF3) (4).Затем ISGF3 приводит к экспрессии генов, стимулированных IFN (4). Помимо ISGF3, IFN типа I могут также индуцировать фосфорилирование и димеризацию STAT3, STAT4, STAT5 и STAT6, и было показано, что они вызывают активацию Rap1, CrkL, киназ Map, IRS-1 и -2, Vav, RAC1 и PI3-. пути передачи киназного сигнала (4, 10–14). Интересно, что IFN-β, как было показано, дополнительно передает сигнал через субъединицу IFNAR1 независимо от IFNAR2 и переносится через неканонический путь передачи сигнала (15).

IFN типа II преимущественно продуцируется NK-клетками во время противовирусного врожденного иммунного ответа (16).Множество доказательств показали, что IFN, IL-12, IL-15 и IL-18 типа I способны индуцировать продукцию IFN-γ из NK-клеток (17). Производство IFN-γ NK-клеток зависит от фосфорилирования STAT4. После высвобождения IFN-γ передает сигнал через рецептор IFN-γ (IFNGR), состоящий из субъединиц IFNGR1 и IFNGR2. В классическом сигнальном пути лигирование IFN-γ с IFNGR приводит к активации JAK1 и JAK2, что приводит к гомодимеризации и фосфорилированию STAT1 (18). Однако, как и IFN типа I, IFN-γ также передает сигнал через альтернативные пути, включая STAT4, Erk1 / 2, Pyk2 и CrkL, среди прочих (18).

IFN типа I: овладение противовирусным ответом

IFN типа I — один из первых цитокинов, продуцируемых во время вирусной инфекции. В контексте инфекции HSV-2, например, существует начальная волна продукции IFN-β через 12 часов после инфицирования, за которой следует продукция IFN-β и IFN-α через 48 часов после инфицирования (19, 20 ). Эта ранняя продукция IFN типа I имеет решающее значение для индукции как противовирусного ответа в инфицированных клетках, так и для клеток-мишеней, а также для активации клеток врожденного иммунитета, которые в конечном итоге будут служить для контроля репликации вируса и активации адаптивного иммунного ответа для устранения инфекции и генерировать память для быстрого реагирования на будущие инфекции (21).

IFN типа I — это хорошо известный стимулятор антивирусных генов, нацеленных против предотвращения репликации вируса из клеток-мишеней. Когда их производство стимулируется вирусной инфекцией, IFN типа I может действовать аутокринным, паракринным или системным образом. Их защитная роль во время вирусной инфекции подчеркивается повышенной смертностью, наблюдаемой у мышей с дефицитом рецептора IFN типа I ( Ifnar, — / — ) по сравнению с их контрольными аналогами при заражении вирусом (22, 23).Было показано, что при связывании со своим рецептором IFN типа I индуцирует более 300 ISG. Было обнаружено, что из этих 300 генов 51 участвует в защите хозяина, в то время как другие гены участвуют в воспалении, передаче сигналов, транскрипции и иммуномодуляции, среди прочего (24, 25). Кроме того, De Veer et al. исследовали способность конкретных ISG или комбинаций ISG ингибировать репликацию вируса за счет сверхэкспрессии отдельных ISG до заражения вирусом (24). Они обнаружили, что многие ISG способны подавлять репликацию вирусов, причем некоторые действуют на широкий спектр вирусов, в то время как другие эффективны только против определенных вирусов (24).Интересно, что они обнаружили, что выбранные ISG усиливают репликацию вируса в их экспериментальной системе (24). Антивирусные ISG могут препятствовать репликации вируса с помощью нескольких механизмов. Например, протеинкиназа R подавляет трансляционные функции клеток (1). 2’5 OAS и RNaseL, с другой стороны, разрушают РНК (26, 27). Другие противовирусные активности ISG могут предотвращать высвобождение вирионов, подавлять проникновение вируса и ингибировать транскрипцию вируса (28).

Помимо индукции противовирусных ISG, IFN типа I являются ключевыми регуляторами врожденного иммунного ответа.В литературе по IFN I типа возникла тема, согласно которой продукция IFN I типа в острой форме способствует благоприятным противовирусным ответам, в то время как продукция IFN I типа при хроническом течении может оказывать подавляющее и пагубное влияние на иммунный ответ. В этом разделе мы исследуем способность IFN типа I способствовать противовирусным функциям в дендритных клетках (DC), моноцитах и ​​NK-клетках.

Дендритные клетки имеют решающее значение для активации противовирусных Т-клеток (29). Было показано, что стимуляция IFN типа I увеличивает экспрессию MHC II и презентацию антигенов, а также активирует костимуляторные молекулы и способствует созреванию DC (29–32). Дополнительные данные свидетельствуют о том, что IFN типа I способен увеличивать дифференцировку плазматических DC в ДК, происходящие из миелоида, для увеличения активации Т-клеток (33).

Воспалительные моноциты быстро рекрутируются в места инфекции, где они затем могут стимулировать локальную и мигрирующую противовирусную функцию иммунных клеток, способствовать воспалению и дифференцироваться в макрофаги и ДК (34). В очагах воспаления IFNs типа I индуцируют продукцию CCL2 для рекрутирования воспалительных моноцитов (2, 34). IFN типа I, продуцируемый во время вагинальной инфекции HSV-1, побуждает резидентные в ткани макрофаги и DC продуцировать CCL2 для рекрутирования и начальной популяции воспалительных моноцитов, которые затем активируют петли положительной обратной связи для производства большего количества CCL2 для привлечения дополнительных воспалительных моноцитов (35).Подобный феномен наблюдался во время вагинальной инфекции HSV-2, инфекции гриппа и рекрутирования воспалительных моноцитов в мозг во время LPS-индуцированного системного воспаления (2, 36, 37). При инфекции гриппа отсутствие IFNAR приводило к дифференцировке промежуточного звена Ly6C. экспрессирующие моноциты, а не воспалительные моноциты Ly6C hi , которые, кроме того, имели другой фенотип (36). Кроме того, Seo et al. продемонстрировали, что в костном мозге Ifnar — / — значительно снизилась дифференцировка гемопоэтических клеток в воспалительные моноциты при наличии инфекции гриппа (38).Что касается макрофагов, IFN типа I имеет более подавляющую функцию и будет обсуждаться ниже.

IFN типа I и функциональность противовирусных NK-клеток тесно взаимосвязаны, при этом IFN типа I стал ключевым регулятором NK-клеток. Как и их моноцитарные аналоги, IFN типа I участвует в привлечении NK-клеток к участкам воспаления. Во время вагинальной инфекции HSV-1 IFN типа I требовался для индукции продукции эпителием CCL3, CCL4 и CCL5 для рекрутирования NK-клеток на слизистую влагалища (35).Кроме того, IFN типа I участвует в активации противовирусных функций NK-клеток. Во время инфекции у NK-клеток есть несколько видов оружия, которые они могут использовать для борьбы с инфекцией. При активации они могут высвобождать IFN-γ, цитотоксические гранулы и вызывать гибель инфицированных клеток. IFN типа I участвует как в цитотоксичности NK-клеток, так и в продукции IFN-γ NK-клетками. Было показано, что мыши с дефицитом STAT1, ключевого фактора транскрипции, расположенного ниже рецептора IFN типа I, имеют сниженную цитотоксичность NK-клеток и повышенную вирус-индуцированную смертность по сравнению с контрольными мышами (39).В контексте продукции IFN-γ NK-клетками IFN типа I важен для этого процесса при множественных вирусных инфекциях, включая MCMV, аденовирус, вирус осповакцины и HSV (2, 40–43). Было показано, что IFN типа I действует непосредственно на NK-клетки, вызывая их высвобождение IFN-γ в контексте инфекций, вызванных аденовирусом, вирусом осповакцины и инфекциями LCMV, тогда как другие данные свидетельствуют о том, что IFN типа I стимулирует DC к транс-презентации IL-15. для активации NK-клеток при инфекции MCMV (2, 40–44). Недавно мы представили доказательства, демонстрирующие, что продукция IFN-γ NK-клетками зависит от индукции IFN типа I IL-18 из воспалительных моноцитов, а не от DC при инфекции HSV-2 слизистой оболочки (2).Наши различающиеся результаты могут быть связаны с путём заражения, когда в предыдущих доказательствах использовались системы in vitro и или пути заражения, не связанные с слизистыми оболочками.

Отрицательное регулирование IFN типа I: помимо вмешательства в инфекцию

По мере появления большего количества данных растет понимание и признание подавляющих и негативных регуляторных аспектов IFN типа I. Ранее исследования показали, что IFN типа I оказывает антипролиферативное действие на иммунные клетки и клеточные линии (45, 46).Недавно Thomas et al. элегантно продемонстрировано, что, хотя все подтипы IFN типа I способны вызывать внутриклеточный противовирусный ответ, сродство отдельного подтипа IFN типа I к рецептору IFN типа I в значительной степени определяет способность IFN типа I ингибировать клеточную пролиферацию (47). Антипролиферативный эффект IFN типа I требует более высокого сродства связывания с IFNAR (47). Помимо пролиферации, IFN типа I также может подавлять функции клеток врожденного иммунитета.

В то время как острая инфекция и активация IFN типа I полезны для усиления активации DC адаптивных функций T-клеток, было показано, что хроническая инфекция с устойчивым продуцированием IFN типа I подавляет экспансию DC и индуцирует супрессивный фенотип.При хронической инфекции LCMV стойкая сигнатура IFN типа I предотвращала дифференцировку BM и пролиферацию обычных DC (48, 49). Кроме того, стимуляция селезеночных DC с помощью IFN-β, in vivo , приводила к снижению общего числа клеток CD11c +. Было показано, что помимо уменьшения экспансии DC, сигнатура IFN хронического типа I повышает экспрессию PD-L1 и IL-10 как в DC, так и в макрофагах (50, 51).

IFN типа I в значительной степени оказывает подавляющее действие на макрофаги. В литературе в основном предполагается, что он подавляет экспрессию ими рецептора IFN-γ, делая их менее чувствительными к стимуляции IFN-γ (52).При некоторых бактериальных инфекциях, таких как francisella tularensis и mycobacterium tuberculosis , передача сигналов IFN типа I вредна для хозяина (53–56). Способность IFN типа I подавлять рецептор IFN-γ на макрофагах, вероятно, вносит свой вклад в это явление.

Как упоминалось ранее, IFN типа I, как было показано, имеет решающее значение для индукции противовирусных функций NK-клеток. И наоборот, что почти парадоксально, IFN типа I также подавляет те самые функции, которые он обеспечивает.Во время заражения LCMV Teijaro et al. обнаружили, что блокирование рецептора IFN типа I спасает продукцию IFN-γ от NK-клеток (48). Кроме того, постоянная продукция IFN типа I может индуцировать экспрессию лигандов PD-L1, что является механизмом, который может подавлять противовирусную функцию NK-клеток (48). Хотя введение пегилированного IFN-α2 привело к увеличению активации NK-клеток, экспрессии TRAIL и рецептора CD107a у лиц, инфицированных HCV, наблюдалось сопутствующее снижение количества IFN-γ + NK-клеток в компартменте PBMC (57, 58).Этот противоречивый эффект IFN типа I может происходить из-за времени и величины продуцирования IFN типа I или сдвига в ассоциации фактора транскрипции с рецептором IFN типа I. При инфекции listeria monocytogenes экзогенный IFN-β, введенный в более ранний момент времени во время инфекции, был способен активировать NK-клетки и способствовать вылечению инфекции, тогда как эндогенный IFN-β, продуцируемый через 24 часа после инфицирования, приводил к нарушению Ответ NK-клеток (59). Кроме того, Marshall et al.обнаружили, что стимуляция NK-клеток супернатантами от CpG-стимулированных pDC в дополнение к IFN-α подавляла высвобождение IFN-γ из NK-клеток (60). В плодотворном исследовании Miyagi et al. они продемонстрировали, что стимуляция NK-клеток IFN типа I сдвигает баланс факторов транскрипции от ассоциации STAT4 с рецептором IFN типа I, которая после фосфорилирования и ядерной транслокации приводит к начальному выбросу IFN-γ, к ассоциации STAT1, которая впоследствии привело к ингибированию продукции IFN-γ NK-клетками (61).Таким образом, по мере того, как увеличивающееся количество IFN типа I высвобождается во время инфекции, это приводит к увеличению сдвига в ассоциации между STAT1 и IFNAR и, в конечном итоге, к ингибированию продукции IFN-γ из NK-клеток.

Было показано, что IFN типа I не только способствует противовирусным функциям (и позже ограничивает те же самые функции), но и ограничивает повреждающие иммунные реакции, которые могут привести к патологии тканей и побочным повреждениям. В модели инфекции гриппа отсутствие рецептора IFN типа I привело к значительной вирусной иммунопатологии.Duerr et al. продемонстрировали, что эта патология опосредована активацией цитокинов 2 типа из нерегулируемых врожденных лимфоидных клеток 2 типа (ILC2) (62). Таким образом, IFN типа I подавляет функцию ILC2 во время вирусной инфекции. Было также обнаружено, что IFN типа I подавляет провоспалительную функцию моноцитов NOS2 + Ly6C lo (36). Более того, IFN типа I подавляет рекрутирование нейтрофилов, подавляя продукцию эпителиальных CXCL1 и CXCL2 во время вирусной инфекции (35, 38, 63). Нейтрофилы не только могут продуцировать множество молекул и протеаз, которые могут способствовать воспалению и повреждению тканей, но и вызывают обострения астмы у мышей, вызванные риновирусом (64, 65).Таблица, в которой сравнивается влияние IFN типа I на врожденный иммунный ответ, представлена ​​в таблице 1.

Таблица 1 . Роль IFN типа I в регуляции противовирусного врожденного иммунного ответа.

Раскрытие двойственной природы IFN типа I

В литературе появляются различные темы, которые объясняют эту лежащую в основе двойную функциональность IFN типа I. Во-первых, острые вирусные инфекции и преходящая продукция IFN типа I, по-видимому, способствуют противовирусному ответу со стороны клеток врожденного иммунитета, в то время как хронические инфекции со стойкими сигнатурами IFN типа I приводят к ослаблению противовирусного ответа (66).Это особенно очевидно в случаях хронического LCMV, которое привело к ухудшению лимфоидной архитектуры и подавлению Т-клеток, опосредованному повышенной экспрессией PD-L1 на ДК (48, 49). При инфицировании вирусом иммунодефицита обезьян (SIV) раннее введение IFN типа I приводило к снижению вирусной нагрузки, в то время как постоянное введение IFN типа I приводило к повышенному уровню вируса и истощению CD4 + Т-клеток (67, 68). Во-вторых, время и величина продуцируемого IFN типа I могут приводить к различным ответам IFN типа I, как обсуждалось ранее.

Растущий объем данных показал, что отдельные подтипы IFN типа I могут иметь разные эффекты, несмотря на передачу сигналов через один и тот же рецептор. Действительно, стимуляция DC различными подтипами IFN типа I приводила к различным профилям экспрессии рецепторов и продукции цитокинов (69). Кроме того, предварительная обработка инфицированных гриппом мышей одной и той же дозой различных подтипов IFN типа I приводила к различным уровням репликации вируса, причем IFN-α5 и IFN-α6 имели наибольшее снижение вирусной нагрузки (70).Их различное сродство к рецептору IFN типа I, длина связывания рецептора, уровень экспрессии рецептора IFN типа I и врожденные клеточные различия могут лежать в основе способности этих подтипов IFN типа I вызывать разные ответы (71). Более подробно об этом говорится в обзоре Гидеона Шрайбера (71). Однако в контексте вирусной инфекции мы предполагаем, что IFN типа I оптимизирует противовирусный ответ, активируя и усиливая полезную функцию клеток врожденного иммунитета, ограничивая при этом вредные и патологические иммунные ответы, которые могут вызывать ненужное повреждение тканей.

IFN типа II: антивирусное состояние ума

IFN-γ является важным компонентом врожденного противовирусного ответа и преимущественно продуцируется NK-клетками или врожденными лимфоидными клетками 1-го типа (2, 72, 73). В контексте инфекции HSV-2 отсутствие продукции IFN-γ приводит к усилению репликации вируса и снижению выживаемости (74, 75). Действительно, было показано, что IFN-γ индуцирует продукцию NO, мощного ингибитора репликации вируса, из окружающих клеток (72, 76). Кроме того, IFN-γ может индуцировать внутриклеточные противовирусные программы, включая PKR, в результате перекрытия экспрессии их генов с IFN типа I (77).Однако помимо этого было продемонстрировано, что сам IFN-γ влияет на функцию окружающих клеток врожденного иммунитета, включая макрофаги и DC.

Воздействие противовирусного IFN-γ на антигенпредставляющие клетки (APC) заключается в усилении стимуляции адаптивного противовирусного ответа как для устранения инфекции, так и для создания памяти в качестве защиты от будущих инфекций (78, 79). Таким образом, это критический компонент реакции Th2. Стимуляция IFN-γ усиливает процесс презентации антигена во время примирования Т-клеток.Было показано, что он увеличивает различные аспекты презентации антигена, включая эффективность, количество, качество и разнообразие пептидов, загружаемых в рецептор MHC I (80). Наряду с MHC I, IFN-γ увеличивает экспрессию MHC II и созревание DC (81). Кроме того, он индуцирует экспрессию IL-12 и костимулирующего CD80 в антигенпрезентирующих клетках, что является критическим компонентом поляризации Th2 (82–84).

Что касается макрофагов, то IFN-γ индуцированное производство NO этими клетками не только подавляет репликацию вируса, но также сильно расширяет сосуды кровеносных сосудов, уменьшая кровоток и обеспечивая повышенную экстравазацию рекрутированных иммунных клеток к месту инфекции и воспаления (80) .Кроме того, IFN-γ, как было показано, «запускает» макрофаги для высвобождения активных форм кислорода посредством активации клеточных компонентов, необходимых для этой функции (85). IFN-γ также, по-видимому, увеличивает фагоцитоз, опосредованный рецепторами макрофагов, за счет активации рецепторов комплемента, хотя это наблюдается больше при бактериальных инфекциях, чем при вирусных (86). Кроме того, IFN-γ способствует поляризации макрофагов до фенотипа M1 и заставляет эти клетки продуцировать провоспалительные цитокины IL-12, TNF-α и IL-1β (87, 88).

Отрицательное регулирование IFN типа II: новая роль

IFN-γ имеет много общих черт с IFN типа I, включая подавление иммунных ответов типа 2 и ингибирование пролиферации. Однако в контексте вирусной инфекции мы полагаем, что IFN-γ, высвобождаемый во время врожденного иммунного ответа, играет более поддерживающую роль в этом отношении, поскольку он менее эффективен по своим эффектам по сравнению с IFN типа I. Помимо IFN типа I, IFN-γ выполняет ряд иммунорегуляторных функций, которые служат для оптимизации противовирусного ответа и ограничения чрезмерных ответов, которые могут привести к побочным повреждениям.

Оптимальный противовирусный ответ включает как активацию полезных иммунных ответов, так и одновременное подавление непрактичных и потенциально повреждающих реакций. В контексте вирусной инфекции IFN-γ является прототипом цитокина, стимулирующего Th2. Кроме того, данные Kang et al. демонстрирует, что IFN-γ играет критическую роль не только в поляризации макрофагов до фенотипа M1, но и активно подавляет путь поляризации M2 (87). Однако недавние данные показали, что IFN типа I способен подавлять иммунитет типа 2.Независимо и Duerr et al. и Моро и др. продемонстрировали, что, как и IFN типа I, IFN-γ способен подавлять пролиферацию ILC2 и продукцию цитокинов типа 2 (62, 89). Действительно, введение in vivo и IFN-γ сильно подавляло индуцированную IL-33 пролиферацию ILC2, которая зависела от передачи сигналов STAT1 (62). В контексте инфекции RSV, мыши Stat1 — / — , фактор транскрипции, расположенный ниже IFN типа I и типа II, приводили к усилению патологии легких из-за увеличения продукции цитокинов из ILC2 и ILC3 (90).Кроме того, на мышиной модели инфекции гриппа введение IFN-γ подавляло функцию ILC2, в то время как дефицит IFN-γ приводил к увеличению высвобождения IL-5 и амфирегулина из ILC2. Эти авторы в конечном итоге обнаружили, что подавляющее действие IFN-γ на функцию ILC2 приводит к усилению патологии легких (91).

Наряду с подавлением иммунных ответов, есть данные, демонстрирующие, что IFN-γ может косвенно индуцировать иммунорегуляторные эффекты через активацию PD-L1 и дифференцировку подавляющих клеток миелоидного происхождения.Было показано, что в сочетании с GM-CSF IFN-γ дифференцирует моноциты в супрессорные клетки миелоидного происхождения (MDSC) in vitro (92). На модели эндотоксемии на мышах IFN-γ также повышает регуляцию PD-L1 на нейтрофилах (93). Таблица, в которой сравнивается влияние IFN-γ на врожденный иммунный ответ, представлена ​​в таблице 2.

Таблица 2 . Роль IFN-γ в регуляции противовирусного врожденного иммунного ответа.

Понимание двойственной природы IFN-γ: разгадывая парадокс

Подобно IFN типа I, IFN-γ обладает как кажущимися парадоксальными активирующими, так и подавляющими функциями в отношении врожденного противовирусного ответа.Эти функции можно разделить на части, если мы исследуем тип клеток, на которые действует IFN-γ, и включим в картину другие цитокины с IFN-γ. Если мы рассмотрим макрофаги, IFN-γ имеет дополнительные эффекты по индукции противовирусной функции макрофагов. IFN-γ индуцирует продукцию NO, усиливает антигенпредставляющую функцию макрофагов и общий фенотип M1, одновременно активно подавляя фенотип M2 (72, 80, 87). Подобно макрофагам, IFN-γ преимущественно увеличивает функцию презентации антигена DC.Кроме того, IFN-γ оказывает преимущественно подавляющее действие на клетки ILC2 (62).

IFN-γ как цитокин редко действует в одиночку, и его эффекты следует рассматривать в сочетании с другими цитокинами, присутствующими в местном микроокружении. Комбинаторный эффект между IFN-γ и другими цитокинами, вероятно, играет роль в конечном результате стимуляции IFN-γ. В самом деле, как IFN-γ, так и TNF-α, как было показано, действуют синергично в повышении регуляции iNOS в макрофагах. Salim et al. использовали математическое моделирование, чтобы выделить роли каждого цитокина, и обнаружили, что TNF-α в значительной степени отвечает за время индукции iNOS, вызывая быстрый ответ, тогда как IFN-γ влияет на уровни и концентрации продукции NO (94).Кроме того, роль IFN-γ в процессе дифференцировки MDSC in vitro и требует первоначального примирования с помощью GM-CSF. Ribechini et al. обнаружили, что GM-CSF изменяет сигнальный путь IFN-γ, позволяя ему дифференцировать моноциты в MDSC (92). В недавней статье Zha et al. они обнаружили, что IFN-γ способен подавлять функции цитокинов gp130, в частности способность OSM, дифференцировать мезенхимальные стволовые клетки за счет активации STAT1, сопутствующего снижения активации STAT3 и интернализации рецептора gp130 (95).Таким образом, IFN-γ может как изменяться дополнительной передачей сигналов цитокинов, так и регулировать пути передачи сигналов других цитокинов.

Собираем кусочки головоломки вместе

По мере того, как мы начинаем складывать вместе кусочки головоломки типа I и типа II IFN, мы можем видеть, что эти два цитокина действуют согласованно друг с другом, ограничивая репликацию вируса и стимулируя противовирусный адаптивный иммунный ответ, одновременно подавляя пагубные функции других иммунных систем. клетки для ограничения патологии тканей.Используя в качестве примера вагинальную инфекцию HSV-2, мы обнаруживаем, что существует несколько волн продукции IFN типа I, начиная с IFN-β через 12 часов после инфицирования (20). Эта ранняя волна IFN-β, вероятно, ответственна за индукцию MCP-1-опосредованного рекрутирования воспалительных моноцитов, что в конечном итоге приводит к индуцированной IL-18 продукции IFN-γ NK-клетками (2). Отсюда мы наблюдали вторую волну продукции IFN типа I, как IFN-α, так и IFN-β, через 48 часов после инфицирования (19). Наряду с IFN типа I наблюдается резкое увеличение IFN-γ из NK-клеток через 48 часов после заражения (16).IFN-γ, высвобождаемый NK-клетками, также негативно регулируется IFN типа I, поскольку NK-клетки, лишенные IFNAR, увеличивают продукцию IFN-γ в контексте инфекции HSV-2 (2). Эта вторая волна IFN типа I и II, вероятно, работают вместе друг с другом, способствуя созреванию APC, активации костимулирующих молекул, а также процессингу и презентации антигена для усиления поляризации Th2, одновременно подавляя опосредованную ILC2 иммунопатологию (Рисунок 1).

Рисунок 1 .Роль IFNs во врожденном иммунном ответе на инфекцию HSV-2. (1) IFN-β продуцируется через 12 часов после заражения и посредством аутокринной и паракринной передачи сигналов переводит окружающие клетки в антивирусное состояние. (2) IFN-β, продуцируемый через 12 часов после инфицирования, также увеличивает продукцию CCL2 между 1 и 2 днями после инфицирования, что приводит к рекрутированию воспалительных моноцитов и участвует в рекрутировании NK-клеток. (3) Привлеченные воспалительные моноциты приводят к высвобождению IL-18, который стимулирует NK-клетки продуцировать IFN-γ через 48 часов после инфицирования.(4) Вторая волна IFN типа I, включая как IFN-α, так и IFN-β, выявляется через 48 часов после заражения. (5) И IFN-γ, и IFN типа I, продуцируемые через 48 часов после инфицирования, усиливают способность презентации антигена APC для стимуляции адаптивного иммунного ответа Th2. (6) Одновременно IFN типа I через 48 ч ингибируют ILC2-опосредованную вирус-индуцированную иммунопатологию. IFN-γ, поддерживающий негативные регуляторные эффекты IFN типа I, также подавляет опосредованную ILC2 иммунопатологию.

Без IFN типа I и потенциально без IFN типа II происходит неконтролируемая репликация вируса в сочетании с неконтролируемым воспалением, которые вместе вызывают гибель тканей.С другой стороны, хроническая сигнатура IFN типа I вредна, поскольку может привести к иммуносупрессии и усилению репликации вируса. Таким образом, мы полагаем, что для регулирования оптимального и благоприятного противовирусного врожденного иммунного ответа требуется сбалансированный и соответствующий -й тип I IFN-ответ.

Клинические последствия: выход за рамки инфекции

В то время как основное внимание в этом обзоре уделяется IFN типа I и II и их способности контролировать врожденный иммунный ответ, IFN участвуют в нескольких неинфекционных патологических состояниях.Некоторые аутоиммунные заболевания, наиболее заметным из которых является системная красная волчанка (СКВ), имеют высокие сигнатуры IFN I типа, связанные с их патологией (96). Антитело, нацеленное на человеческий IFNAR, недавно было разработано, чтобы блокировать эту сигнатуру с терапевтическим эффектом (97). С другой стороны, терапия IFN-β оказалась успешной в лечении рассеянного склероза (98). Действительно, концепции, обсуждаемые в этом обзоре, актуальны в контексте фармакотерапии, нацеленной на пути IFN типа I и типа II.Возникает вопрос: какова роль IFN типа I вне вирусной инфекции? Растущее количество доказательств показывает, что продукция IFN типа I не изолирована от стимулов инфекционного заболевания, она может вырабатываться во время любого воспалительного инсульта. Таким образом, наше фундаментальное понимание врожденного иммунного ответа во время вирусной инфекции имеет важное значение для многих болезненных процессов, помимо вирусной инфекции.

Авторские взносы

AL разработал темы и идеи и написал рукопись.А.А. руководил и редактировал рукопись.

Заявление о конфликте интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Благодарности

Эта работа была поддержана грантом Канадского института исследований в области здравоохранения (CIHR), предоставленным Али Ашкару. Али Ашкар также является стипендиатом Канадского исследовательского центра уровня 1 CIHR.

Список литературы

1.Мерс Э., Чонг К., Галабру Дж., Томас Н.С., Керр И.М., Уильямс Б.Р. и др. Молекулярное клонирование и характеристика человеческой двухцепочечной РНК-активированной протеинкиназы, индуцированной интерфероном. Cell (1990) 62: 379–90. DOI: 10.1016 / 0092-8674 (90) -N

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

2. Ли А.Дж., Чен Б., Чу М.В., Барра Н.Г., Шенуда М.М., Нхам Т. и др. Воспалительным моноцитам требуется передача сигналов рецептора интерферона I типа для активации NK-клеток через IL-18 во время вирусной инфекции слизистой оболочки. J Exp Med . (2017) 214: 1153–67. DOI: 10.1084 / jem.20160880

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

5. Сунь Л., Ву Дж, Ду Ф, Чен Х, Чен З. Циклическая GMP-AMP-синтаза представляет собой цитозольный ДНК-сенсор, который активирует путь интерферона I типа. Наука (2013) 339: 786–91. DOI: 10.1126 / science.1232458

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

6. Хонда К., Такаока А., Танигучи Т. Индукция гена интерферона типа I [скорректированная] семейством факторов регуляции интерферона факторов транскрипции. Иммунитет (2006) 25: 349–60. DOI: 10.1016 / j.immuni.2006.08.009

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

7. Тамура Т., Янаи Х., Савицкий Д., Танигучи Т. Факторы транскрипции семейства IRF в иммунитете и онкогенезе. Annu Rev Immunol. (2008) 26: 535–84. DOI: 10.1146 / annurev.immunol.26.021607.0

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

8. Макнаб Ф., Майер-Барбер К., Шер А., Вак А., О’Гарра А. и интерфероны типа I при инфекционных заболеваниях Nat Rev Immunol .(2015) 15: 87–103. DOI: 10.1038 / nri3787

CrossRef Полный текст

9. Маркетти М., Монье М.Н., Фрадаграда А., Митчелл К., Байшелье Ф., Ид П. и др. Стат-опосредованная передача сигналов, индуцированная интерферонами типа I и типа II (IFN), по-разному контролируется посредством ассоциации липидных микродоменов и клатрин-зависимого эндоцитоза рецепторов IFN. Mol Biol Cell (2006) 17: 2896–909. DOI: 10.1091 / mbc.e06-01-0076

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

10.Уддин С., Лекмин Ф, Шарма Н., Майчжак Б., Майер И., Янг П.Р. и др. Путь митоген-активируемой протеинкиназы Rac1 / p38 необходим для интерферон-альфа-зависимой транскрипционной активации, но не фосфорилирования серина белков Stat. Дж Биол Химия . (2000) 275: 27634–40. DOI: 10.1074 / jbc.M003170200

CrossRef Полный текст | Google Scholar

11. Уддин С., Йенуш Л., Сан XJ, Sweet ME, White MF, Platanias LC. Интерферон-альфа взаимодействует с субстратом-1 рецептора инсулина для связывания с фосфатидилинозитол-3′-киназой. Дж Биол Химия . (1995) 270: 15938–41. DOI: 10.1074 / jbc.270.27.15938

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

12. Уддин С., Майчжак Б., Вудсон Дж., Арункумар П., Алсайед Ю., Пайн Р. и др. Активация митоген-активируемой протеинкиназы p38 интерферонами I типа. Дж Биол Химия . (1999) 274: 30127–31. DOI: 10.1074 / jbc.274.42.30127

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

13. Platanias LC, Sweet ME.Интерферон альфа индуцирует быстрое фосфорилирование тирозина протоонкогенного продукта vav в гемопоэтических клетках. Дж Биол Химия . (1994) 269: 3143–6.

PubMed Аннотация | Google Scholar

14. Ахмад С., Алсайед Ю.М., Друкер Б.Дж., Платаниас Л.С. Рецептор интерферона типа I опосредует фосфорилирование тирозина адаптерного белка CrkL. Дж Биол Химия . (1997) 272: 29991–4. DOI: 10.1074 / jbc.272.48.29991

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

15.де Верд Н.А., Вивиан Дж. П., Нгуен Т.К., Манган Н.Э., Гулд Дж.А., Бранифф С.Дж. и др. Структурная основа уникальной оси передачи сигналов интерферона-бета, опосредованной рецептором IFNAR1. Нат Иммунол . (2013) 14: 901–7. DOI: 10.1038 / ni.2667

CrossRef Полный текст | Google Scholar

16. Гилл Н., Ченовет М.Дж., Верду Э.Ф., Ашкар А.А. NK-клеткам требуется рецептор IFN типа I для противовирусного ответа во время генитальной инфекции HSV-2. Клеточный Иммунол . (2011) 269: 29–37. DOI: 10.1016 / j.Cellimm.2011.03.007

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

17. Пеграм Х. Дж., Эндрюс Д. М., Смит М. Дж., Дарси П. К., Кершоу М. Х. Активирующие и ингибирующие рецепторы естественных клеток-киллеров. Иммунол Клетки Биол . (2011) 89: 216–24. DOI: 10.1038 / icb.2010.78

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

19. Oh JE, Kim BC, Chang DH, Kwon M, Lee SY, Kang D, et al. Вызванный дисбиозом IL-33 способствует нарушению противовирусного иммунитета слизистой оболочки половых органов. Proc Natl Acad Sci USA . (2016) 113: E762–71. DOI: 10.1073 / pnas.1518589113

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

20. Гилл Н., Дикон П.М., Личти Б., Моссман К.Л., Ашкар А.А. Индукция врожденного иммунитета против инфекции вируса простого герпеса 2 типа посредством локальной доставки лигандов Toll-подобных рецепторов коррелирует с продукцией бета-интерферона. Дж Вирол . (2006) 80: 9943–50. DOI: 10.1128 / JVI.01036-06

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

21.Ли А.Дж., Ашкар А.А. Вирус простого герпеса-2 в слизистой оболочке половых органов: понимание реакции хозяина слизистой оболочки и разработка вакцины. Астраханьская инфекция . (2012) 25: 92–9. DOI: 10.1097 / QCO.0b013e32834e9a56

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

22. Muller U, Steinhoff U, Reis LF, Hemmi S, Pavlovic J, Zinkernagel RM, et al. Функциональная роль интерферонов типа I и типа II в противовирусной защите. Science (1994) 264: 1918–21. DOI: 10.1126 / наука.8009221

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

23. van den Broek MF, Muller U, Huang S, Zinkernagel RM, Aguet M. Иммунная защита у мышей, лишенных рецепторов интерферона типа I и / или типа II. Иммунол Ред. . (1995) 148: 5–18. DOI: 10.1111 / j.1600-065X.1995.tb00090.x

CrossRef Полный текст | Google Scholar

24. де Вир MJ, Holko M, Frevel M, Walker E, Der S, Paranjape JM, et al. Функциональная классификация генов, стимулированных интерфероном, идентифицированная с помощью микрочипов. Дж Лейкок Биол . (2001) 69: 912–20. DOI: 10.1189 / jlb.69.6.912

CrossRef Полный текст | Google Scholar

25. Schoggins JW, Wilson SJ, Panis M, Murphy MY, Jones CT, Bieniasz P, et al. Различные генные продукты являются эффекторами противовирусного ответа интерферона типа I. Nature (2011) 472: 481–5. DOI: 10.1038 / nature09907

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

27. Кэрролл С.С., Чен Э., Виконт Т., Гейб Дж., Сардана М.К., Геман Дж. И др.Расщепление олигорибонуклеотидов 2 ‘, 5’-олигоаденилат-зависимой рибонуклеазой L. J Biol Chem . (1996) 271: 4988–92. DOI: 10.1074 / jbc.271.9.4988

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

28. Лю С.Ю., Санчес Д.Д., Ченг Г. Новые разработки в области индукционных и противовирусных эффекторов интерферона типа I. Курр Опин Иммунол . (2011) 23: 57–64. DOI: 10.1016 / j.coi.2010.11.003

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

29.Курче Дж. С., Халущак К., МакВильямс Дж. А., Санчес П. Дж., Кедл Р. М.. IFN-зависимая активация Т-клеток типа I опосредуется IFN-зависимой экспрессией лиганда OX40 дендритных клеток и не зависит от экспрессии IFNR Т-клеток. Дж Иммунол . (2012) 188: 585–93. DOI: 10.4049 / jimmunol.1102550

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

30. Симмонс Д.П., Вирш П.А., Канадей Д.Х., Мейерсон Х.Дж., Лю Ю.К., Ван И и др. IFN типа I управляет характерным фенотипом созревания дендритных клеток, который позволяет продолжать синтез MHC класса II и процессинг антигена. Дж Иммунол . (2012) 188: 3116–26. DOI: 10.4049 / jimmunol.1101313

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

31. Монтойя М., Скьявони Дж., Маттей Ф., Грессер И., Беларделли Ф., Бэрроу П. и др. Интерфероны типа I, продуцируемые дендритными клетками, способствуют их фенотипической и функциональной активации. Кровь (2002) 99: 3263–71. DOI: 10.1182 / blood.V99.9.3263

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

32. Хам Б., Трифило М.Дж., Зунига Е.И., Олдстон МБ.Вирусы уклоняются от иммунной системы через опосредованную интерфероном I типа STAT2-зависимую, но независимую от STAT1 передачу сигналов. Иммунитет (2005) 22: 247–57. DOI: 10.1016 / j.immuni.2005.01.005

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

33. Зунига Э.И., МакГэверн ДБ, Прунэда-Пас Ж.Л., Тенг К., Олдстоун МБ. Плазмацитоидные дендритные клетки костного мозга могут дифференцироваться в миелоидные дендритные клетки при вирусной инфекции. Нат Иммунол . (2004) 5: 1227–34. DOI: 10.1038 / ni1136

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

34. Iijima N, Mattei LM, Iwasaki A. Рекрутированные воспалительные моноциты стимулируют противовирусный иммунитет Th2 в инфицированной ткани. Proc Natl Acad Sci USA . (2011) 108: 284–9. DOI: 10.1073 / pnas.1005201108

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

35. Уянгаа Е., Ким Дж. Х., Патил А. М., Чой Дж. Й., Ким С. Б., Эо С. К.. Определенная восходящая роль передачи сигналов IFN типа I в гемопоэтических стволовых клетках и резидентных эпителиальных клетках для согласованного рекрутирования моноцитов Ly-6Chi и NK-клеток через каскад CCL2-CCL3. PLoS Pathog (2015) 11: e1005256. DOI: 10.1371 / journal.ppat.1005256

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

36. Стифтер С.А., Бхаттачарья Н., Пиллай Р., Флоридо М., Трикас Дж. А., Бриттон В. Дж. И др. Функциональное взаимодействие между интерферонами типа I и II необходимо для ограничения воспаления тканей, вызванного вирусом гриппа А. PLoS Pathog (2016) 12: e1005378. DOI: 10.1371 / journal.ppat.1005378

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

37.Перальта Рамос Дж. М., Бусси С., Гавилио Е. А., Арройо Д. С., Баез Н. С., Родригес-Галан М.С. и др. Интерфероны типа I необходимы для содействия иммунному надзору в центральной нервной системе за счет привлечения воспалительных моноцитов при системном воспалении. Фронт Иммунол . (2017) 8: 1666. DOI: 10.3389 / fimmu.2017.01666

CrossRef Полный текст | Google Scholar

38. Seo SU, Kwon HJ, Ko HJ, Byun YH, Seong BL, Uematsu S и др. Передача сигналов интерферона типа I регулирует Ly6C (hi) моноциты и нейтрофилы во время острой вирусной пневмонии у мышей. ПЛоС Патог . (2011) 7: e1001304. DOI: 10.1371 / journal.ppat.1001304

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

40. Martinez J, Huang X, Yang Y. Прямое действие IFN типа I на NK-клетки необходимо для их активации в ответ на вирусную инфекцию осповакцины in vivo . Дж Иммунол . (2008) 180: 1592–7. DOI: 10.4049 / jimmunol.180.3.1592

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

41. Чжу Дж, Хуан Х, Ян Ю.Критическая роль для IFN-зависимой активации NK-клеток типа I в элиминации аденовирусных векторов in vivo врожденным иммунитетом. Мол Тер . (2008) 16: 1300–7. DOI: 10,1038 / мт.2008,88

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

42. Лукас М., Шахтерле В., Оберле К., Айхеле П., Дифенбах А. Дендритные клетки запускают естественные клетки-киллеры путем транс-презентации интерлейкина 15. Иммунитет (2007) 26: 503–17. DOI: 10.1016 / j.immuni.2007.03.006

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

43.Баранек Т., Манх Т.П., Александр Й., Макбул М.А., Кабеза Дж.З., Томаселло Э. и др. Дифференциальные ответы иммунных клеток на интерферон I типа способствуют устойчивости хозяина к вирусной инфекции. Клеточный микроб-хозяин . (2012) 12: 571–84. DOI: 10.1016 / j.chom.2012.09.002

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

44. Mack EA, Kallal LE, Demers DA, Biron CA. Индукция интерфероном 1 типа продукции естественных клеток-киллеров гамма-интерферона для защиты во время инфицирования вирусом лимфоцитарного хориоменингита. MBio (2011) 2: e00169–11. DOI: 10.1128 / mBio.00169-11

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

45. Паукер К., Кантелл К., Хенле В. Количественные исследования вирусной интерференции в суспендированных L-клетках. III. Влияние мешающих вирусов и интерферона на скорость роста клеток. Вирусология (1962) 17: 324–34. DOI: 10.1016 / 0042-6822 (62) -X

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

47. Томас К., Морага И., Левин Д., Круцик П.О., Подоплелова Ю., Трехо А. и др.Структурная связь между дискриминацией лиганда и активацией рецептора интерферонами типа I. Cell (2011) 146: 621–32. DOI: 10.1016 / j.cell.2011.06.048

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

48. Тейджаро Дж. Р., Нг К., Ли А. М., Салливан Б. М., Шихан К. С., Уэлч М. и др. Стойкая инфекция LCMV контролируется блокадой передачи сигналов интерферона I типа. Наука (2013) 340: 207–11. DOI: 10.1126 / science.1235214

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

49.Wilson EB, Yamada DH, Elsaesser H, Herskovitz J, Deng J, Cheng G и др. Блокада хронической передачи сигналов интерферона типа I для контроля стойкой инфекции LCMV. Наука (2013) 340: 202–7. DOI: 10.1126 / science.1235208

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

50. Wilson EB, Kidani Y, Elsaesser H, Barnard J, Raff L, Karp CL, et al. Появление отчетливых многоцелевых иммунорегуляторных антиген-презентирующих клеток во время персистирующей вирусной инфекции. Клеточный микроб-хозяин .(2012) 11: 481–91. DOI: 10.1016 / j.chom.2012.03.009

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

51. Ng CT, Oldstone MB. Инфицированные CD8альфа-дендритные клетки являются преобладающим источником IL-10 во время установления стойкой вирусной инфекции. Proc Natl Acad Sci USA . (2012) 109: 14116–21. DOI: 10.1073 / pnas.1211

9

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

52. Эшлеман Э.М., Дельгадо С., Кирни С.Дж., Фридман Р.С., Ленц Л.Л.Подавляющая регуляция макрофага IFNGR1 усугубляет системную инфекцию L. monocytogenes. ПЛоС Патог . (2017) 13: e1006388. DOI: 10.1371 / journal.ppat.1006388

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

53. Макнаб Ф.В., Юбанк Дж., Хоус А., Морейра-Тейшейра Л., Мартиросян А., Гиларди Н. и др. IFN типа I индуцирует продукцию IL-10 независимым от IL-27 образом и блокирует реакцию на IFN-гамма для продукции IL-12 и уничтожения бактерий в макрофагах, инфицированных Mycobacterium tuberculosis . Дж Иммунол . (2014) 193: 3600–12. DOI: 10.4049 / jimmunol.1401088

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

54. Новиков А., Кардон М., Томпсон Р., Шендеров К., Киршман К.Д., Майер-Барбер К.Д. и др. Mycobacterium tuberculosis запускает передачу сигналов IFN типа I хозяина для регулирования продукции IL-1beta в макрофагах человека. Дж Иммунол . (2011) 187: 2540–7. DOI: 10.4049 / jimmunol.1100926

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

55.Генри Т., Кириманджешвара Г.С., Руби Т., Джонс Дж. У., Пэн К., Перрет М. и др. Передача сигналов IFN типа I ограничивает секрецию IL-17A / F гаммадельта-Т-клетками во время бактериальных инфекций. Дж Иммунол . (2010) 184: 3755–67. DOI: 10.4049 / jimmunol.05

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

57. Аленстиэль Дж., Эдлих Б., Хогдал Л.Дж., Ротман Ю., Нуреддин М., Фельд Дж. Дж. И др. Ранние изменения функции естественных клеток-киллеров указывают на вирусологический ответ на терапию интерфероном при гепатите С. Гастроэнтерология (2011) 141: 1231–9, 1239 e1-2. DOI: 10.1053 / j.gastro.2011.06.069

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

58. Werner JM, Serti E, Chepa-Lotrea X, Stoltzfus J, Ahlenstiel G, Noureddin M, et al. Рибавирин улучшает IFN-гамма-ответ естественных клеток-киллеров на терапию вирусом гепатита C на основе IFN. Гепатология (2014) 60: 1160–9. DOI: 10.1002 / hep.27092

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

59.Понтироли Ф., Дюссургет О, Занони И., Урбано М., Беретта О, Грануччи Ф. и др. Время продукции IFNbeta влияет на ранние врожденные ответы на Listeria monocytogenes и определяет общий исход летальной инфекции. PLoS ONE (2012) 7: e43455. DOI: 10.1371 / journal.pone.0043455

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

60. Marshall JD, Heeke DS, Abbate C, Yee P, Van Nest G. Индукция гамма-интерферона из естественных клеток-киллеров с помощью иммуностимулирующей CpG ДНК опосредуется через интерферон-альфа, продуцируемый плазматическими дендритными клетками, и фактор некроза опухоли. альфа. Иммунология (2006) 117: 38–46. DOI: 10.1111 / j.1365-2567.2005.02261.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

61. Мияги Т., Гиль М.П., ​​Ван X, Лутен Дж., Чу В.М., Бирон, Калифорния. Высокий базальный STAT4, сбалансированный индукцией STAT1, для контроля эффектов интерферона 1 типа в естественных клетках-киллерах. J Exp Med . (2007) 204: 2383–96. DOI: 10.1084 / jem.20070401

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

62. Duerr CU, McCarthy CD, Mindt BC, Rubio M, Meli AP, Pothlichet J, et al.Интерферон I типа ограничивает иммунопатологию 2-го типа за счет регуляции врожденных лимфоидных клеток 2-й группы. Нат Иммунол . (2016) 17: 65–75. DOI: 10.1038 / ni.3308

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

63. Приклад AT, Smith JM, Carbone FR. IFN типа I подавляет рекрутирование нейтрофилов, вызванное Cxcr2, в сенсорные ганглии во время вирусной инфекции. J Exp Med . (2014) 211: 751–9. DOI: 10.1084 / jem.20132183

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

65.Туссент М., Джексон Д. Д., Свебода Д., Гедан А., Цурукцоглоу Т. Д., Чинг Ю. М. и др. ДНК хозяина, выделяемая NETosis, способствует обострению аллергической астмы 2 типа, вызванной риновирусом. Нат Мед . (2017) 23: 681–91. DOI: 10,1038 / нм 4332

CrossRef Полный текст | Google Scholar

67. Жаклин Б., Маяу В., Таргат Б., Лиоват А.С., Кункель Д., Петижан Г. и др. Непатогенная SIV-инфекция африканских зеленых мартышек вызывает сильный, но быстро контролируемый ответ IFN типа I. Дж Клин Инвест .(2009) 119: 3544–55. DOI: 10.1172 / JCI40093

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

68. Сандлер Н.Г., Босингер С.Е., Эстес Д.Д., Чжу Р.Т., Тарп Г.К., Бориц Э. и др. Реакция интерферона I типа у макак-резусов предотвращает инфекцию SIV и замедляет прогрессирование заболевания. Nature (2014) 511: 601–5. DOI: 10.1038 / природа13554

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

69. Гарсин Дж., Бордат Ю., Чучана П., Моннерон Д., Лоу Х. К., Пилер Дж. И др.Дифференциальная активность подтипов интерферона I типа для дифференцировки дендритных клеток. PLoS ONE (2013) 8: e58465. DOI: 10.1371 / journal.pone.0058465

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

70. Джеймс С.М., Абдад М.Ю., Мэнсфилд Дж. П., Якобсен Х. К., Винд А. Р., Stumbles PA и др. Дифференциальная активность подтипов альфа / бета IFN против вируса гриппа in vivo и усиление специфических иммунных ответов у мышей, вакцинированных ДНК, экспрессирующих гемагглютинин и нуклеопротеин. Vaccine (2007) 25: 1856–67. DOI: 10.1016 / j.vaccine.2006.10.038

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

72. Карупиа Дж., Се К. В., Буллер Р. М., Натан К., Дуарте С., МакМикинг Дж. Д.. Подавление репликации вируса интерферон-гамма-индуцированной синтазой оксида азота. Science (1993) 261: 1445–8. DOI: 10.1126 / science.76

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

73. Вейцман О.Е., Адамс Н.М., Шустер И.С., Кришна С., Притыкин Ю., Лау С. и др.ILC1 обеспечивает раннюю защиту хозяина на начальных участках вирусной инфекции. Ячейка (2017) 171: 795–808 e12. DOI: 10.1016 / j.cell.2017.09.052

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

74. Thapa M, Kuziel WA, Carr DJ. Восприимчивость мышей с дефицитом CCR5 к вирусу простого генитального герпеса 2 типа связана с мобилизацией NK-клеток. Дж Вирол . (2007) 81: 3704–13. DOI: 10.1128 / JVI.02626-06

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

75.Ашкар А.А., Розенталь К.Л. Интерлейкин-15, естественные киллеры и NKT-клетки играют решающую роль в врожденной защите от инфекции вируса простого герпеса 2 типа. Дж Вирол . (2003) 77: 10168–71. DOI: 10.1128 / JVI.77.18.10168-10171.2003

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

77. Ян Ю.Л., Рейс Л.Ф., Павлович Дж., Агуцци А., Шафер Р., Кумар А. и др. Недостаточная передача сигналов у мышей, лишенных двухцепочечной РНК-зависимой протеинкиназы. EMBO J .(1995) 14: 6095–106.

PubMed Аннотация | Google Scholar

78. Goldszmid RS, Caspar P, Rivollier A, White S, Dzutsev A, Hieny S, et al. Интерферон-гамма, полученный из NK-клеток, управляет клеточной динамикой и дифференцировкой моноцитов в дендритные клетки в месте инфекции. Иммунитет (2012) 36: 1047–59. DOI: 10.1016 / j.immuni.2012.03.026

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

79. Мартин-Фонтеча А., Томсен Л.Л., Бретт С., Джерард С., Липп М., Ланзавеккья А. и др.Индуцированное привлечение NK-клеток к лимфатическим узлам обеспечивает IFN-гамма для прайминга T (H) 1. Нат Иммунол . (2004) 5: 1260–5. DOI: 10.1038 / ni1138

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

81. Steimle V, Siegrist CA, Mottet A, Lisowska-Grospierre B, Mach B. Регуляция экспрессии MHC класса II интерфероном-гамма, опосредованная трансактиваторным геном CIITA. Science (1994) 265: 106–9. DOI: 10.1126 / science.8016643

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

82.Йокодзе Х., Катаяма И., Оки О, Аримура М., Такаяма К., Мацунага Т. и др. Интерферон-гамма по-разному регулирует экспрессию CD80 (B7-1) и CD86 (B7-2 / B70) на клетках Лангерганса человека. Br J Дерматол . (1997) 136: 831–7. DOI: 10.1111 / j.1365-2133.1997.tb03921.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

83. Bauvois B, Nguyen J, Tang R, Billard C, Kolb JP. Интерфероны типов I и II активируют костимулирующую молекулу CD80 в моноцитах через регуляторный фактор-1 интерферона. Биохим Фармакол . (2009) 78: 514–22. DOI: 10.1016 / j.bcp.2009.05.005

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

84. Ма Х, Чоу Дж. М., Гри Дж., Карра Дж., Героса Ф., Вольф С. Ф. и др. Промотор гена интерлейкина 12 p40 примирован интерфероном гамма в моноцитарных клетках. J Exp Med . (1996) 183: 147–57. DOI: 10.1084 / jem.183.1.147

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

86. Древец Д.А., Линен П.Дж., Кэмпбелл П.А.Рецептор комплемента типа 3 опосредует фагоцитоз и уничтожение Listeria monocytogenes гибридом предшественников макрофагов, стимулированных TNF-альфа и IFN-гамма. Клеточный Иммунол . (1996) 169: 1–6. DOI: 10.1006 / cimm.1996.0083

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

87. Кан К., Пак Ш., Чен Дж., Цяо Й., Джаннопулу Е., Берг К. и др. Интерферон-гамма подавляет экспрессию гена M2 в макрофагах человека, разбирая энхансеры, связанные с фактором транскрипции MAF. Иммунитет (2017) 47: 235–250 e4. DOI: 10.1016 / j.immuni.2017.07.017

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

88. Ван Ф, Чжан С., Чон Р., Вукович И., Цзян Х, Лерман А. и др. Гамма-интерферон вызывает обратимое метаболическое перепрограммирование макрофагов M1 для поддержания жизнеспособности клеток и провоспалительной активности. EBioMedicine (2018) 30: 303–16. DOI: 10.1016 / j.ebiom.2018.02.009

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

89.Моро К., Кабата Х., Танабе М., Кога С., Такено Н., Мочизуки М. и др. Интерферон и ИЛ-27 противодействуют функции врожденных лимфоидных клеток 2-й группы и врожденным иммунным ответам 2-го типа. Нат Иммунол . (2016) 17: 76–86. DOI: 10.1038 / ni.3309

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

90. Stier MT, Goleniewska K, Cephus JY, Newcomb DC, Sherrill TP, Boyd KL, et al. STAT1 подавляет цитокин-продуцирующие врожденные лимфоидные клетки группы 2 и группы 3 во время вирусной инфекции. Дж Иммунол . (2017) 199: 510–19. DOI: 10.4049 / jimmunol.1601984

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

91. Калифано Д., Фуруя Й., Робертс С., Аврам Д., Маккензи А.Н.Дж., Мецгер Д.В. IFN-гамма увеличивает восприимчивость к инфекции гриппа A за счет подавления врожденных лимфоидных клеток группы II. Иммунол слизистой оболочки . (2018) 11: 209–19. DOI: 10,1038 / mi.2017.41

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

92.Ribechini E, Hutchinson JA, Hergovits S, Heuer M, Lucas J, Schleicher U, et al. Новые сигналы GM-CSF через IFN-gammaR / IRF-1 и лицензионные моноциты AKT / mTOR для супрессорной функции. Кровавый Совет . (2017) 1: 947–60. DOI: 10.1182 / bloodadvances.2017006858

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

93. Langereis JD, Pickkers P, de Kleijn S, Gerretsen J, de Jonge MI, Kox M. Полученный из селезенки IFN-гамма индуцирует образование PD-L1 (+) — супрессорных нейтрофилов во время эндотоксемии. Дж Лейкок Биол . (2017) 102: 1401–9. DOI: 10.1189 / jlb.3A0217-051RR

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

94. Салим Т., Сершен К.Л., Мэй Э. Изучение роли активации TNF-альфа и IFN-гамма в динамике экспрессии гена iNOS в LPS-стимулированных макрофагах. PLoS ONE (2016) 11: e0153289. DOI: 10.1371 / journal.pone.0153289

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

95. Zha Z, Bucher F, Nejatfard A, Zheng T, Zhang H, Yea K, et al.Интерферон-гамма является главным регулятором контрольной точки цитокин-индуцированной дифференцировки. Proc Natl Acad Sci USA . (2017) 114: E6867–74. DOI: 10.1073 / pnas.17064

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

97. Фьюри Р., Хамашта М., Меррилл Дж. Т., Верт В. П., Калуниан К., Брохон П. и др. Анифролумаб, моноклональное антитело против рецептора интерферона-альфа, при средней и тяжелой системной красной волчанке. Arthritis Rheumatol. (2017) 69: 376–86.DOI: 10.1002 / art.39962

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

98. de Jong HJI, Kingwell E, Shirani A, Cohen Tervaert JW, Hupperts R, Zhao Y, et al. Оценка безопасности бета-интерферонов при РС: серия вложенных исследований случай-контроль. Неврология (2017) 88: 2310–20. DOI: 10.1212 / WNL.0000000000004037

CrossRef Полный текст | Google Scholar

DER_IFN_BETA_RESPONSE_DN

Стандартное наименование DER_IFN_BETA_RESPONSE_DN
Систематическое название M17607
Краткое описание Гены подавляются в клетках HT1080 (фибросаркома) при обработке интерфероном бета в течение 6 часов.
Полное описание или аннотация Плейотропная активность интерферонов (IFN) опосредуется в первую очередь посредством регуляции транскрипции многих нижестоящих эффекторных генов. Профили мРНК при лечении IFN-альфа, -бета или -gamma линии клеток фибросаркомы человека, HT1080, определяли с использованием массивов олигонуклеотидов с наборами зондов, соответствующими более чем 6800 генам человека. Среди них были транскрипты известных IFN-стимулированных генов (ISG), экспрессия которых согласовывалась с предыдущими исследованиями, в которых конкретный ISG был охарактеризован как чувствительный к IFN типа I (альфа, бета) или типа II (гамма), или оба.Важно отметить, что были идентифицированы многие новые IFN-стимулированные гены, которые имели различные известные биологические функции. Например, было идентифицировано несколько новых ISG, которые участвуют в апоптозе (включая RAP46 / Bag-1, фосфолипидную скрамблазу и индуцируемый гипоксией фактор-1альфа). Кроме того, также были идентифицированы несколько генов, репрессированных IFN. Эти результаты демонстрируют полезность массивов олигонуклеотидов для мониторинга экспрессии генов млекопитающих в широком и беспрецедентном масштабе. В частности, эти результаты дают представление об основных механизмах действия IFN и, в конечном итоге, могут способствовать лучшему терапевтическому использованию IFN.
Коллекция C2: курируемые наборы генов
CGP: химические и генетические нарушения
Исходная публикация Pubmed 9861020 Авторы: Der SD, Zhou A, Williams BR, Silverman RH
Точный источник Таблица 3: IFN beta
Родственные наборы генов (покажите 5 дополнительных наборов генов из исходной публикации)

(показать 6 наборов генов от одних и тех же авторов)
Внешние ссылки
Отфильтровано по сходству
Организм человека разумного
Автор Юджин Хосида (Институт Броуда)
Исходная платформа AFFY_HuGene
Ссылки на наборы данных
Скачать набор генов формат: grp | текст | gmt | gmx | xml
Вычисления перекрываются (показать коллекции для исследования на предмет совпадения с этим набором генов)
Компендиум профилей экспрессии Справочник GTEx
Компендиум тканей человека (Novartis)
Глобальная карта рака (Институт Броуда)
Клеточные линии NCI-60 (Национальный институт рака)
Расширенный запрос Дальнейшее расследование эти 8 генов
Семейства генов Классифицируйте эти 8 генов по семейству генов
Показать участников (показать 11 членов, сопоставленных с 8 генами)

Исходный
Член
NCBI (Entrez)
Идентификатор гена
Ген
Символ
Ген
Описание
M16706
U30894_at 6448 SGSH N-сульфоглюкозамин сульфогидролаза [Источник :…
U61232_at 6905 TBCE тубулиновый складчатый кофактор E [Источник: HGNC Sy …
U62437_at 1141 ЧРНБ2 холинергический рецептор никотиновый бета 2 субъединиц …
U76010_at 7781 SLC30A3 семья носителей растворенного вещества 30 член 3 [Источник :…
U78798_at 7189 TRAF6 Фактор 6, связанный с рецептором ФНО [Источник: H …
U79294_at 8613 PLPP3 фосфолипидфосфатаза 3 [Источник: HGNC Sy …
U82311_at
X03562 3481 IGF2 инсулиноподобный фактор роста 2 [Источник: HGNC…
X78817_at 393 ARHGAP4 Rho GTPase, активирующий белок 4 [Источник: HG …
Z78289_at
История версий

См. Условия лицензии MSigDB здесь.Обратите внимание, что некоторые наборы генов имеют особые условия доступа.

ПОВЫШЕНИЕ ДЕЙСТВИЯ ИНТЕРФЕРОНОВ (IFN) -a ANI IFN-β ЧЕРЕЗ …: Журнал иммунотерапии

Что вы по профессии? Academic MedicineAcute Уход NursingAddiction MedicineAdministrationAdvanced Практика NursingAllergy и ImmunologyAllied здоровьеАльтернативная и комплементарной MedicineAnesthesiologyAnesthesiology NursingAudiology & Ear и HearingBasic ScienceCardiologyCardiothoracic SurgeryCardiovascular NursingCardiovascular SurgeryChild NeurologyChild PsychiatryChiropracticsClinical SciencesColorectal SurgeryCommunity HealthCritical CareCritical Уход NursingDentistryDermatologyEmergency MedicineEmergency NursingEndocrinologyEndoncrinologyForensic MedicineGastroenterologyGeneral SurgeryGeneticsGeriatricsGynecologic OncologyHand SurgeryHead & Neck SurgeryHematology / OncologyHospice & Паллиативная CareHospital MedicineInfectious DiseaseInfusion Сестринское делоВнутренняя / Общая медицинаВнутренняя / лечебная ординатураБиблиотечное обслуживание Материнское обслуживание ребенкаМедицинская онкологияМедицинские исследованияНеонатальный / перинатальный неонатальный / перинатальный уходНефрологияНеврологияНейрохирургияМедицинское обслуживание ecialtiesNursing-educationNutrition & DieteticsObstetrics & GynecologyObstetrics & Gynecology NursingOccupational & Environmental MedicineOncology NursingOncology SurgeryOphthalmology / OptometryOral и челюстно SurgeryOrthopedic NursingOrthopedics / Позвоночник / Спорт Медицина SurgeryOtolaryngologyPain MedicinePathologyPediatric SurgeryPediatricsPharmacologyPharmacyPhysical Медицина и RehabilitationPhysical Терапия и женщин Здоровье Физическое TherapyPlastic SurgeryPodiatary-generalPodiatry-generalPrimary Уход / Семейная медицина / Общие PracticePsychiatric Сестринское делоПсихиатрияПсихологияОбщественное здравоохранениеПульмонологияРадиационная онкология / ТерапияРадиологияРевматологияНавыки и процедурыСонотерапияСпорт и упражнения / Тренировки / ФитнесСпортивная медицинаХирургический уходПереходный уходТрансплантационная хирургияТерапия травмТравматическая хирургияУрологияЖенское здоровьеУход за ранамиДругое

Что ваша специальность? Addiction MedicineAllergy & Clinical ImmunologyAnesthesiologyAudiology & Speech-Language PathologyCardiologyCardiothoracic SurgeryCritical Уход MedicineDentistry, Oral Surgery & MedicineDermatologyDermatologic SurgeryEmergency MedicineEndocrinology & MetabolismFamily или General PracticeGastroenterology & HepatologyGenetic MedicineGeriatrics & GerontologyHematologyHospitalistImmunologyInfectious DiseasesInternal MedicineLegal / Forensic MedicineNephrologyNeurologyNeurosurgeryNursingNutrition & DieteticsObstetrics & GynecologyOncologyOphthalmologyOrthopedicsOtorhinolaryngologyPain ManagementPathologyPediatricsPlastic / Восстановительная SugeryPharmacology & PharmacyPhysiologyPsychiatryPsychologyPublic, Окружающая среда и гигиена трудаРадиология, ядерная медицина и медицинская визуализацияФизическая медицина и реабилитация Респираторная / легочная медицинаРевматологияСпортивная медицина / наукаХирургия (общая) Травматологическая хирургияТоксикологияТрансплантационная хирургияУрологияСосудистая хирургияВироло у меня нет медицинской специальности

Каковы ваши условия работы? Больница на 250 коекБольница на более 250 коекУправление престарелыми или хоспис Психиатрическое или реабилитационное учреждениеЧастная практикаГрупповая практикаКорпорация (фармацевтика, биотехнология, инженерия и т. Д.) Докторантура Университета или медицинского факультета Магистратура или 4-летнего академического университета Общественный колледж Правительство Другое

Клонирование, экспрессия и противовирусная активность альфа-интерферонов норки

Промышленность пушного звероводства расширяется в северо-восточной и западной частях Китая. Однако здоровье пушных зверей было поставлено под угрозу из-за вирусных инфекций, таких как вирус CDV, парвовирус и вирус алеутской норки.IFN был сначала признан на основе его противовирусной активности, и только позже было показано, что он действует в первую очередь как иммуномодулятор. IFN-α был идентифицирован у разных видов, но биологическая активность MiIFN-α до сих пор не проверялась. Чтобы определить, проявляет ли MiIFNα также противовирусную активность, аналогичную IFN других видов, мы исследовали способность рекомбинантных MiIFN-α ингибировать репликацию VSV.

С помощью ОТ-ПЦР мы успешно амплифицировали предсказанную 564 п.н. кДНК норкового IFN-α.Гомология 13 подтипов MiIFN-α составляла 93,6–99,3% и 88,8–98,3% на уровне нуклеотидной и аминокислотной последовательности соответственно. Удивительно, что все подтипы имеют одинаковый размер, тогда как у других видов были зарегистрированы различия в размерах. У 14 IFN-α свиней множественное выравнивание последовательностей выявило C-концевую делецию 8 остатков в шести подтипах IFN-α (IFN-α1, α2, α3, α7, α10 и α11) [17]. Противовирусная активность интактных свиных генов IFN-α примерно в 2-50 раз выше, чем у подтипов с С-концевой делецией в клетках WISH, и в 15-55 раз выше в клетках PK15.Кроме того, размер подтипов IFN-α кошек различен; кошачий IFN-α5 имеет пять дополнительных аминокислот, вставленных в положение 139, которые отсутствуют в других четырех подтипах [18]. Сообщалось о более чем 10 различных подтипах IFN-α у мышей и о существовании 16 или более подтипов у людей. У мышей размер подтипов IFN-α варьируется. Однако размер подтипов человеческого IFN является постоянным. У мышей, которым инъецировали плазмиды, кодирующие мышиный (Mu) IFN-α1, muIFN-α4 или muIFN-α9, и впоследствии зараженных мышиным цитомегаловирусом (MCMV), muIFN-α1 оказывал наибольшее противовирусное действие.В другом исследовании восемь различных подтипов IFN-α, происходящих из клеток человека, были протестированы на их противовирусную активность. Человеческий (Hu) IFN-α8 оказался наиболее эффективным, тогда как HuIFN-α1 проявил наименьшую противовирусную активность. В текущем исследовании мы сравнили противовирусные эффекты подтипов MiIFN-α. Нет никаких доказательств того, что сила противовирусной активности связана с размером подтипа IFN-α. Филогенетический анализ (рис. 2) также показал, что IFN-α был подразделен на две монофилетические линии: куриные (птичьи) и млекопитающие.Ветвь млекопитающих можно разделить на плотоядных и травоядных. Сходство IFN-α норки, домашнего хорька, евразийского барсука, гигантской панды, собак, лисиц и кошек согласуется с их объединением в монофилетическую группу хищников (которая отличается от IFN-α других травоядных). Действительно, как конверсия генов, так и дупликация генов сформировали эволюцию семейства генов IFN-α у эвтерианских видов [19]. Функции последовательностей подтипа MiIFN-α обеспечивают дополнительную поддержку этого представления.

IFN обладает широким спектром противовирусных эффектов и представляет собой идеальный выбор для разработки противовирусных препаратов.IFN был первым цитокином, одобренным Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США для клинического применения. Среди членов семейства IFN IFN-α имеет относительно более высокую противовирусную активность. IFN-α был идентифицирован у разных видов, включая птиц, грызунов и приматов [20]. IFN-α — это мультигенное семейство, каждый член которого расположен на одной хромосоме в определенном регионе [19]. Одной из уникальных характеристик гена IFN-α является то, что он имеет только одну открытую рамку считывания (ORF) без каких-либо интронов.Например, у собаки 8 генов IFN-α, у кошки 5 генов IFN-α, у гигантской панды 12 генов IFN-α, а у сурка 10 генов IFN-α. Для каждого подтипа гена IFN-α одного и того же вида последовательность продукта ПЦР одинакова при использовании геномной ДНК или кДНК в качестве матрицы. В этом исследовании мы клонировали 13 генов MiIFN-α, включая шесть функциональных генов и два псевдогена. Анализы in vitro показали, что только продукт функционального гена IFN обладал противовирусной активностью. Причина генетического разнообразия IFN-α в процессе эволюции до сих пор неясна, но разные подтипы обладают разными биологическими активностями [18].Тан и др. . клонировали 12 генов IFN-α из гигантской панды и обнаружили, что IFN-α8, IFN-α4 и IFN-α10 имели более высокую активность, тогда как IFN-α11 имел низкую биологическую активность в клетках 293 (эпителиальные клетки почек человека, трансфицированные геном аденовируса E1A) [17]. Кроме того, IFN-α3, IFN-α4 и IFN-α8 продемонстрировали более высокую активность в клетках B6, тогда как IFN-α3, IFN-α7 и IFN-α10 показали более высокую активность в клетках K562 [18]. Тайра и др. . клонировали 5 генов IFN-α собак и обнаружили, что rCaIFN-α8 демонстрирует высокую активность против VSV.Кроме того, активность rCaIFN-α8 против собачьего аденовируса (CAV) -1 в клетках почек собак Madin-Darby (MDCK) была в 33–666 раз выше, чем активность против VSV, но rCaIFN-α8 не влиял на CHV. -1 [21]. Взятые вместе, эти данные позволяют предположить, что IFN-α имеет множество подтипов, большинство из которых обладают противовирусной активностью в разных типах клеток. Хотя семейство IFN-α имеет много псевдогенов, которые можно транскрибировать в мРНК, эти псевдогены не обладают противовирусной функцией. Возможные роли псевдогенов IFN-α еще предстоит определить.

Эффективная индукция экспрессии IFN играет важную роль в иммунном ответе на вирусную инфекцию. IFN-α представляет собой мультигенное семейство, состоящее из разных подтипов с высокой гомологией и аналогичной функцией. Однако недавние исследования показали, что существуют функциональные различия между подтипами, вероятно, из-за различных аминокислотных последовательностей. Действительно, наши 13 клонированных MiIFN-α продемонстрировали разнообразие составляющих аминокислот в каждом подтипе. MiIFN-α4–13 имел два сайта N-гликозилирования, тогда как MiIFN-α1–3 имел только один сайт N-гликозилирования.IFN-α1–3, IFN-α5, IFN-α7, IFN-α10, IFN-α11 и IFN-α13 содержали 9 остатков цистеина, тогда как IFN-α4, IFN-α6, IFN-α8, IFN-α9 и IFN -α12 содержал всего 8 остатков цистеина. Анализ противовирусной активности показал, что только IFN-α1, IFN-α2, IFN-α3, IFN-α8, IFN-α9 и IFN-α12 обладают противовирусной функцией. Было бы интересно исследовать, важны ли сайты N-гликозилирования для противовирусной активности IFN-α.

Интерферон-индуцированные гены расширенного семейства IFIT демонстрируют консервативную противовирусную активность у видов, не относящихся к млекопитающим

Abstract

Интерферон-индуцированные белки с тетратрикопептидными повторами (IFIT) участвуют в защитном ответе на вирусную инфекцию, хотя точный механизм IFIT для снижения вирусной пролиферации в настоящее время неизвестен.Взаимодействие с фактором инициации трансляции eIF-3 или вирусными белками и секвестрация вирусной РНК были предложены в качестве потенциальных противовирусных функций для этих белков. У людей были охарактеризованы четыре члена этого семейства. Тем не менее, информации об этих белках у рыб практически нет. Используя сохранение синтении между геномами человека и рыбок данио, мы идентифицировали десять членов семейства IFIT, расположенных на четырех разных хромосомах. Индукцию этих генов исследовали как in vitro, , так и in vivo после введения интерферона (IFN) и заражения рабдовирусом.В то время как индукция генов IFIT наблюдалась после лечения интерфероном (IFNΦ1, IFNΦ2 и IFNΦ3), вирусная инфекция не влияла на эти IFN-индуцированные гены in vitro и даже снижала индуцированную IFN экспрессию этих генов. Ответ в значительной степени отличался от in vivo от с широкой активацией генов IFIT после вирусного заражения. Кроме того, три выбранных IFIT были клонированы в векторе экспрессии и микроинъектированы личинкам рыбок данио для изучения защитного действия IFIT при вирусной инфекции.Наблюдалось снижение уровня смертности, подтверждающее сохранение противовирусной функции у видов, не относящихся к млекопитающим.

Образец цитирования: Варела М., Диас-Росалес П., Перейро П., Форн-Куни Г., Коста М.М., Диос С. и др. (2014) Интерферон-индуцированные гены расширенного семейства IFIT демонстрируют консервативную противовирусную активность у видов, не относящихся к млекопитающим. PLoS ONE 9 (6): e100015. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0100015

Редактор: Фолькер Тиль, Бернский университет, Швейцария

Поступила: 14 января 2014 г .; Дата принятия: 21 мая 2014 г .; Опубликован: 20 июня 2014 г.

Авторские права: © 2014 Varela et al.Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Финансирование: Это исследование финансировалось в рамках проектов CSD2007-00002 «Аквагеномика» и AGL2011-28921, предоставленных Испанским Министерством труда и инноваций. Лаборатория авторов также финансируется ITN 289209 «FISHFORPHARMA» (ЕС) и проектом 201230E057 Агентства высшего образования (CSIC).П. Диас-Росалес получил контракт JAE-Doc от CSIC, Испания, а П. Перейро и М. Варела получили докторские гранты от Министерства образования (стипендия FPU AP2010-2408) и программы JAE (финансируемой через CSIC и Европейские социальные фонды) соответственно. Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Введение

Противовирусные врожденные иммунные ответы хозяина начинаются с обнаружения вирусов, которые запускают индукцию клеточных и молекулярных эффекторов с широкой противовирусной активностью [1], включая интерферон типа I (IFN) и сотни IFN-стимулированных генов (ISG) , которые вносят свой вклад в общие эффекты против данного вируса [2], [3].

У рыб, хотя было охарактеризовано множество генов IFN (обзор приведен в [4]), их классификация противоречива, поскольку эти гены более разнообразны, чем считалось ранее, а их геномные структуры, содержащие интроны, напоминают интерфероны III типа млекопитающих ( IFN-λ), хотя кодируемые белки аналогичны интерферонам I типа [5].IFN типа I рыб, названные интерфероном-фи (IFNΦ), были разделены на две группы: группу I (включающую IFNΦ1 и IFNΦ4) и группу II (состоящую из IFNΦ2 и IFNΦ3) [6], [7]. Эти две группы IFN не связываются с одними и теми же рецепторными комплексами у рыбок данио, как было показано Aggad et al. [8].

Знание о противовирусных свойствах отдельных ISG в основном ограничено несколькими интенсивно изученными примерами, такими как PKR [9] или MX [10], [11]. MX — хорошо изученный ISG для рыб, но наши знания о других ISG (например.g., Vig-1 / viperin, ISG15, finTRIMs и PKR) у рыб ограничены (см. обзор [12]). Даже у млекопитающих, хотя важность системы IFN очевидна, недостаточно информации о механизме, лежащем в основе IFN-опосредованного ингибирования репликации вирусов, особенно in vivo [13].

Среди ISG семейство белков, называемых IFIT (интерферон-индуцированные белки с тетратрикопептидными повторами), которое характеризуется тетратрикопептидными повторами (TPR-доменами), было исследовано на высших позвоночных [14] — [16].Недавние исследования показали, что семейство IFIT сохраняется у млекопитающих, амфибий и птиц, но эти белки не присутствуют в дрожжах, растениях или низших животных, таких как плодовая муха и нематоды [16]. Члены этого семейства белков изначально были названы в соответствии с их молекулярными массами (ISG54 / P54, ISG56 / P56, ISG58 / P58 и ISG60 / P60), хотя в настоящее время в наиболее актуальных и последних публикациях используется термин IFIT [16]. Белки IFIT участвуют во многих процессах в ответ на вирусную инфекцию и другие функции, такие как взаимодействия белок-белок и белок-РНК, передача сигналов двухцепочечной РНК, миграция клеток и пролиферация [14], [17].Индукция транскрипции генов семейства IFIT была описана после инфицирования как ДНК-, так и РНК-вирусами [18] — [21] и после бактериальной стимуляции IFN-зависимым образом I типа [22] — [24]. Хотя их противовирусные механизмы все еще плохо изучены, исследования показали, что гены IFIT ограничивают репликацию вируса за счет изменения и подавления синтеза белка или прямого связывания и секвестрации вирусной РНК, тем самым снижая их инфекционность [16].

У рыб практически отсутствует информация о генах IFIT.Только несколько частичных или неподтвержденных последовательностей генов IFIT были идентифицированы с помощью анализа секвенирования [16], [25]. Формальная характеристика генов IFIT и глубокое изучение их регуляции при различных стимулах никогда не проводились у рыб.

Рыба-костистые представляют собой интересную модель для изучения IFIT не только из-за явного интереса к этому семейству ISG в связи с вирусной инфекцией, которая представляет собой серьезную угрозу, особенно для выращиваемых рыб, но также из-за древнего отделения рыбы от четвероногие и большое разнообразие видов рыб.Кроме того, преимущество более широкого использования рыбок данио ( Danio rerio ) в качестве важной модели позвоночных для исследований в области развития и биомедицинских исследований, гематопоэза и, в последнее время, иммунологии, облегчило разработку геномных инструментов, которые позволяют идентифицировать новый ген. семьи. В настоящей работе мы описываем полный репертуар генов IFIT у рыбок данио. Согласно недавно опубликованным результатам [25], наше исследование показывает семейство белков, образовавшееся в результате древних событий дупликации.Для дальнейшего изучения противовирусных свойств этих IFN-стимулированных генов были проведены эксперименты in vivo, и in vitro, на рыбках данио после обработки различными рекомбинантными IFNΦ и после вирусной инфекции. Более того, защитный эффект трех выбранных IFIT рыбок данио при вирусном заражении также исследовали in vivo .

Результаты

Определение полного репертуара генов IFIT у рыбок данио

Используя бласт-поиск по всему геному рыбок данио, мы обнаружили высокую степень синтении между хромосомой 10 человека (область q23.31) и хромосомы 17 и 12 рыбок данио (рис. 1А). Наш анализ подтвердил наличие пяти и трех генов IFIT на хромосомах 12 и 17 рыбок данио соответственно. Более того, еще два гена были идентифицированы как аналогичные IFIT (один ген на хромосоме 5, а другой ген на хромосоме 13).

Рисунок 1. Синтения и филогенетический анализ.

A. Сравнительное расположение генов последовательностей IFIT между хромосомой 10 человека и хромосомами 5, 12, 13 и 17 рыбок данио. Гены, фланкирующие кластер IFIT, расположены в q23.31 область хромосомы 10 человека продемонстрировала высокую степень синтении с хромосомами 17 и 12 рыбок данио. Более того, гены, окружающие IFIT 13 рыбок данио, были расположены на той же хромосоме человека, но в области q22.2. Последовательность IFIT также присутствовала на хромосоме 5 рыбок данио. B. Филогенетическая взаимосвязь между белками IFIT костистых рыб и аналогичными белками, описанными у других позвоночных, таких как земноводные, птицы и млекопитающие. Lch: Latimeria chalumnae ; Ом: Oncorhynchus mykiss ; Sas: Salmo salar ; Ca: Carassius auratus ; Ci: Ctenopharyngodon idella ; Lc: Larimichthys crocea ; Dl: Dicentrarchus labrax ; Tn: Tetraodon nigroviridis .

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0100015.g001

Последовательности IFIT рыбок данио были названы в соответствии с их хромосомным положением: IFIT5A (ENSDARG00000088069), IFIT12A (ENSDARG00000008098), IFIT12B (ENSDARG00000012740000) , IFIT12D (не указан в базе данных Ensembl), IFIT12E (ENSDARG000000), IFIT13A (ENSDARG00000057173), IFIT17A (ENSDARG00000071012), IFIT17B (ENSDARG00000043584) и IFIT17C (ENSDARG00). Чтобы подтвердить последовательности IFIT, мы разработали специфические праймеры для амплификации и секвенирования 10 генов IFIT рыбок данио (праймеры в таблице S1).Подтвержденные полноразмерные ORF были отправлены в GenBank под номерами доступа KF418356 – KF418365.

Блок генов IFIT человека и псевдогена IFIT1B (IFIT-1, 1B, 2, 3 и 5) фланкирован ниже по течению генами SLC16A12 (семейство 16 растворенных носителей, член 12) и PANK1 (пантотенаткиназа 1). Эти гены также присутствуют в хромосомах 17 и 12 рыбок данио, но расположены выше области IFIT (рис. 1A). Гены FAS (надсемейство рецепторов TNF, член 6) и Ch35H (холестерин-25-гидроксилаза) расположены выше кластера IFIT человека и обнаруживают суб-разделение у рыбок данио.Таким образом, FAS расположен на хромосоме 17, а Ch35H расположен на хромосоме 12, и оба гена имеют инвертированную ориентацию в 3′-области генов IFIT (рис. 1A). Область q22.2 хромосомы 10 человека также обнаружила гомологию с хромосомой 13 рыбок данио. Один связанный с IFIT ген (IFIT13A) был идентифицирован между геном COMTD1 (домен катехол-O-метилтрансферазы, содержащий 1) на 5′-конце и геном NEFH ( нейрофиламента, тяжелого полипептида) и VDAC2 (потенциал-зависимый анионный канал 2) на 3′-конце этой хромосомы.В этом случае синтения не сохранялась, потому что между генами VDAC2 и COMTD1 в хромосоме 10 человека не было генов IFIT (рис. 1А). Более того, другой ген IFIT был идентифицирован на хромосоме 5, но было невозможно идентифицировать консервативную область между обоими видами (рис. 1A).

Филогенетическое дерево и анализ дарвиновской селекции

Анализ данных для последовательностей белков IFIT позволил получить 77 различных последовательностей, 60 из которых принадлежали видам млекопитающих, 2 видам птиц, 6 видам амфибий и 9 видам рыб (Таблица S2).Мы использовали эти последовательности для построения филогенетического дерева, выявив четкое разделение последовательностей IFIT среди проанализированных таксономических классов (рис. 1B). Топология дерева делит последовательности IFIT млекопитающих на четыре основные ветви, группы гомологии IFIT1 / 1B, IFIT2, IFIT3 и IFIT5, с большими значениями достоверности; однако филогенетическая взаимосвязь между последовательностями IFIT, не относящимися к млекопитающим, не была ясной, что потенциально отражает незначительное представление этих последовательностей во всем анализе.Например, эволюционное родство различных генов IFIT у разных видов рыб не было достоверно установлено, хотя некоторые последовательности были ортологичными. Однако возник интересный паттерн, разветвляющий последовательности IFIT рыбок данио, принадлежащие одной и той же хромосоме.

Мы оценили отношения dN / dS (ω) среди последовательностей IFIT рыбок данио для количественной оценки давления отбора, действующего на гены IFIT, и определили, что гены, расположенные на хромосоме 17, прошли положительный дарвиновский отбор (ω> 1).Отношение dN / dS, наблюдаемое между IFIT17A и IFIT17B, составляло 1,2928, тогда как это значение было выше между IFIT 17B и 17C (ω = 1,4667) и между IFIT 17A и 17C (ω = 1,5130). Гены IFIT, расположенные на хромосомах 5, 12 и 13, не подвергались этому эволюционному механизму, получая значения ω ниже 1.

Анализ секвенирования и домены структуры

Изучение доменной структуры выявило присутствие характерных мотивов TPR во всех проанализированных последовательностях (рис. 2А), но количество этих повторов варьировало от двух до одиннадцати повторов.Однако мы также наблюдали вариабельность количества и положения этих характерных доменов в четырех генах человека и трех IFIT, описанных у мышей (рис. 2А). Значения идентичности и сходства между рыбками данио и человеческими и мышиными белками были ниже 37% и 62% соответственно (Таблица S3). Количество аминокислот варьировало от 302 до 483 остатков для всех последовательностей, за исключением изоформы 5A, которая содержала всего 1038 аминокислот. Таким образом, также наблюдались различия в рассчитанных молекулярных массах, тогда как большинство белков имели молекулярные массы в диапазоне от 50 до 56 кДа, изоформа 12D составляла 34.92 кДа, а IFIT5A — 120,29 кДа (фигура 2В). Что касается теоретической изоэлектрической точки (pI), изоформы, расположенные на хромосомах 5, 12 и 17, имели значения ниже 7,0, за исключением 12A, значение pI которого составляло 8,20. IFIT13A также показал более базовое значение pI 8,75 (рис. 2B).

Рисунок 2. Анализ последовательности и структурный домен IFIT рыбок данио.

A. Мотивы тетратрикопептидных повторов (TPR) на 10 белках IFIT, присутствующих у рыбок данио. Ортологические белки человека и мыши показаны для сравнения.B. Длина, расчетная молекулярная масса (кДа) и теоретическая pI различных IFIT рыбок данио. C. 3D-структура IFIT рыбок данио, спрогнозированная с помощью сервера I-TASSER, выбор модели с лучшим показателем C и просмотр с использованием PyMOL.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0100015.g002

Мы также изучили трехмерную структуру IFIT и определили три различные структурные модели (рисунок 2C). TM-баллы, наблюдаемые для IFIT рыбок данио, показали, что человеческий IFIT5 был основным белком-аналогом для IFIT5A (TM-балл = 0.448), IFIT12A (TM-оценка = 0,981), IFIT12B (TM-оценка = 0,966), IFIT 12C (TM-оценка = 0,951), IFIT12D (TM-оценка = 0,950), IFIT12E (TM-оценка = 0,969) и IFIT13A. (TM-оценка = 0,952). Однако человеческий ISG54 или IFIT2 был лучшим аналогом для IFIT17A (TM-оценка = 0,947) и IFIT17B (TM-оценка = 0,943), и, что интересно, супспиральный домен TPR-повторов O-связанной трансферазы GlcNAc был матрицей для конструирования. 3D-структуры IFIT 17C (TM-оценка = 0,813).

Конститутивная и тканеспецифическая экспрессия генов IFIT

Анализ 8 различных тканей взрослых рыбок данио выявил более высокую базальную экспрессию генов IFIT на хромосоме 12, при этом ген IFIT12C имеет наибольшее присутствие во всех проанализированных тканях (селезенка, почки, жабры, хвостовой плавник и голова).Интересно, что IFIT с низкой экспрессией в большинстве тканей показали значительно более высокую экспрессию в кишечнике (12A, 17A, 17B) или мышцах (13A, 17C) (рис. 3A). Что касается относительной доли генов IFIT в анализируемых тканях, тогда как в селезенке, почках, мышцах, кишечнике и печени все IFIT присутствовали, в жабрах преобладали IFIT из хромосомы 12 (рис. 3B).

Рисунок 3. Тканевая экспрессия генов IFIT рыбок данио.

A. Конститутивная экспрессия генов IFIT в тканях взрослых рыбок данио (S: селезенка; L: печень; K: почки; G: жабры; CF: хвостовой плавник; H: голова; M: мышцы; I: кишечник).Для определения базальной экспрессии каждой формы IFIT отбирали образцы тканей и объединяли, получая в общей сложности 4 пула по 5 рыб на орган. Относительный уровень экспрессии каждого гена, нормализованный к уровню экспрессии гена 18 S рибосомной РНК в той же ткани, выражали в произвольных единицах. Графики представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка для 4 независимых выборок. Б. Относительная доля транскриптов IFIT в различных тканях рыбок данио.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0100015.g003

Конститутивная экспрессия генов IFIT была также проанализирована в ZF4 и первичных клетках почек (фигура S1). Клетки ZF4 показали более высокие уровни экспрессии, чем культуры первичных клеток почек. Кроме того, IFIT из хромосомы 12 рыбок данио показали более высокую базальную экспрессию в обоих типах клеток, чем таковые из хромосом 5, 13 или 17, за исключением изоформы 12B, которая показала более низкую экспрессию в клетках ZF4.

Интерфероны индуцируют экспрессию генов IFIT.

В ? vitro

Во-первых, мы определили, индуцируют ли три выбранных интерферона рыбок данио (IFNΦ1, IFNΦ2 и IFNΦ3) экспрессию IFIT рыбок данио.Поэтому мы проанализировали биологическую активность рекомбинантных IFNs Φ рыбок данио. Активность супернатанта клеток HEK-293, трансфицированных плазмидами, содержащими последовательности IFNs, была впервые подтверждена снижением вирусного титра весенней вирусемии карпа (SVCV) и индукцией экспрессии MXab (изоформы a и b) в ZF4 и почках. первичная клеточная культура, как показано на рисунках S2A и S2B.

Обработка клеток ZF4 и культур клеток почек интерферонами вызвала изменения в экспрессии генов IFIT.В целом результаты показали более высокие значения экспрессии для всех генов IFIT в клетках почек, чем в клетках ZF4 (рис. 4A и 4B). Как и ожидалось, эти результаты предполагают роль IFN в индукции IFIT у рыбок данио. Более того, тот факт, что базальная экспрессия IFIT была выше в ZF4, чем в первичных культурах клеток, и что эти клетки показали более высокий ответ на IFN, предполагает клеточно-специфический ответ или механизм.

Фигура 4. In vitro влияние IFN на экспрессию IFIT в клетках ZF4 и первичных культурах клеток почек.

A. Уровни экспрессии генов IFIT в клетках ZF4 после 4 и 24 часов стимуляции супернатантами от трансфицированных клеток HEK-293 плазмидами, содержащими последовательности для zf-IFNΦ1, zf-IFNΦ2 и zf-IFNΦ3. B. Первичные культуры клеток почек после 4 и 24 часов стимуляции супернатантами от трансфицированных клеток HEK-293 плазмидами, содержащими последовательности для zf-IFNΦ1, zf-IFNΦ2 и zf-IFNΦ3. После 4 и 24 часов стимуляции РНК экстрагировали и синтезировали кДНК. Анализ экспрессии гена проводили с помощью ПЦР в реальном времени с использованием 18 S рибосомной РНК в качестве гена домашнего хозяйства.Уровень экспрессии каждого гена выражали как кратное изменение по отношению к пустой плазмидной группе. Данные представлены в виде среднего значения ± стандартная ошибка трех независимых выборок. Значимые различия между клетками, трансфицированными плазмидами IFNΦ и пустой плазмидой, отображались как *** (0,0001

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0100015.g004

В клетках ZF4 обработка IFN через 4 часа не вызвала высоких уровней экспрессии IFIT, за исключением IFIT17C, который был значительно индуцирован, несмотря на используемого IFNΦ.Интересно, что значительное подавление изоформ 5A, 12A, 12C, 12D и 13A наблюдалось в клетках, обработанных IFNΦ3 (фиг. 4A). Большее количество изоформ было значительно индуцировано через 24 часа по сравнению с результатами, наблюдаемыми через 4 часа, и IFIT на хромосоме 5 был наиболее индуцирован через IFNΦ2 и IFNΦ3. IFIT на хромосоме 12 (12B, 12C и 12E) были значительно индуцированы, независимо от используемого IFNΦ (рис. 4A).

В первичной культуре клеток гены IFIT, расположенные на хромосомах 13 и 17, были более индуцированы, чем гены на хромосомах 5 и 12, а изоформа 13A показала самую сильную индукцию через 4 часа (рис. 4B).Что касается эффекта различных IFNΦ, большинство IFIT на хромосомах 12 и 13 были индуцированы через IFNΦ2 и IFNΦ3 через 4 часа (рис. 4B). Таким образом, в первичной культуре клеток только IFIT12B, IFIT12C, IFIT13A, IFIT17A и IFIT17C значительно индуцировались через IFNΦ1 через 4 часа, тогда как через 24 часа значительная индукция 12B, 12C, 12E, 13A, 17A, 17B и 17C была значительной. наблюдаемый.

Модуляция экспрессии IFIT при вирусном заражении

После того, как мы определили, что IFIT рыбок данио модулируются интерферонами и демонстрируют разные профили тканевой экспрессии, мы оценили влияние вирусной инфекции in vitro на экспрессию IFIT в ZF4 и первичных клетках почек.Удивительно, но SVCV не изменил экспрессию различных IFIT (за исключением IFIT5A в ZF4 и IFIT12B в клетках почек, которые показали небольшое увеличение экспрессии) (фиг. 5A). Чтобы определить, был ли этот эффект вызван прямым воздействием вируса на экспрессию IFIT или же вирус влиял на каскад передачи сигналов интерферона, мы измерили уровни экспрессии IFNΦ1, 2 и 3 и интерферон-индуцированного белка MXab после in vitro. инфекция. Результаты показали, что IFNΦ1, 2 и 3 и MXab не индуцировались ни в ZF4, ни в клетках почек в течение 24 часов инфекции in vitro (фигура 5B).

Рисунок 5. In vitro влияние вирусной инфекции на клетки ZF4 и первичные культуры клеток почек.

A. Экспрессия генов IFIT в клетках ZF4 и первичной культуре клеток почек через 24 часа после инфицирования SVCV. B. Экспрессия MXab и IFN Φ 1, 2 и 3 в клетках ZF4 и первичной культуре клеток почек через 24 часа после инфицирования SVCV. После 24 часов стимуляции РНК экстрагировали и синтезировали кДНК. Анализ экспрессии генов проводили с помощью ПЦР в реальном времени с использованием 18 S рибосомной РНК в качестве гена домашнего хозяйства.Уровень экспрессии каждого гена выражали как кратное изменение по сравнению с контрольной группой, не инфицированными клетками. Данные представлены как среднее значение ± ошибка трех независимых биологических образцов. Значимые различия между инфицированной и неинфицированной группами отображались как *** (0,0001

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0100015.g005

Затем мы определили, модулируется ли вызванная IFNΦ экспрессия генов IFIT посредством вирусной инфекции.Таким образом, влияние вируса на первичные клетки почек, обработанные рекомбинантным IFNs Ф, анализировали через 24 часа после инфицирования (фиг. 6). В целом вирус снижал экспрессию интерферон-индуцированных IFIT. Однако экспрессия, индуцированная рекомбинантным IFNΦ1, не показывала этого явного снижения, а в случае изоформ 12A наблюдалось увеличение экспрессии после вирусной инфекции. Кроме того, изоформа 12A была единственным геном, у которого произошла повышающая модуляция после стимуляции тремя рекомбинантными IFN Ф и инфицирования вирусом (фиг. 6).

Рисунок 6. In vitro влияние вирусной инфекции и лечения IFN в первичных культурах клеток почек.

Уровень экспрессии генов IFIT в культурах первичных клеток почек после 24 часов стимуляции супернатантами от трансфицированных клеток HEK-293 плазмидами, содержащими последовательности для zf-IFNΦ1, zf-IFNΦ2 и zf-IFNΦ3 в комбинации с SVCV. После 24 часов стимуляции РНК экстрагировали и синтезировали кДНК. Анализ экспрессии генов проводили с помощью ПЦР в реальном времени с использованием 18 S рибосомной РНК в качестве гена домашнего хозяйства.Влияние вирусной инфекции на экспрессию IFIT, индуцированную различными IFN, было представлено как кратное изменение по отношению к группе, стимулированной супернатантом от клеток, трансфицированных пустой плазмидой. Данные представлены в виде среднего значения ± стандартная ошибка трех независимых выборок. Звездочки обозначают существенные различия между инфицированными и незараженными группами. Значимые различия отображались как *** (0,0001

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0100015.g006

Чтобы определить, имеет ли место тенденция понижающей модуляции IFN-индуцированных генов через инфекцию SVCV in vivo , мы исследовали экспрессию генов IFIT в почках. клетки взрослых животных, которым вводили вирус. В этом случае все IFIT показали увеличение экспрессии через 24 часа (повышенная экспрессия 5A и 17B не была статистически значимой), а 17A продемонстрировал наибольшее кратное изменение (фигура 7A).Как и ожидалось, наблюдалась повышающая регуляция всех проанализированных IFNΦ, причем экспрессия IFNΦ2 была наивысшей из обнаруженных. Интерферон-индуцируемый белок MXab показал статистически значимое увеличение в 40 раз после стимуляции SVCV (фигура 7B). Эти результаты обозначают различный ответ на вирус после инфицирования in? Vitro или in? Vivo .

Фигура 7. In vivo влияние вирусной инфекции на экспрессию IFN, MXab и генов IFIT в почках.

A. Экспрессия генов IFIT в клетках почек взрослых рыбок данио через 24 часа после заражения SVCV. B. Экспрессия IFN и MXab в клетках почек взрослых рыбок данио через 24 часа после заражения SVCV. Взрослым людям внутрибрюшинно вводили 10 мкл SVCV (2,7 × 10 6 TCID 50 / мл). РНК выделяли из клеток головной почки через 24 часа после инфицирования. Была получена кДНК, и была проведена ПЦР в реальном времени с использованием 18 S рибосомной РНК в качестве гена домашнего хозяйства.Уровень экспрессии каждого гена выражали как кратное изменение по отношению к уровням, обнаруженным в контрольной группе (инъецированной культуральной средой). Данные представлены как среднее значение ± стандартная ошибка трех человек. Звездочки обозначают статистически значимые различия по сравнению с контрольной группой. Значимые различия отображались как *** (0,0001

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0100015.g007

Оценка противовирусной активности генов IFIT у личинок рыбок данио

Затем мы проанализировали противовирусную активность in vivo выбранных IFIT у личинок рыбок данио, предварительно микроинъектированных векторами экспрессии, содержащими IFIT12B, 13A или 17A, с последующим заражением SVCV. Когда личинки рыбок данио были инфицированы SVCV (контрольная группа), смертность достигла максимального уровня через 36 часов после заражения, и только 10% животных пережили инфекцию (фиг. 8A).На этом этапе процент выживаемости у животных, обработанных векторами экспрессии, содержащими последовательности IFIT, был выше, чем у животных контрольной группы. Животные, обработанные 12В, 13А и 17А, показали конечный% выживаемости 17,5, 22,5 и 40% соответственно. Через 36 ч после инфицирования значимые различия в выживаемости наблюдались у животных, обработанных тремя IFIT, тогда как через 48 и 72 часа только личинки, обработанные IFIT17A, показали значительное увеличение выживаемости по сравнению с контрольной группой.

Рисунок 8. Противовирусная активность IFIT 12B, 13A и 17A у личинок, инфицированных SVCV.

A. Противовирусную активность выбранных IFIT оценивали на личинках рыбок данио. Эмбрионы рыбок данио на одноклеточной стадии микроинъектировали 100 пг / яйцо (конечный объем 2 нл) рекомбинантных плазмид pcDNA 3.1-IFIT12B, pcDNA 3.1-IFIT13A, pcDNA 3.1-IFIT17A, а также пустой pcDNA 3.1. Через три дня после введения плазмиды личинкам микроинъектировали в проток Кювье 2 нл суспензии SVCV с конечной концентрацией 10 3 TCID 50 / мл.Данные представлены как процент выживаемости, наблюдаемый через 3 дня после заражения. Значимые различия ( P ≤0,05) в проценте выживаемости между личинками, получавшими IFIT, и контрольной группой отмечены звездочками. Результаты представлены в виде среднего значения ± стандартная ошибка четырех независимых выборок. B. Относительный уровень экспрессии вирусного гена N анализировали с помощью кПЦР через 9 часов после заражения. Необработанные данные были нормализованы с использованием 18 S рибосомной РНК в качестве гена домашнего хозяйства.Результаты представлены как среднее значение ± стандартная ошибка трех биологических повторов. Значимые различия отображались как *** (0,0001

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0100015.g008

Транскрипцию гена SVCV N также измеряли с помощью кПЦР через 9 ч после заражения, чтобы определить влияние этих IFIT на транскрипцию вируса. В этот момент времени только личинки, которым инъецировали плазмиду IFIT17A, показали значительно более низкую транскрипцию вирусного N-гена по сравнению с инфицированной контрольной группой (фигура 8B).

Обсуждение

IFIT представляют собой новое семейство генов, стимулированных IFN, с противовирусными свойствами, официально не описанными у рыб до недавней опубликованной работы [25]. Используя синтению генома и сравнение последовательностей, мы идентифицировали 10 последовательностей в геноме рыбок данио, гомологичных генам IFIT человека, расположенным в хромосоме 10 (четыре гена и один псевдоген). За исключением IFIT5A, все гены IFIT рыбок данио имели сходные по длине и консервативные домены.

В отличие от человека, большинство генов семейства IFIT у рыбок данио расположены в двух хромосомах (12 и 17), аналогично структуре, наблюдаемой у собак [14], [16].Пять генов IFIT были сгруппированы на хромосоме 12, как описано ранее [16], [25], но наш анализ также зарегистрировал присутствие трех генов IFIT на хромосоме 17, одного гена на хромосоме 13 и еще одного дополнительного гена на хромосоме 5, что согласуется с с тем, что недавно сообщалось [25]. Гены IFIT на хромосомах 5 и 13 не сохраняли синтению с хромосомами позвоночных, вероятно, отражая геномные транслокации [26], [27]. События дупликации генома являются мощными двигателями эволюции [28], [29], поскольку они предоставляют возможности для модификации или мутации дубликатов генов, в то время как критические функции поддерживаются другими копиями.Модифицированные или мутировавшие дублированные гены могут приобретать новые функции или разделять исходные функции предкового гена между различными изоформами. Присутствие различных членов генов семейства IFIT у рыб может способствовать расширению распознавания врожденного иммунитета или модулировать врожденные и адаптивные иммунные ответы на специфические проблемы.

Анализ дарвиновского отбора был проведен для количественной оценки давления отбора, действующего на гены IFIT [30], [31], и результаты показали, что гены, расположенные на хромосоме 17, прошли положительный дарвиновский отбор.Этот результат вместе с филогенетическим анализом отразил усиленное накопление эволюционных изменений в этих генах по сравнению с другими генами IFIT. Ускоренная эволюция генов IFIT на хромосоме 17 может быть связана с прямым взаимодействием этих белков с патогенными вирусами, поскольку наблюдались повышенное давление отбора и быстрая эволюция генов, связанных с иммунитетом, особенно тех, которые напрямую взаимодействуют с патогенами, по сравнению с неиммунные гены [32] — [41].

Филогенетический анализ подтвердил, что IFIT у млекопитающих сгруппированы в основную группу, включающую четыре ранее описанных гена IFIT [14], [16]. Последовательности других позвоночных составляют разные кластеры, в зависимости от класса (земноводные, птицы или костистые рыбы), как сообщалось ранее [16], однако построение внутренней классификации генов IFIT у рыб затруднено из-за скудности доступной информации. в общедоступных базах данных по другим видам рыб. Более глубокий анализ этого семейства генов для организмов, принадлежащих к разным таксонам, поможет выяснить вовлеченный эволюционный процесс.

Функциональная активность нового семейства IFIT, описанного на рыбках данио, была исследована с использованием экспериментальных моделей in vitro и in vivo . Большинство типов клеток млекопитающих не экспрессируют гены IFIT в базовых условиях [15], [42]; тем не менее, мы наблюдали конститутивную экспрессию IFIT, особенно генов, расположенных на хромосоме 12. Кроме того, распределение десяти различных транскриптов IFIT у рыбок данио показало различные паттерны предпочтительной экспрессии на тканевом уровне и выявило чрезвычайно высокую функциональную сложность, чем это ранее сообщалось у мышей [14], [20], [43], [44].Конститутивно экспрессируемые гены, такие как 12C, 12D и 12E, присутствовали во всех тканях, но низкая экспрессия других генов, таких как 12B, 13A и 17A, может указывать на то, что они являются индуцибельными генами. Более того, высокие уровни экспрессии, наблюдаемые в кишечнике, могут указывать на специфическую функцию IFIT12A, 17A и 17B в этой ткани. Действительно, IFIT на хромосоме 17 в основном экспрессируются в печени и кишечнике. Эти результаты предполагают, что гены IFIT могут иметь неизбыточные противовирусные функции, как ранее предполагалось на мышах [20], [44], отражая дифференциацию и последующую специализацию членов, потенциально облегченную за счет экспансии генов, наблюдаемой у рыб.

Экспрессию генов IFIT анализировали в культурах первичных клеток почек и в клетках ZF4 в ответ на обработку IFNsΦ. Рекомбинантные IFNs Φ (1, 2 и 3) рыбок данио значительно снижали вирусный титр в клетках ZF4, инфицированных SVCV, как сообщалось ранее [45], и индуцировали быструю и высокую экспрессию индуцируемых интерфероном генов MXab в первичных культурах клеток почек и ZF4. клетки, как описано в других моделях рыб. Интересно, что IFNs Ф из группы II (IFNΦ2 и 3) показали более высокую противовирусную активность и индукцию генов MXab, чем наблюдаемые для IFNsΦ из группы I (IFNΦ1).Эта различная противовирусная активность, наблюдаемая между IFN из группы I (IFNΦ1) и группы II (IFNΦ2 и 3), может отражать индукцию нескольких путей ответа, поскольку эти молекулы не связывают одни и те же рецепторные комплексы [8]. Обработка клеток IFNs Ф также индуцировала быстрое увеличение экспрессии генов IFIT в клетках почек (в основном IFIT13A и 17s), что согласуется с предыдущими исследованиями [16]. Модуляция генов IFIT в клетках ZF4 была намного ниже, чем наблюдаемая в клетках почек, скорее всего, потому что ZF4 не является линией иммунных клеток [46], а эффект стимуляции IFN не был сопоставим с эффектом, наблюдаемым в специфических иммунных клетках, представленных в культуры первичных клеток почек и кроветворные ткани рыб.

В ходе эволюции некоторые вирусы развили сложные механизмы, позволяющие избегать врожденной иммунной системы хозяина. В частности, некоторые рабдовирусы, такие как человеческий вирус VSV (вирус везикулярного стоматита) или RV (вирус бешенства), обладают противодействием как индукции IFN, так и передаче сигналов IFN [47]. Эти вирусы имеют разные механизмы противодействия интерфероновому ответу типа I и блокирования индукции противовирусных молекул; однако в обоих случаях целью является уклонение от иммунной защиты хозяина [48].У рыб матричный белок новирхабдовируса, IHNV (вирус инфекционного гематопоэтического некроза), влияет на экспрессию клеточных генов хозяина, подавляя транскрипцию генов, связанных с иммунитетом [49]; однако мало что известно о том, как организован этот эффект.

Клетки

ZF4 и первичные культуры клеток почек, инфицированные SVCV, не показали типичного противовирусного ответа при индукции гена IFN и повышенной экспрессии ISG, таких как MX или IFIT [2], [50]. Блокирование системы интерферона предполагает, что вирус подавляет иммунный ответ в первичных культурах клеток.Этот ответ также исследовали, когда клетки почек были вынуждены вызвать противовирусный ответ посредством стимуляции рекомбинантным IFNs Ф, а также были инфицированы вирусом SVCV. В этом случае паттерн экспрессии IFIT модулировался, как описано в гепатоцитах человека, инфицированных вирусом гепатита С [51]. Клетки почек, обработанные IFNΦ2 и 3, показали пониженную экспрессию почти всех генов IFIT (IFIT12A имел значение), тогда как клетки, обработанные IFNΦ1, показали только понижающую модуляцию IFIT17C после вирусной инфекции.Этот результат может указывать на то, что вирус избегает системы защиты хозяина и подавляет экспрессию определенного подмножества генов IFIT для установления инфекции. Опосредованное вирусами ингибирование системы IFN было описано ранее [51], [52], [53]. Паттерн ответа, наблюдаемый в клетках, обработанных IFNΦ1, после инфицирования SVCV, может отражать различные пути передачи сигналов между клетками, стимулированными IFNΦ из групп I и II. Важно отметить, что IFIT12A был единственным геном, экспрессия которого синергетически индуцировалась через все интерфероны и в ответ на вирусную инфекцию.Различное поведение после стимуляции in vitro вместе с тканеспецифической экспрессией генов IFIT предполагает расширение и различие функций этих генов.

Однако, когда вирусная инфекция проводится in vivo , после внутрибрюшинного инфицирования наблюдалась явная повышающая регуляция экспрессии IFNs и ISG, включая MXab и IFIT. Общий иммунитет хозяина необходим для организации эффективного контроля вирусных инфекций, а отсутствие полного ответа часто приводит к смертельным инфекциям [52].И клетки ZF4, и первичные культуры лейкоцитов почек в головке клеток демонстрируют ограниченную защиту от вирусных инфекций из-за неполного механизма хозяина, и поэтому этими моделями легко манипулировать с помощью SVCV. Эти клетки реагируют на стимул IFN, но не могут дать эффективный ответ против вируса.

Наиболее индуцированные IFIT после инфицирования in vivo , 12B, 13A и 17A, были отобраны для подтверждения прямой противовирусной активности. Микроинъекция яиц рыбок данио на одноклеточной стадии с плазмидами экспрессии, кодирующими эти гены, вызвала значительное снижение смертности после инфекции SVCV, подчеркивая противовирусную роль, которую эти белки могут играть у видов, не относящихся к млекопитающим.У млекопитающих есть доказательства причастности этих белков к ограничению инициации трансляции посредством взаимодействий с фактором инициации трансляции eIF-3 [44], [54] — [57]. Более того, IFIT способны секвестрировать вирусные белки, такие как геликаза E1 вируса папилломы человека [58], и ингибировать репликацию вируса за счет прямого связывания и секвестрации вирусных нуклеиновых кислот [59] — [63]. Однако остается неизвестным, присутствуют ли те же механизмы и у рыб. Мы можем подтвердить, что настоящие результаты обеспечивают основу для множества будущих исследований, касающихся не только защиты рыб (особенно аквакультурных видов) от вирусных инфекций, но и изучения основных аспектов биологии IFIT, которые могут быть изучены на рыбках данио и привлекательный модельный организм с многочисленными экспериментальными преимуществами.

Материалы и методы

Поиск и анализ последовательности

Последовательности IFIT искали с использованием версии сборки генома рыбок данио Zv9 (www.ensembl.org/Daniorerio/), используя сохранение синтении между геномами человека и рыбок данио. Последовательности были подтверждены с помощью ПЦР-амплификации с использованием специфических праймеров (таблица S1) для получения полноразмерной открытой рамки считывания (ORF) каждого гена. Продукты ПЦР субклонировали в вектор pCR3.1 (Invitrogen) и трансформировали в компетентные клетки One Shot TOP10F ’(Invitrogen) для последующего секвенирования и подтверждения ORF.

Анализ идентичности и сходства между последовательностями IFIT рыбок данио, человека и мыши проводили с использованием MatGAT [64]. Распределение TPR было проанализировано с использованием TPRpred (http://tprpred.tuebingen.mpg.de/) [65], а теоретическая изоэлектрическая точка (pI) и расчетная молекулярная масса были определены с помощью инструментов ExPaSy (http: // us. expasy.org/tools). Трехмерная структура IFIT рыбок данио была спрогнозирована с помощью сервера I-TASSER [66], выбрана модель с лучшим показателем C, и просмотрена через PyMOL (http: // www.pymol.org). Оценка моделирования шаблона (TM-score), мера структурного сходства между двумя белками, также была проанализирована для выявления структурных аналогов с известной кристаллической архитектурой в банке данных белков (PDB; http://www.rcsb.org/pdb/). ).

Филогенетическое дерево и анализ дарвиновской селекции

белковых последовательностей семейства IFIT были извлечены из баз данных NCBI Protein, Uniprot и Ensembl на основе аннотации. Последовательности были впоследствии дополнены с помощью быстрого поиска гомологов в различных базах данных.Первоначальное выравнивание последовательностей было выполнено с использованием онлайн-сервера MAFFT в соответствии со стратегией E-INS-i [67]. Полученное выравнивание было отсечено с использованием Gblocks 0.91b [68] и впоследствии проанализировано с помощью ProtTest 3.2 [69] для определения наиболее подходящей модели замены аминокислот с использованием информационного критерия Акаике (AIC) [70], указанного для оценки гена максимального правдоподобия. tree с использованием PhyML 3.0 [71]. Узловая достоверность рассчитывалась с использованием метода aLRT [72]. Редактирование и представление полученного дерева производилось в FigTree v1.3.1 (http://tree.bio.ed.ac.uk/software/figtree/).

Оценка частоты синонимичных (молчащих) и несинонимичных (заменяющих аминокислоты) замен была выполнена для идентификации положительного дарвиновского отбора в семействе IFIT рыбок данио с использованием пакета PAML версии 4 [73]. Подход максимального правдоподобия (ML) был реализован в программе CODEML для определения значения ω среди IFIT рыбок данио.

Животные

Взрослых рыбок данио дикого типа ( Danio rerio ) выращивали в наших экспериментальных помещениях в соответствии с установленными протоколами [74], [75] (также см. Http: // zfin.org / zf_info / zfbook / zfbk.html). Эксперименты по уходу за рыбами и заражению проводились в соответствии с Национальным комитетом по биоэтике CSIC под номером одобрения 07_012.

Культуры клеток и вирусные инфекции

Фибробластоподобная клеточная линия ZF4, полученная из однодневных эмбрионов рыбок данио (ATCC CRL-2050) [46], культивировалась в модифицированной Дульбекко среде Игла (D / MEM / F12, Gibco) с добавлением 100 мкг / мл примоцина. (InvivoGen) и 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS) при 26 ° C. Клетки человека HEK-293 (ATCC CRL-1573) [76] выращивали в минимальной необходимой среде Игла (Gibco) с добавлением 100 мкг / мл примоцина (InvivoGen), 1X заменимых аминокислот (Gibco), 1 мМ пирувата натрия ( Gibco) и 10% FBS.Клетки инкубировали в атмосфере 5% CO 2 при 37 ° C. Суспензии почечных клеток получали от взрослых рыб, умерщвленных под анестезией во льду. Почки гомогенизировали через сетку 100 мкм, и смесь доводили до необходимой концентрации (1,5 × 10 6 клеток / мл) в среде Лейбовица L-15 (Gibco) с добавлением 100 мкг / мл примоцина (InvivoGen). и 2% FBS и поддерживали при 26 ° C. Для стимуляции in vitro клетки высевали в 24-луночные планшеты по 1 мл на лунку.

В этих экспериментах использовали рабдовирус весенней виремии карпа (изолят SVCV 56/70). Экспериментальные заражения проводили при 22 ° C, и титр вируса рассчитывали, как описано ранее [77].

Экстракция РНК и экспрессия гена

Выделение тотальной РНК

проводили с использованием набора Maxwell 16 LEV Simply RNA Tissue Kit (Promega, Мэдисон, Висконсин, США) в соответствии с инструкциями производителя. кДНК получали из 1 мкг тотальной РНК с использованием SuperMix SuperScript III First-Strand Synthesis (Invitrogen).Специфические праймеры qPCR были сконструированы (таблица S1) с использованием программы Primer3 [78], и была оценена эффективность праймера [79]. Ранее описанную матрицу кДНК [80] использовали для ПЦР-амплификации в реальном времени с 40 циклами и температурой отжига 60 ° C. Все реакции были выполнены с несколькими биологическими повторностями и с использованием технических трех повторностей. Относительные уровни экспрессии генов были нормализованы к экспрессии 18 S рибосомной РНК [81] в качестве контроля гена домашнего хозяйства (праймеры, указанные в таблице S1), следуя методу Pfaffl [79].

Продукция рекомбинантных IFN рыбок данио

экспрессионных конструкций IFNΦ1, IFNΦ2 и IFNΦ3 у рыбок данио (номера доступа в GenBank: NM_207640, NC_007114 и NC_007114 соответственно) в скелете pcDNA3.1 / V5-His были любезно предоставлены доктором Мулеро (Университет Мурсии, Испания). Рекомбинантные IFNs Ф получали трансфекцией 6 мкг плазмид в клетки HEK-293 при 70-80% конфлюэнтности с использованием реагента для трансфекции ДНК X-tremeGENE HP (Roche) в соответствии с инструкциями производителя.Через 48 часов после трансфекции супернатанты собирали и хранили при -80 ° C до дальнейшего использования.

Противовирусная активность генов IFIT у рыбок данио

Три выбранных IFIT (12B, 13A и 17A) были амплифицированы с использованием Touchdown PCR (праймеры в таблице S1), и продукты PCR были клонированы с использованием набора pcDNA 3.1 / V5-His TOPO TA Expression Kit (Invitrogen). Компетентные клетки One Shot TOP10F (Invitrogen) трансформировали для создания плазмидных конструкций. Очистку плазмид проводили с использованием набора PureLink HiPure Plasmid Midiprep Kit (Invitrogen).Рекомбинантные плазмиды микроинъектировали в эмбрионы рыбок данио на одноклеточной стадии с помощью стеклянной микроиглы с использованием микроманипулятора Narishige MN-151 и микроинъектора Narishige IM-30. В каждом эксперименте в общей сложности 240 эмбрионов были разделены на 6 групп по 40 яиц (4 повтора по 10 эмбрионов), и в каждую партию вводили микроинъекцию следующими препаратами, разведенными в PBS: pcDNA 3.1-IFIT12B, pcDNA 3.1-IFIT13A, pcDNA 3.1- IFIT17A, pcDNA 3.1-empty и PBS. Дополнительная необработанная группа была включена для контроля качества и выживаемости яиц.Количество плазмиды, инокулированной в каждый эмбрион, составляло 100 пг / яйцо в конечном объеме 2 нл. Через три дня после введения плазмиды личинкам микроинъектировали в проток Кювье 2 нл суспензии SVCV с конечной концентрацией 10 3 TCID 50 / мл. Смертность от вирусной инфекции регистрировалась в течение 3 дней после заражения до самостоятельного кормления и, следовательно, до того, как потребовалось этическое разрешение (директива ЕС 2010_63) [82]. Состояние рыб контролировали трижды в день.Вирусную транскрипцию у личинок, которым инъецировали IFIT, количественно определяли с помощью кПЦР с использованием специфических праймеров для гена N SVCV через 9 часов после заражения. Относительную экспрессию гена N нормализовали к экспрессии 18 S рибосомной РНК (праймеры, указанные в таблице S1).

Статистический анализ

Результаты выражены как среднее значение ± стандартная ошибка. Достоверные различия были определены с помощью t-критерия Стьюдента. Данные in vivo противовирусной активности IFIT анализировали с использованием одностороннего дисперсионного анализа (ANOVA) с последующим тестом множественного сравнения Tukeýs.

Вспомогательная информация

Рисунок S1.

Конститутивная экспрессия генов IFIT в клетках ZF4 и в первичных культурах клеток головной почки. Базальную экспрессию различных генов IFIT анализировали с помощью ПЦР в реальном времени в клетках ZF4 и в культурах первичных лейкоцитов из почек. Относительный уровень экспрессии генов нормализовали с использованием 18 S рибосомной РНК в качестве гена домашнего хозяйства. Графики представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка трех независимых выборок.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0100015.s001

(TIF)

Рисунок S2.

Биологическая активность рекомбинантных IFN рыбок данио. A. Биологическую активность супернатантов клеток HEK-293, трансфицированных плазмидами экспрессии zf-IFNΦ1, zf-IFNΦ2 и zf-IFNΦ3, измеряли в клетках ZF4, помещенных в 96-луночные планшеты, обработанные в течение 2 часов при 26 °. C со 100 мкл супернатанта, содержащего один из трех различных рекомбинантных zf-IFN Φ. После инкубации титровали весеннюю вирусемию карпа (SVCV).Супернатанты, полученные из клеток НЕК-293, трансфицированных пустой плазмидой, использовали в качестве контроля. Обработка клеток ZF4 супернатантами, содержащими IFNΦ1, IFNΦ2 или IFNΦ3, вызвала значительное снижение вирусного титра (инфицированные клетки, обработанные IFNΦ3, показали самый низкий вирусный титр. увеличение экспрессии MXab в обоих типах клеток через 4 и 24 ч. Результаты представлены как среднее значение ± стандартная ошибка трех независимых образцов.Звездочка обозначает значительные различия по сравнению с контрольными клетками (обработанными супернатантами, полученными от клеток HEK-293, трансфицированных пустой плазмидой). Значимые различия отображались как *** (0,0001

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0100015.s002

(TIF)

Благодарности

Авторы выражают благодарность Рубену Чаморро за техническую помощь и доктору Р.Виктор Мулеро (Университет Мурсии, Испания) за предоставление конструкций интерферона рыбок данио.

Вклад авторов

Эксперимент задумал и спроектировал: BN AF. Проведены эксперименты: MV PDR PP GFC SD MMC AR. Проанализированы данные: MV PDR PP GFC MMC AF BN. Предоставленные реагенты / материалы / инструменты анализа: SD AR AF BN. Написал статью: МВ ПДР ПП БН.

Ссылки

  1. 1. Каваи Т., Акира С. (2008) Сигнализация с помощью Toll-подобного рецептора и RIG-1-подобного рецептора.Ann NY Acad Sci 1143: 1–20.
  2. 2. Sadler AJ, Williams BR (2008) Интерферон-индуцируемые противовирусные эффекторы. Nat Rev Immunol 8: 559–568.
  3. 3. Schoggins JW, Rice CM (2011) Стимулируемые интерфероном гены и их противовирусные эффекторные функции. Curr Opin Virol 6: 519–525.
  4. 4. Zou J, Secombes CJ (2011) Интерфероны костистых рыб и их роль в иммунитете. Dev Comp Immunol 35: 1376–1387.
  5. 5. Робертсен Б. (2006) Интерфероновая система костистых рыб.Fish Shellfish Immunol 20: 172–191.
  6. 6. Stein C, Caccamo M, Laird G, Leptin M (2007) Сохранение и дивергенция семейств генов, кодирующих компоненты систем врожденного иммунного ответа у рыбок данио. Геном Биол 8: R251.
  7. 7. Zou J, Tafalla C, Truckle J, Secombes CJ (2007) Идентификация второй группы IFN типа I у рыб проливает свет на эволюцию IFN у позвоночных. J Immunol 179: 3859–3871.
  8. 8. Аггад Д., Мазель М., Будино П., Могенсен К. Э., Хэмминг О. Дж. И др.(2009) Две группы интерферонов, индуцированных вирусом рыбок данио, передают сигнал через различные рецепторы со специфическими и общими цепями. J Immunol 183: 3924–3931. 4343.
  9. 9. Гарсия М.А., Гил Дж., Вентосо И., Герра С., Доминго Э и др. (2006) Влияние протеинкиназы PKR на клеточную биологию: от противовирусного к антипролиферативному действию. Microbiol Mol Biol Rev 70: 1032–1060.
  10. 10. Мартенс С., Ховард Дж. (2006) Интерферон-индуцируемые ГТФазы. Annu Rev Cell Dev Biol 22: 559–589.
  11. 11. Haller O, Staeheli P, Kochs G (2007) Интерферон-индуцированные белки Mx в противовирусной защите хозяина. Биохимия 89: 812–818.
  12. 12. Verrier ER, Langevin C, Benmansour A, Boudinot P (2011) Ранний противовирусный ответ и вирус-индуцированные гены у рыб. Dev Comp Immunol 35: 1204–1214.
  13. 13. Фенстерл В., Ветцель Дж. Л., Рамачандран С., Огино Т., Штолман С.А. и др. (2012) Интерферон-индуцированный Ifit2 / ISG54 защищает мышей от летального нейропатогенеза VSV.PLoS Pathog 8: e1002712.
  14. 14. Fensterl V, Sen GC (2011) Семейство генов ISG56 / IFIT1. J Интерферон цитокин Res 31: 71–78.
  15. 15. Diamond MS, Farzan M (2013) Широкий спектр противовирусных функций белков IFIT и IFITM. Nat Rev Immunol 13: 46–57.
  16. 16. Чжоу X, Михал Дж. Дж., Чжан Л., Дин Б., Ланни Дж. К. и др. (2013) Интерферон индуцировал гены семейства IFIT в противовирусной защите хозяина. Int J Biol Sci 9: 200–208.
  17. 17. Д’Андреа Л.Д., Реган Л. (2003) TPR-белки: универсальная спираль.Trends Biochem Sci 28: 655–662.
  18. 18. Чжу Х., Конг Дж. П., Шенк Т. (1997) Использование анализа дифференциального дисплея для оценки влияния цитомегаловирусной инфекции человека на накопление клеточных РНК: индукция интерферон-чувствительных РНК. Proc Natl Acad Sci USA 94: 13985–13990.
  19. 19. Saha S, Rangarajan PN (2003) Общие гены хозяина активируются в мозге мышей вирусами японского энцефалита и бешенства. J Gen Virol 84: 1729–1735.
  20. 20.Wacher C, Müller M, Hofer MJ, Getts DR, Zabaras R, et al. (2007) Скоординированная регуляция и широко распространенная клеточная экспрессия интерферон-стимулированных генов (ISG) ISG-49, ISG-54 и ISG-56 в центральной нервной системе после заражения различными вирусами. J Virol 81: 860–871.
  21. 21. Рати А.В., Канталупо П.Г., Саркар С.Н., Пипас Дж. М. (2010) Индукция индуцированных интерфероном генов с помощью 40 Т-антигенов обезьяньего вируса. Вирол 406: 202–211.
  22. 22. Берхтольд С., Маннке Б., Кленк Дж., Гейзель Дж., Аутенриет И.Б. и др.(2008) Принудительная экспрессия IFIT-2 подавляет LPS-индуцированную экспрессию TNF-альфа на посттранскрипционных уровнях. BMC Immunol 9: 75.
  23. 23. Овстебо Р., Ольстад О.К., Брюлетто Б., Моллер А.С., Аасе А и др. (2008) Идентификация генов, особенно чувствительных к липополисахариду (LPS) в моноцитах человека, индуцированных штаммами Neisseria meningitidis дикого типа по сравнению с LPS-дефицитными штаммами. Заражение иммунной 76: 2685–2695.
  24. 24. Kylaniemi MK, Haveri A, Vuola JM, Puolakkainen M, Lahesmaa R (2009) Сигнатуры экспрессии генов, характеризующие развитие ответа лимфоцитов во время экспериментальной инфекции Chlamydia pneumoniae.Microb Pathog 46: 235–242.
  25. 25. Лю Й., Чжан И.Б., Лю Т.К., Гуй Дж.Ф. (2013) Специфичное для происхождения расширение семейства генов IFIT: понимание коэволюции с семейством генов IFN. PLoS One 8: e66859.
  26. 26. Postlethwait JH, Woods IG, Ngo-Hazelett P, Yan YL, Kelly PD, et al. (2000) Сравнительная геномика рыбок данио и происхождение хромосом позвоночных. Genome Res 10: 1890–1902.
  27. 27. Вудс И.Г., Уилсон С., Фридлендер Б., Чанг П., Рейес Д.К. и др.(2005) Генная карта рыбок данио определяет хромосомы предков позвоночных. Genome Res 15: 1307–1314.
  28. 28. Soukup SW (1974) Эволюция путем дупликации генов. С. Оно, изд. Спрингер-Верлаг, Нью-Йорк. 160 Тератология 9: 250–251.
  29. 29. Рави В., Бхатия С., Готье П., Лусли Ф., Тай Б. Х. и др. (2013) Секвенирование локусов Pax6 у слоновой акулы выявило семейство генов Pax6 в геномах позвоночных, созданных древними дупликациями и дивергенциями. PLoS Genet 9: e1003177.
  30. 30. Кимура М. (1977) Преобладание синонимичных изменений как свидетельство нейтральной теории молекулярной эволюции. Природа 267: 275–276.
  31. 31. Ян З., Белявский JP (2000) Статистические методы обнаружения молекулярной адаптации. Тенденции Ecol Evol 15: 496–503.
  32. 32. Sunyer JO, Lambris JD (1998) Эволюция и разнообразие системы комплемента пойкилотермных позвоночных. Immunol Rev 166: 39–57.
  33. 33. Zhang J, Rosenberg HF, Nei M (1998) Положительный дарвиновский отбор после дупликации генов в генах рибонуклеаз приматов.Proc Natl Acad Sci USA 95: 3708–3713.
  34. 34. Vilches C, Parham P (2002) KIR: разнообразные, быстро развивающиеся рецепторы врожденного и адаптивного иммунитета. Анну Рев Иммунол 20: 217–251.
  35. 35. Bustamante CD, Fledel-Alon A, Williamson S, Nielsen R, Hubisz MT, et al. (2005) Естественный отбор генов, кодирующих белок, в геноме человека. Природа 437: 1153–1157.
  36. 36. Viertlboeck BC, Habermann FA, Schmitt R, Groenen MA, Du Pasquier L, et al.(2005) Рецепторный комплекс куриных лейкоцитов: очень разнообразное мультигенное семейство, кодирующее по крайней мере шесть структурно различных типов рецепторов. J Immunol 175: 385–393.
  37. 37. Yu XJ, Zheng HK, Wang J, Wang W, Su B (2006) Выявление клон-специфической адаптивной эволюции генов, экспрессируемых мозгом, у человека с использованием макаки-резуса в качестве внешней группы. Геном 88: 745–751.
  38. 38. Stein C, Caccamo M, Laird G, Leptin M (2007) Сохранение и дивергенция семейств генов, кодирующих компоненты системы врожденного иммунного ответа у рыбок данио.Геном Биол 8: R251.
  39. 39. Du Pasquier L, Wilson M, Sammut B (2009) Судьба дублированных генов иммунитета у додекаплоида Xenopus ruwenzoriensis. Front Biosci 14: 177–191.
  40. 40. Fernandes JMO, Ruangsri J, Kiron V (2010) Писцидин атлантической трески и его диверсификация посредством положительного отбора. PloS One 5: e9501.
  41. 41. Будино П., ван дер Аа Л. М., Жоно Л., Дю Паскье Л., Понтаротти П. и др. (2011) Происхождение и эволюция белков TRIM: новые идеи из полного репертуара TRIM рыбок данио и иглобрюх.PLoS ONE 6: e22022.
  42. 42. Daffis S, Samuel MA, Keller BC, Gale MJ, Diamond MS (2007) Клеточно-специфические ответы IRF-3 защищают от заражения вирусом Западного Нила интерферон-зависимыми и независимыми механизмами. PLoS Pathog 3: e106.
  43. 43. Fensterl V, White CL, Yamashita M, Sen GC (2008) Новые характеристики функции и индукции белков семейства мышиных p56. J Virol 82: 11045–11053.
  44. 44. Terenzi F, White C, Pal S, Williams BR, Sen GC (2007) Тканеспецифическая и специфическая для индуктора дифференциальная индукция ISG56 и ISG54 у мышей.J. Virol. 81: 8656–8665.
  45. 45. López-Muñoz A, Roca FJ, Meseguer J, Mulero V (2009) Новые взгляды на эволюцию IFN: IFNs группы II рыбок данио индуцируют быструю и временную экспрессию IFN-зависимых генов и проявляют мощную противовирусную активность. J Immunol 182: 3440–3449.
  46. 46. Driever W, Rangini Z (1993) Характеристика клеточной линии, полученной из эмбрионов рыбок данио (Brachydanio rerio). In vitro Cell Dev Biol Anim 29A: 749–754.
  47. 47.Rieder M, Conzelmann KK (2009) Уклонение рабдовируса от системы интерферона. J Интерферон цитокин Res 29: 499-509.
  48. 48. Faul EJ, Douglas SL, Schnell MJ (2009) Реакция на интерферон и уклонение от вирусов членами семейства Rhabdoviridae. Вирусы 1: 832–851.
  49. 49. Chiou PP, Kim CH, Ormonde P, Leong JA (2000) Матричный белок вируса инфекционного гематопоэтического некроза подавляет экспрессию генов, направленную на хозяина, и вызывает морфологические изменения апоптоза в культурах клеток.J Virol 74: 7619–7627.
  50. 50. Randall RE, Goodbourn S (2008) Интерфероны и вирусы: взаимодействие между индукцией, сигнализацией, противовирусными реакциями и мерами противодействия вирусам. J Gen Virol 89: 1–47.
  51. 51. Райчоудхури А., Шривастава С., Стил Р., Ким Х., Рей Р. и др. (2011) Белки ISG56 и IFITM1 ингибируют репликацию вируса гепатита С. J Virol 85: 12881–12889.
  52. 52. Самуэль М.А., Даймонд М.С. (2006) Патогенез вирусной инфекции Западного Нила: баланс между вирулентностью, врожденным и адаптивным иммунитетом и уклонением от вирусов.J Virol 80: 9349–9360.
  53. 53. Гарсиа-Састре A (2011) Индукция и уклонение от ответа интерферона типа I вирусами гриппа. Virus Res 162: 12–18.
  54. 54. Guo J, Hui DJ, Merrick WC, Sen GC (2000) Новый путь регуляции трансляции, опосредованный эукариотическим фактором инициации 3. EMBO J 19: 6891–6899.
  55. 55. Guo J, Peters KL, Sen GC (2000) Индукция человеческого белка P56 интерфероном, двухцепочечной РНК или вирусной инфекцией.Вирусология 267: 209–219.
  56. 56. Hui DJ, Bhasker CR, Merrick WC, Sen GC (2003) Вирусный стресс-индуцируемый белок p56 ингибирует трансляцию, блокируя взаимодействие eIF3 с тройным комплексом eIF2.GTP.Met-tRNAi. J Biol Chem 278: 39477–39482.
  57. 57. Ван С., Пфлугебер Дж., Самптер Р.Дж., Содора Д.Л., Хуэй Д. и др. (2003) Альфа-интерферон вызывает различные программы контроля трансляции для подавления репликации РНК вируса гепатита С. J Virol 77: 3898–3912.
  58. 58.Terenzi F, Saikia P, Sen GC (2008) Интерферон-индуцируемый белок, P56, ингибирует репликацию ДНК ВПЧ путем связывания с вирусным белком E1. EMBO J 27: 3311–3321.
  59. 59. Даффис С., Шреттер К.Дж., Шривер Дж., Ли Дж., Юн С. и др. (2010) 2′-O-метилирование кэпа вирусной мРНК позволяет избежать ограничения хозяина членами семейства IFIT. Природа 468: 452–456.
  60. 60. Пихлмайр А., Лассниг С., Эберле К.А., Горна М.В., Бауманн С.Л. и др. (2011) IFIT1 — это противовирусный белок, распознающий 5′-трифосфатную РНК.Nat Immunol 12: 624–630.
  61. 61. Ян З, Лян Х, Чжоу Ц., Ли И, Чен Х и др. (2012) Кристаллическая структура ISG54 раскрывает новую структуру связывания РНК и потенциальные функциональные механизмы. Cell Res 22: 1328–1338.
  62. 62. Abbas YM, Pichlmair A, Górna MW, Superti-Furga G, Nagar B (2013) Структурная основа распознавания вирусной 5′-PPP-РНК белками IFIT человека. Природа 494: 60–64.
  63. 63. Katibah GE, Lee HJ, Huizar JP, Vogan JM, Alber T. и др.(2013) связывание тРНК, структура и локализация человеческого интерферон-индуцированного белка IFIT5. Mol Cell 49: 743–750.
  64. 64. Campanella JJ, Bitincka L, Smalley J (2003) MatGAT: приложение, которое генерирует матрицы сходства / идентичности с использованием последовательностей белков или ДНК. BMC Bioinform 4: 29.
  65. 65. Karpenahalli MR, Lupas AN, Söding J (2007) TPRpred: инструмент для предсказания TPR-, PPR- и SEL1-подобных повторов на основе белковых последовательностей. BMC Bioinformatics 8: 2.
  66. 66. Рой А., Кучукурал А., Чжан И. (2010) I-TASSER: унифицированная платформа для автоматизированного прогнозирования структуры и функции белка. Nat Protoc 5: 725–738.
  67. 67. Katoh K, Kuma K, Toh T, Miyata T (2005) MAFFT, версия 5: повышение точности множественного выравнивания последовательностей. Nucleic Acids Res 33: 511–518.
  68. 68. Talavera G, Castresana J (2007) Улучшение филогении после удаления расходящихся и неоднозначно выровненных блоков из выравнивания последовательностей белков.Syst Biol 56: 564–577.
  69. 69. Дарриба Д., Табоада Г., Доалло Р., Посада Д. (2011) ProtTest 3: быстрый выбор наиболее подходящих моделей эволюции белка. Биоинформатика 27: 1164–1165.
  70. 70. Акаике Х. (1974) Новый взгляд на идентификацию статистической модели. EEE Trans. Автоматическое управление Ac-19: 716–724.
  71. 71. Guindon S, Dufayard JF, Lefort V, Anisimova M, Hordijk W. и др. (2010) Новые алгоритмы и методы для оценки филогении максимального правдоподобия: оценка производительности PhyML 3.0. Syst Biol 59: 307–321.
  72. 72. Анисимова М., Гаскуэль О. (2006) Приблизительный критерий отношения правдоподобия для ветвей: быстрая, точная и мощная альтернатива. Syst Biol 55: 539–552.
  73. 73. Ян З. (2007) PAML 4: филогенетический анализ методом максимального правдоподобия. Mol Biol Evol 24: 1586–1591.
  74. 74. Вестерфилд М. (2000) Книга о рыбках данио. Руководство по лабораторному использованию рыбок данио (Danio rerio), 4-е изд. Издательство Орегонского университета, Юджин.
  75. 75.Nusslein-Volhard C, Dahm R (2002) Данио, практический подход. Издательство Оксфордского университета, Оксфорд.
  76. 76. Graham FL, Smiley J, Russell WC, Nairn R (1977) Характеристики линии клеток человека, трансформированной ДНК из аденовируса человека типа 5. J Gen Virol 36: 59–74.
  77. 77. Reed LJ, Muench H (1938) Простой метод оценки пятидесятипроцентных конечных точек. Ам Дж. Хиг 27: 493–497.
  78. 78. Розен С, Скалецкий Х (2000) Primer3 в WWW для обычных пользователей и программистов-биологов.Методы Мол Биол 132: 365–386.
  79. 79. Pfalffl MW (2001) Новая математическая модель для относительной количественной оценки в RT-PCR в реальном времени. Nucleic Acids Res 29: 2002–2007.
  80. 80. Диас-Росалес П., Ромеро А., Бальсейро П., Диос С., Новоа Б. и др. (2012) Идентификация на основе микрочипов дифференциально экспрессируемых генов в семействе камбалы (Scophthalmus maximus) после заражения вирусом вирусной геморрагической септицемии (VHSV). Мар Биотехнология 14: 515–529.
  81. 81.McCurley AT, Callard GV (2008) Характеристика генов домашнего хозяйства у рыбок данио: различия самцов и самок и влияние типа ткани, стадии развития и химической обработки. BMC Mol Biol 9: 102.
  82. 82. Belanger SE, Balon EK, Rawlings JM (2010) Солевой онтогенез рыб и чувствительные ранние стадии жизни для тестов экотоксикологии. Акват. Toxicol 97: 88–95.

Сверхчувствительное определение белка интерферона альфа при заболеваниях человека с помощью цифрового ИФА

Дата: Это событие произошло 15 мая 2018 г.

Спонсор индивидуальной веб-трансляции сохраняет исключительную ответственность за содержание.

Интерфероны I типа (IFN) являются важными медиаторами противовирусных реакций и участвуют в патогенезе аутоиммунных заболеваний, в первую очередь системной красной волчанки (СКВ), сахарного диабета и дерматомиозита, а также моногенных интерферонопатий I типа.

Несмотря на эту фундаментальную роль в здоровье и болезнях, прямая количественная оценка IFN типа I до недавнего времени была сложной задачей, поскольку вместо этого использовались косвенные показания, такие как экспрессия генов.

Используя технологию цифрового ELISA на основе одиночных молекул (Simoa) в сочетании с высокоаффинными аутоантителами, выделенными от пациентов с двуаллельными мутациями в белке AIRE, вызывающими APS1 / APECED, мы можем определять аттомолярные концентрации IFNα в образцах пациентов. Важно отметить, что эти антитела позволили выявить все 13 подтипов IFN-α, а измерения белка хорошо коррелировали с функциональной активностью и экспрессией генов, стимулированной IFN. Высокие уровни циркулирующего IFNα были связаны с повышенной клинической тяжестью у пациентов с СКВ, а исследование клеточного источника белка IFNα выявило механизмы, специфичные для заболевания.

Измерение аттомолярных концентраций IFNα с помощью цифрового ELISA расширяет наше понимание биологии IFN и потенциально улучшает диагностику и стратификацию патологий, связанных с нарушением регуляции IFN, а также предоставляет новые инструменты для оценки новых терапевтических стратегий.

Во время этой веб-трансляции вы узнаете / выступят наши докладчики:

  • Как цифровой ELISA обеспечивает прямую количественную оценку белка IFNa в образцах человека
  • Как применение этого анализа к различным заболеваниям позволяет лучше классифицировать аутоиммунные заболевания и потенциальную стратификацию пациентов
  • Такая низкая чувствительность к белкам может идентифицировать клеточный драйвер аутоиммунных состояний

Не можете присоединиться к прямой трансляции? Смотрите по запросу.Зарегистрируйтесь сейчас, чтобы получать информацию о том, как получить доступ после прямой трансляции.

  • Доктор Дарра Даффи, Институт Пастера, Париж,

    На протяжении всей моей исследовательской карьеры меня интересовало, как лучшее понимание фундаментальной иммунологии может быть применено к новым решениям для улучшения здоровья человека. Я получил докторскую степень в области иммунологической памяти, и по мере развития моей карьеры я стал ближе к трансляционным исследованиям, чтобы доставлять результаты исследований в клинику.Совсем недавно я сосредоточился на открытии и трансляции иммунных биомаркеров, которые могут помочь в диагностике заболеваний или в принятии терапевтических решений. В настоящее время я как научный руководитель проекта LabEx Milieu Interieur в Институте Пастера, Париж, специализируюсь на изучении генетических и экологических детерминант здорового иммунного ответа, а также на применении этих результатов в условиях болезни для разработки новых диагностических и терапевтических подходов.

  • Модератор: Dr.Джейшан Карпен, Springer Nature

    Джейшань — старший менеджер по издательству Springer Nature и курирует заказное мультимедийное устройство. Ранее он руководил научными мероприятиями в Королевском институте Великобритании. Он получил докторскую степень в области нейрогенетики в Университете Суррея, Великобритания. Его докторская диссертация была сосредоточена на выявлении полиморфизмов, связанных с суточными предпочтениями и циркадными нарушениями сна.

.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *