Сколько делается ип: Ваш браузер устарел | Тинькофф Банк

Содержание

Срок регистрации ИП в 2021 году

Содержание

  1. Затраты времени на регистрацию ИП
  2. Как сэкономить время на открытии ИП

При регистрации физ. лица в качестве индивидуального предпринимателя через ИФНС срок регистрации составит 3 рабочих дня. Нужно обращаться в регистрирующую инспекцию по прописке. Это не всегда удобно. Например, если вы проживаете в другом районе или городе, добавится время на дорогу.

Можно также подать документы через МФЦ. Сейчас, в 2021 году, большиство из этих центров взаимодействуют с ФНС по электронному документооброту, так что время регистрации сильно не изменится.

В обоих случаях вам необходимо узнать, к какой инспекции вы относитесь.

Удобный вариант создания ИП — через онлайн-сервис Альфа-Банка. Сервис возьмет на себя все регистрационные вопросы и поможет подготовить документы, выпустить ЭЦП, направить документы онлайн, а также для вас будет открыт расчетный счет в Альфа-Банке. Всё это бесплатно! Не нужно оплачивать даже госпошлину.

1. Затраты времени на регистрацию ИП

Для регистрации ИП вам понадобится время на следующие действия:

  1. Сбор необходимых документов — от 1 дня.
  2. Подача документов — от 1 дня.
  3. Регистрация ИП — 3-7 дней.
  4. Получение документов в бумажном виде— от 1 дня.

В сумме получается примерный срок от 5 до 14 дней. Больше времени займет регистрация ИП, при которой документы направляются почтой — прибавится время на доставку письма в ФНС.

2. Как сэкономить время на открытии ИП

1. Подготовьте комплект документов автоматически с помощью нашего бесплатного онлайн-сервиса. Это быстрый и надежный вариант. Программа не допускает ошибок и оформляет документы в точном соответствии с требованиями закона и ФНС.

2. Позвоните в ИФНС или МФЦ, уточните вопросы о подаче. Что можно узнать:

  • График работы
  • Есть ли возможность записаться заранее
  • Нужно ли оплачивать госпошлину в МФЦ

Большиство многофункциональных центров рабоатет с ФНС по электронному документообороту, это значит, что гопошлину оплачивать не потребуется, но всё же лучше уточнить это заранее перед визитом.

3. Запишитесь на приём заранее:

Чтобы не терять время зря в живой очереди постарайтесь записаться на приём заранее.

  • Через сервис ФНС или Госуслуги можно записаться на приём в ФНС
  • В МФЦ можно записаться через сайт МФЦ, а в некоторых центрах по телефону
  • Если выбрали способ подачи через нотариуса, также запишитесь к нему на конкретное время

4. Есть несколько вариантов подать заявление:

  • наиболее удобный способ — зарегистрировать ИП онлайн через бесплатный сервис Альфа-Банка. Вам помогут подготовить документы, выпустить ЭЦП, направить документы через интернет, а также откроют расчетный счет.
  • лично на приеме в ИФНС или через МФЦ
  • по почте, отправив заверенные нотариусом документы заказным письмом
  • через нотариуса, используя его электронную подпись

Срок ответа налоговой зависит от того, как долго документы будут туда доставляться при выбранном способе подачи.

5. Получите готовое свидетельство о постановке на учет на электронную почту. Оно имеет такую же юридическую силу, как бумажное и подписывается электронной цифровой подписью ФНС. Для получения бумажного варианта документов о регистрации, нужно проставить отметку на последней странице формы № Р21001.

Получите полный пакет документов для регистрации ИП бесплатно!

Наш онлайн-сервис для вас бесплатно сформирует все необходимые документы для открытия ИП. На это уйдет всего 15 минут. Заполните поля формы своими данными, следуя подсказкам. Затем необходимо скачать и распечатать готовые документы. Сервис учитывает все новые требования закона и ФНС. Также вы получите инструкцию по подаче.

Все сервисы на сайте

С помощью нашего бесплатного сервиса вы можете автоматически подготовить документы в налоговую. Укажите свои данные в форме и через 15 минут сможете скачать готовые документы. Наш сервис работает без ошибок.

Сроки регистрация ИП

Статьей 23 Гражданского кодекса РФ предусмотрено право гражданина заниматься предпринимательской деятельностью без образования юридического лица. Для этого физическое лицо должно пройти процедуру государственной регистрации в качестве индивидуального предпринимателя (далее — ИП), если законом РФ не предусмотрено иное.

Будущих предпринимателей часто интересует вопрос касательно сроков регистрации в качестве ИП. Для ответа на данный вопрос, прежде всего, необходимо понимать, что входит в данный срок.

Срок регистрации ИП в регистрирующем органе

Для приобретения физическим лицом статуса ИП, в регистрирующий орган необходимо подать определённый пакет документов. Перечень необходимых документов для регистрации ИП приведен в ст. 22.1 Федерального закона от 08.08.2001 № 129-ФЗ «О государственной регистрации юридических лиц и индивидуальных предпринимателей» (далее — Закон № 129-ФЗ).

Заявление о государственной регистрации по форме Р21001, содержащееся в перечне документов, может быть заполнено Заявителем самостоятельно с учетом Требований к оформлению документов, представляемых в регистрирующий орган, утверждённых Приказом ФНС России от 25.05.2016 N ММВ-7-14/[email protected] или с помощью специалистов.

В случае, если документы на регистрацию подаются представителем Заявителя, подпись в заявлении по форме Р21001, а также копия всех страниц паспорта Заявителя должны быть нотариально заверены, а также оформлена доверенность на подачу и получение документов. При данном способе подачи необходимо учитывать время, затрачиваемое на нотариальное заверение.

Согласно п. 3 статьи 22.1 Закон № 129-ФЗ государственная регистрация физического лица в качестве ИП осуществляется в течение 3х рабочих дней со дня представления в регистрирующий орган необходимых документов, не включая день подачи и получения.

Таким образом, минимальный срок регистрации – 5 рабочих дней, в течение которых регистрирующим органом рассматриваются представленные документы и выносится решение.

Сколько времени занимает регистрация ИП в действительности?

Однако время регистрации ИП нельзя связывать только с установленным законом сроком. Перед тем, как подать документы в регистрирующий орган, потребуется решить следующее вопросы:

  • Какими видами деятельности, будущий предприниматель будет заниматься?
  • Какую систему налогообложения стоит выбрать?

Неправильно выбранная система налогообложения может превратиться в серьезное бремя, выраженное в высоких налоговых ставках. Поэтому рекомендуется перед открытием ИП проконсультироваться с бухгалтером, чтобы выяснить, в какой системе налогообложения предпринимателю будет выгодно работать. Напомним, что на сегодняшний день для ИП действуют следующие режимы налогообложения:

  • ОСНО – общая система налогообложения;
  • УСН (6% и 15%) – упрощённая система налогообложения;
  • ЕНВД – единый налог на вмененный доход;
  • ЕСХН — единый сельскохозяйственный налог;
  • Патентная система налогообложения.

После государственной регистрации предпринимателю также потребуется встать на учет во внебюджетных фондах, открыть расчетный счет в банке и т.д.

Отвечая на вопрос, сколько времени занимает регистрация ИП, необходимо суммировать затраченное время на все вышеперечисленные действия. При условии оперативности и правильности оформления всех документов, регистрация ИП может занять от одной до двух недель, включая установленный законом РФ срок рассмотрения документов регистрирующим органом.

 

Регистрация ИП через МФЦ: пошаговая инструкция

Зарегистрироваться в качестве индивидуального предпринимателя может дееспособный гражданин России или иностранец с правом на временное или постоянное проживание в РФ старше 18 лет, не состоящий на государственной или военной службе.

Для отдельных направлений бизнеса важно отсутствие судимости. Открыть ИП могут и несовершеннолетние старше 14 лет, если есть нотариально оформленное согласие родителей или органов опеки.

Многофункциональные центры «Мои документы» — это госучреждения, которые оказывают госуслуги по принципу одного окна. Это значит, что через МФЦ можно подать документы в почти любое ведомство, в том числе в ФНС, чтобы зарегистрировать ИП. Доставку и согласование центры берут на себя.

Подать документы можно онлайн при наличии электронной подписи либо по почте, лично или через представителя.

  • С января 2019 года при подаче документов в электронном виде, в том числе через сайт МФЦ, не нужно платить госпошлину.
  • МФЦ работают без выходных и перерывов на обед.
  • На приём можно записаться заранее на сайте или по телефону.
  • Сотрудники проконсультируют по сопутствующим вопросам.
  • Можно заодно получить и другие услуги.

Пп. 32 ч. 3 ст. 333.35 НК РФ

  • Услугу регистрации ИП оказывают не все центры. Уточните заблаговременно, примут ли документы в конкретном отделении.
  • Процесс регистрации через МФЦ занимает до 5 рабочих дней вместо трёх, как через ФНС. МФЦ — посредник между физлицом и налоговой, и на передачу документов требуется время.

Срок регистрации ИП в 2021 году

Срок регистрации ИП в налоговой службе определен четко – 3 рабочих дня. Время же регистрации ИП в налоговой зависит от самого предпринимателя, точнее его грамотности и ответственности при заполнении заявления по форме Р21001 (образец). После чего вы либо получаете свидетельство о регистрации, либо отказ в регистрации.

Получить бесплатную консультацию по регистрации ИП

Причиной отказа чаще всего становится нежелание будущего предпринимателя следовать требованиям в заполнении заявления, допускаются ошибки и неточности, которых можно было бы избежать при должном отношении к делу. В итоге срок государственной регистрации ИП может увеличиться до недель и месяцев, и виновата в этом не ФНС или отдельный налоговый инспектор, а сам гражданин.

Срок регистрации ИП 2021

Ранее сроки регистрация ИП составляли 5 рабочих дней. В основном, это время уходило на проверку ваших документов инспектором лично. Иногда лояльно настроенные сотрудники ФНС могли исправить какую-либо допущенную ошибку, экономя вам время и деньги. Теперь введена компьютерная обработка заявлений, а машина, увы, лояльностью отличаться не может, хоть и работает быстрее инспектора. За сколько дней можно открыть ИП сегодня, в 2021 году?

Срок регистрации ИП установлен в 3 рабочих дня.

Об этом есть соответствующая информация и на сайте ФНС:

Видимо, отвечать на вопрос, сколько по времени регистрирует налоговая, уже надоело и самим налоговикам.  Однако, если вы регистрируете не лично, а удаленно (через почту, службы доставки либо электронным способом), то на получение документов (свидетельство и лист записи ЕГРИЛ) уйдет немного больше времени. В этих случаях сказать, сколько времени занимает регистрация ИП, с точностью до дня нельзя, но в пределах недели с момента подачи документов желанный статус вы получите.

Зарезервируйте счет для ИП, пока ждете регистрацию:▼ 

Передвигайте «ползунки», раскройте и выберите «Дополнительные условия», чтобы Калькулятор подобрал для Вас оптимальное предложение по открытию расчетного счета. Оставьте заявку и Вам перезвонит менеджер банка: проконсультирует по тарифу и зарезервирует расчетный счет.

 



Еще несколько коротких вопросов-ответов:

  • Какой срок регистрации ИП для иностранцев? То же самое, 3 рабочих дня, если говорим о рассмотрении в налоговой. Просто понадобятся другие документы и услуги нотариуса, которые могут чуть затянуть процесс.
  • Влияет ли на срок регистрации в качестве ИП вид деятельности, которым предприниматель собирается заниматься? Нет, не влияет, но есть нюанс. При заполнении заявления на листе с кодами ОКВЭД требуется указывать коды не менее 4 знаков, в противном случае последует отказ в регистрации.
  • Сколько по времени открыть ИП, если обратиться к юристам, занимающимся регистрацией фирм? Быстрее не получится все равно, скорее можно говорить о меньшей вероятности в отказе, потому что заполнять заявление за вас будут профессионалы.
  • Правда ли, что можно бесплатно сформировать весь пакет документов с помощью специализированных сервисов в Интернет? Да, это так. Такие сервисы хороши тем, что представляют собой программу, в которой уже учтены все требования регистрирующих органов (подробнее читайте в статье «Регистрация ИП онлайн«). Соответственно, заметно снижается вероятность ошибки, а, значит, сокращается срок регистрации ИП.
  • Сколько стоит открыть ИП и на чём можно сэкономить? Мы оценили все организационные расходы в первый год открытия ИП в этой статье.

Если у Вас появился вопрос, пожалуйста, оставьте его в комментариях ниже: отвечаем оперативно! И подпишитесь на нашу рассылку, чтобы быть в курсе новых статей на Все-для-ИП:

Статья 16. Порядок оформления результатов проверки / КонсультантПлюс

1. По результатам проверки должностными лицами органа государственного контроля (надзора), органа муниципального контроля, проводящими проверку, составляется акт по установленной форме в двух экземплярах. Типовая форма акта проверки устанавливается уполномоченным Правительством Российской Федерации федеральным органом исполнительной власти.

2. В акте проверки указываются:

1) дата, время и место составления акта проверки;

2) наименование органа государственного контроля (надзора) или органа муниципального контроля;

3) дата и номер распоряжения или приказа руководителя, заместителя руководителя органа государственного контроля (надзора), органа муниципального контроля;

4) фамилии, имена, отчества и должности должностного лица или должностных лиц, проводивших проверку;

5) наименование проверяемого юридического лица или фамилия, имя и отчество индивидуального предпринимателя, а также фамилия, имя, отчество и должность руководителя, иного должностного лица или уполномоченного представителя юридического лица, уполномоченного представителя индивидуального предпринимателя, присутствовавших при проведении проверки;

6) дата, время, продолжительность и место проведения проверки;

7) сведения о результатах проверки, в том числе о выявленных нарушениях обязательных требований и требований, установленных муниципальными правовыми актами, об их характере и о лицах, допустивших указанные нарушения;

8) сведения об ознакомлении или отказе в ознакомлении с актом проверки руководителя, иного должностного лица или уполномоченного представителя юридического лица, индивидуального предпринимателя, его уполномоченного представителя, присутствовавших при проведении проверки, о наличии их подписей или об отказе от совершения подписи, а также сведения о внесении в журнал учета проверок записи о проведенной проверке либо о невозможности внесения такой записи в связи с отсутствием у юридического лица, индивидуального предпринимателя указанного журнала;

9) подписи должностного лица или должностных лиц, проводивших проверку.

3. К акту проверки прилагаются протоколы отбора образцов продукции, проб обследования объектов окружающей среды и объектов производственной среды, протоколы или заключения проведенных исследований, испытаний и экспертиз, объяснения работников юридического лица, работников индивидуального предпринимателя, на которых возлагается ответственность за нарушение обязательных требований или требований, установленных муниципальными правовыми актами, предписания об устранении выявленных нарушений и иные связанные с результатами проверки документы или их копии.

4. Акт проверки оформляется непосредственно после ее завершения в двух экземплярах, один из которых с копиями приложений вручается руководителю, иному должностному лицу или уполномоченному представителю юридического лица, индивидуальному предпринимателю, его уполномоченному представителю под расписку об ознакомлении либо об отказе в ознакомлении с актом проверки. В случае отсутствия руководителя, иного должностного лица или уполномоченного представителя юридического лица, индивидуального предпринимателя, его уполномоченного представителя, а также в случае отказа проверяемого лица дать расписку об ознакомлении либо об отказе в ознакомлении с актом проверки акт направляется заказным почтовым отправлением с уведомлением о вручении, которое приобщается к экземпляру акта проверки, хранящемуся в деле органа государственного контроля (надзора) или органа муниципального контроля. При наличии согласия проверяемого лица на осуществление взаимодействия в электронной форме в рамках государственного контроля (надзора) или муниципального контроля акт проверки может быть направлен в форме электронного документа, подписанного усиленной квалифицированной электронной подписью лица, составившего данный акт, руководителю, иному должностному лицу или уполномоченному представителю юридического лица, индивидуальному предпринимателю, его уполномоченному представителю. При этом акт, направленный в форме электронного документа, подписанного усиленной квалифицированной электронной подписью лица, составившего данный акт, проверяемому лицу способом, обеспечивающим подтверждение получения указанного документа, считается полученным проверяемым лицом.

(часть 4 в ред. Федерального закона от 13.07.2015 N 263-ФЗ)

(см. текст в предыдущей редакции)

5. В случае, если для составления акта проверки необходимо получить заключения по результатам проведенных исследований, испытаний, специальных расследований, экспертиз, акт проверки составляется в срок, не превышающий трех рабочих дней после завершения мероприятий по контролю, и вручается руководителю, иному должностному лицу или уполномоченному представителю юридического лица, индивидуальному предпринимателю, его уполномоченному представителю под расписку либо направляется заказным почтовым отправлением с уведомлением о вручении и (или) в форме электронного документа, подписанного усиленной квалифицированной электронной подписью лица, составившего данный акт (при условии согласия проверяемого лица на осуществление взаимодействия в электронной форме в рамках государственного контроля (надзора) или муниципального контроля), способом, обеспечивающим подтверждение получения указанного документа. При этом уведомление о вручении и (или) иное подтверждение получения указанного документа приобщаются к экземпляру акта проверки, хранящемуся в деле органа государственного контроля (надзора) или органа муниципального контроля.

(в ред. Федерального закона от 13.07.2015 N 263-ФЗ)

(см. текст в предыдущей редакции)

6. В случае, если для проведения внеплановой выездной проверки требуется согласование ее проведения с органом прокуратуры, копия акта проверки направляется в орган прокуратуры, которым принято решение о согласовании проведения проверки, в течение пяти рабочих дней со дня составления акта проверки.

7. Результаты проверки, содержащие информацию, составляющую государственную, коммерческую, служебную, иную тайну, оформляются с соблюдением требований, предусмотренных законодательством Российской Федерации.8. Юридические лица, индивидуальные предприниматели вправе вести журнал учета проверок по типовой форме, установленной федеральным органом исполнительной власти, уполномоченным Правительством Российской Федерации. (в ред. Федерального закона от 14.10.2014 N 307-ФЗ)

(см. текст в предыдущей редакции)

9. В журнале учета проверок должностными лицами органа государственного контроля (надзора), органа муниципального контроля осуществляется запись о проведенной проверке, содержащая сведения о наименовании органа государственного контроля (надзора), наименовании органа муниципального контроля, датах начала и окончания проведения проверки, времени ее проведения, правовых основаниях, целях, задачах и предмете проверки, выявленных нарушениях и выданных предписаниях, а также указываются фамилии, имена, отчества и должности должностного лица или должностных лиц, проводящих проверку, его или их подписи.

10. Журнал учета проверок должен быть прошит, пронумерован и удостоверен печатью юридического лица, индивидуального предпринимателя (при наличии печати).

(в ред. Федерального закона от 06.04.2015 N 82-ФЗ)

(см. текст в предыдущей редакции)

11. При отсутствии журнала учета проверок в акте проверки делается соответствующая запись.

12. Юридическое лицо, индивидуальный предприниматель, проверка которых проводилась, в случае несогласия с фактами, выводами, предложениями, изложенными в акте проверки, либо с выданным предписанием об устранении выявленных нарушений в течение пятнадцати дней с даты получения акта проверки вправе представить в соответствующие орган государственного контроля (надзора), орган муниципального контроля в письменной форме возражения в отношении акта проверки и (или) выданного предписания об устранении выявленных нарушений в целом или его отдельных положений. При этом юридическое лицо, индивидуальный предприниматель вправе приложить к таким возражениям документы, подтверждающие обоснованность таких возражений, или их заверенные копии либо в согласованный срок передать их в орган государственного контроля (надзора), орган муниципального контроля. Указанные документы могут быть направлены в форме электронных документов (пакета электронных документов), подписанных усиленной квалифицированной электронной подписью проверяемого лица.

(в ред. Федерального закона от 13.07.2015 N 263-ФЗ)

(см. текст в предыдущей редакции)

Что такое ОКПО? Что такое общероссийский классификатор предприятий и организаций? — Контур.Бухгалтерия

Общероссийский классификатор предприятий и организаций (ОКПО) — это главный государственный классификатор хозяйствующих субъектов страны. А код ОКПО — это восьми- или десятизначный номер в классификаторе, который орган статистики назначает организации или ИП. На территории России этот код должны иметь каждая организация или предприниматель.

В нашей статье мы разберем, что такое код ОКПО, кому и зачем он нужен, где его взять и как с его помощью получить максимум информации о предприятии.

Зачем нужен код ОКПО?

Общероссийский классификатор систематизирует все организации и предпринимателей во всех государственных базах данных. Коды ОКПО помогают различным ведомствам обмениваться информацией и проводить статистический анализ. То есть, прежде всего коды ОКПО необходимы нашей службе статистики. Государственная задача — создать единое информационное поле хозяйствующих субъектов на территории России, и это делается с помощью кодов.

С другой стороны, код ОКПО необходимо знать самим предпринимателям и руководителям организаций. Они требуются не каждый день, но в ряде ситуаций без них не обойтись.

  • Код ОКПО фирмы нужно указывать на всех отчетах и документах — налоговых, юридических и бухгалтерских. Договоры, разрешения и соглашения, лицензии и акты выполненных работ не обходятся без этого кода организации или ИП.
  • Без кода статистики не удастся оформить кредит в финансовой организации. Организация не сможет внести изменения в учредительные документы, сменить руководителя или открыть филиал.
  • При ввозе и вывозе продукции таможня требует коды для оформления товаров.
  • Зная код ОКПО, можно вести поиск по государственным базам данных и получить доступ к любой официальной информации о предприятии. Так вы можете проверить своих контрагентов на благонадежность: узнать, выполняет ли ваш партнер или поставщик обязательства перед государством, не является ли он банкротом.

Кому назначается код ОКПО?

В Общероссийский классификатор попадают все хозяйствующие субъекты: юридические лица (включая филиалы и представительства), индивидуальные предприниматели и организации, которые ведут деятельность без образования юрлица. Деятельность предприятия на рынке будет легальной только после получения кода ОКПО. Этот код становится опознавательным знаком ИП или организации для всех информационных систем Статистики.

Обратите внимание: одинаковых кодов ОКПО не бывает. Случается совпадение кодов, если хозяйствующий субъект был ликвидирован, и тогда его код по прошествии 5 лет можно присвоить новой организации или ИП. Если вы столкнулись с одинаковыми кодами ОКПО у организаций, просто сверьте ИНН: если ИНН не совпадают, то речь идет о разных организациях, и одна из них давно прекратила существование.

Есть ли код ОКПО у ИП?

Сегодня в большинстве случаев коды ОКПО даны предпринимателям с момента регистрации: их начали выдавать предпринимателям с 1999 года. Сейчас ИП имеют свой собственный раздел в классификаторе. Код у предпринимателей состоит из 10 цифр вместо 8, как у юрлиц и других организаций. Если вы начали предпринимательскую деятельность до 1999 года, обратитесь за кодом ОКПО в Управление Росстата.

Обычно предприниматели не знают свой код ОКПО, потому что им при заполнении документов можно ставить прочерк в строке с кодом. Также он не требуется при ведении дел или заполнении отчетов и деклараций.

Как получить свой код ОКПО при регистрации?

Федеральная служба госстатистики (она же Управление Росстата) выдает номера ОКПО. Эта служба ведет и сам Общероссийский классификатор: аккумулирует сведения о хозяйствующих субъектах. 

Организации и ИП при регистрации получают письмо Росстата с кодом ОКПО. Таким образом, получить его впервые очень просто: он выдается вместе с другими регистрационными документами.

Как узнать свой код ОКПО?

Если вы потеряли письмо с кодом, запросите его повторно в территориальном отделении Росстата (эта услуга платная). Запрос в статистику можно принести лично или отправить в электронном виде через сайт. 

Также можно воспользоваться сервисом Росстата, где поиск ведется по ИНН, ОГРН или типу уведомления. Так вы можете узнать не только свой код, но и коды контрагентов.

Еще один вариант для ИП и организаций — сервис “Коды Росстата Российской Федерации”. Выберите регион на этой странице, после этого вы увидите ссылки на контакты районных отделов статистики и официальный сайт Росстата в вашем регионе. Выберите ссылку “Сформировать и распечатать уведомление с кодами статистики” для ИП или для юрлиц. Введите данные для поиска кодов статистики: ИНН или ОГРН. К сожалению, сервис работает в тестовом режиме, и поиск для некоторых регионов дает сбой.


Как найти код ОКПО для организации?

Коды крупных предприятий / организаций можно узнать, если у вас на руках есть договора, лицензии, бухгалтерские документы фирмы, где этот код должен проставляться вместе с другими реквизитами. Часто код присутствует на печати предприятия.

Также номер ОКПО фирмы можно узнать с помощью поисковых систем в интернете. Многие организации публикуют код ОКПО на своем сайте в разделе реквизитов.

За кодом фирмы можно обратиться в Росстат: заполните необходимую форму, укажите свои паспортные данные, свидетельство о регистрации предприятия и ИНН. В течение нескольких дней вы получите информационное письмо с кодом ОКПО интересующей организации.

Также можно получить код в ФНС в выписке из ЕГРИП или ЕГРЮЛ. Заполните заявку, оплатите пошлину, и в течение 5 дней налоговая предоставит данные предприятию.

Как сменить код ОКПО?

Главная задача кода — указывать ту отрасль, в которой занято предприятие. Поэтому код ОКПО изменяется при смене отрасли деятельности и требуется тем предприятиям, которым пришлось кардинально сменить ведущую деятельность. Если код не указывает на отрасль деятельности, контролирующие органы могут наложить штраф на организацию. 

В остальных случаях номер ОКПО не меняется в течение всей жизни предприятия. Реорганизация или открытие филиалов, смена юридического адреса не требует смены кода.

Для смены кода обратитесь в территориальный орган статистики и запросите новый код ОКПО в связи со сменой деятельности. 

Как устроен ОКПО? Какова его структура и разделы?

Классификатор организаций и предпринимателей состоит из двух больших разделов:

  • 1 раздел с данными по юрлицам, их филиалам и представительствам, а также по организациям, которые ведут деятельность без получения юрлица;
  • 2 раздел с данными по индивидуальным предпринимателям.

Каждый большой раздел классификатора состоит из:

  • блока идентификации с самими кодами ОКПО;
  • блока наименования объектов с полными и сокращенными названиями организаций и именами ИП;
  • блока классификационных признаков с кодировками, которые содержат другие общероссийские классификаторы.

Классификатор постоянно меняется, Статистика вносит в него дополнения и изменения, поэтому справочник существует только в электронном виде и нигде не публикуется: издание заняло бы много томов, а переиздание происходило бы еженедельно.

Бухгалтерский веб-сервис Контур.Бухгалтерия позволяет узнавать коды ОКПО контрагентов за пару минут. Здесь вы можете вести учет, начислять зарплату, отправлять отчетность онлайн и пользоваться поддержкой наших специалистов. 

Попробовать бесплатно

Сроки открытия расчетного счета для ИП и ООО: условия банков

В статье рассмотрим сроки открытия расчетного счета в банке для ИП и ООО. Узнаем, какие условия предлагают банки и как можно ускорить этот процесс. Мы подобрали для вас ТОП-5 банков, предлагающих быстрое открытие счета в режиме онлайн, и подготовили руководство по резервированию номера счета.

Сколько времени занимает открытие счета для ИП и ООО

Российское законодательство не ограничивает по времени процедуру открытия счета. Однако, от того как долго банк будет делать расчетный счет (р/сч.), зависит начало работы бизнеса, ведь многие фирмы и ИП не могут обходиться без переводов и платежей. Узнать, сколько нужно времени, чтобы открыть счет в банке, можно у менеджеров офиса или по телефону контактного центра.

В большинстве случаев кредитные организации открывают расчетный счет через 1-3 дня после получения всех бумаг от клиента. Сколько дней будет делаться р/с, зависит от внутреннего регламента банка, нагрузки службы безопасности, а также от конкретных ответственных сотрудников. Иногда счет открывается в день обращения, а часть банков предлагает услугу срочного открытия р/с за несколько часов со взиманием соответствующей комиссии.

Ускорить процедуру можно, заранее подготовив необходимые документы и предварительно договорившись с менеджером кредитной организации о дате заключения договора. Онлайн-заявка и резервирование р/с через интернет также позволяют быстрее провести процедуру и начать работать.

ТОП-5 банков, с самыми короткими сроками открытия расчетного счета

Услуга резервирования р/с позволяет узнать его номер еще до представления в выбранный банк полного комплекта документов. Оформление заявки на официальном сайте финансового учреждения займет не более 15 минут. Номер будущего счета можно сразу использовать для приема входящих платежей, а также указывать его реквизиты в договорах, счетах и других документах. Сервис по резервированию номера р/с для ИП и предприятий предоставляется бесплатно.

Приведем в таблице информацию о тарифах популярных банков, предлагающих быстро зарезервировать номер счета.

Важно! Из всех банков, только Точка дает возможность открыть счет за 20 минут без звонков и встреч с сотрудниками банка. Но услуга доступна только для ИП. Вы можете самостоятельно открыть счет за 20 минут, но вам нужен компьютер или телефон с камерой, чтобы подтвердить в сервисе свою личность.

Подробнее на сайте Точки

Как моментально зарезервировать расчетный счет

Резервирование номера р/сч. пригодится ИП и организациям, которым для начала работы надо передать полные реквизиты партнерам или заполнить документы на участие в тендере. С помощью этого сервиса можно упростить и ускорить процесс открытия счета в других ситуациях, например, при смене обслуживающего банка или разделении денежных потоков для повышения надежности работы.

По сути, для резервирования р/с клиенту необходимо подать предварительную заявку на его открытие. Сделать это удобней всего через интернет, хотя банки предоставляют возможность зарезервировать счет по телефону контактного центра, а также при личном визите в офис.

Вся операция происходит всего за несколько шагов:

1

Клиент заполняет на сайте кредитного учреждения небольшую анкету и подтверждает указанную контактную информацию.

2

Получив заявку, сотрудники проводят ее быструю проверку, резервируют номер р/с и направляют всю необходимую информацию о реквизитах клиенту по электронной почте. Ему также пересылается полный список документов для заключения договора.

На представление документов дается определенное время (обычно от 7 до 30 дней). Если вы не успеете передать все бумаги сотрудникам банка, то р/с открыт не будет, а заявку аннулируют. После резервирования счет становится активным, но только для входящих платежей. Оплатить счета или снять деньги с него можно только после заключения договора и подписания остальных бумаг.

Оценка IP-активов

Активы интеллектуальной собственности (ИС) являются частью нефизической собственности бизнеса. Они защищены законом, и эта защита может быть обеспечена в суде.

активов ИС могут быть независимо идентифицированы, передаваться и иметь экономический срок службы.

О стоимости

Эксклюзивность

Стоимость актива ИС, по сути, проистекает из права владельца этого актива не допускать его использования конкурентами.Для того чтобы актив ИС имел поддающуюся количественной оценке ценность, он должен:

  • приносят измеримую экономическую выгоду своему владельцу / пользователю; и
  • увеличивает стоимость других активов, с которыми он связан.

Будущие выгоды

Стоимость IP-актива представляет собой потенциальные будущие экономические выгоды для владельца IP или авторизованного пользователя. Значение может быть получено через:

  • прямое использование IP путем интеграции в продукт;
  • продажа или лицензирование интеллектуальной собственности третьему лицу; и
  • другие средства, такие как повышение барьеров для входа или уменьшение угрозы замены.

Основы оценки IP

Оценка

ИС — это процесс определения денежной стоимости активов ИС.

(Изображение: Getty Images / teguhjatipras)

Зачем проводить оценку интеллектуальной собственности?

Чтобы иметь возможность продавать, лицензировать или заключать какие-либо коммерческие соглашения на основе ИС, вам необходимо иметь возможность определять стоимость актива ИС. Оценка ИС также полезна для защиты прав ИС, для внутреннего управления активами ИС и для различных финансовых процессов.

Предварительные требования

Чтобы иметь возможность оценить IP-актив, он должен соответствовать следующим условиям:

  • Он должен быть отдельно идентифицируемым (подлежит конкретной идентификации и с узнаваемым описанием)
  • Должны быть материальные доказательства существования актива (например, контракт, лицензия, регистрационный документ, запись в финансовой отчетности и т. Д.)
  • Он должен был быть создан в определенный момент времени.
  • Он должен иметь возможность принудительного исполнения и передачи по закону.
  • Его поток доходов должен быть отдельно идентифицируемым и изолированным от потоков других бизнес-активов.
  • Его следует продавать независимо от других бизнес-активов.
  • Он должен быть уничтожен или прекращен в установленный момент времени.

Оценка IP на практике

Обеспечение финансирования

Если вы хотите использовать активы ИС в качестве обеспечения для получения финансирования, у вас больше шансов на успех, если ваши активы можно будет оценивать отдельно от вашего бизнеса.В этом случае важно показать, что активы ИС останутся в силе, по крайней мере, в течение периода погашения финансирования. Они также должны оставаться на рынке в случае обращения взыскания или банкротства.

Привлечение партнеров

Прежде чем инвестировать в компанию, венчурные капиталисты должны знать стоимость интеллектуальной собственности этой компании. Следовательно, правильная оценка активов ИС может помочь привлечь на свою сторону таких потенциальных инвесторов, которые стремятся к максимальной доходности и минимальному риску. Кроме того, если вы планируете создать совместное предприятие, стратегический альянс, слияние или приобретение, оценка интеллектуальной собственности может помочь понять, насколько стоимость активов интеллектуальной собственности всех сторон вносит вклад в партнерство.

Лицензирование и франчайзинг

Тщательное понимание ваших активов ИС до того, как вы начнете переговоры о лицензировании, поможет вам гарантировать, что вы сможете принимать более обоснованные решения по условиям лицензионного соглашения. Знание ваших активов ИС также поможет вам определить справедливые ставки роялти. Во франчайзинге и франчайзер, и франчайзи также нуждаются в глубоком понимании стоимости активов интеллектуальной собственности.

Разрешение споров

Знание стоимости актива ИС может повлиять на ваше решение о том, какую стратегию использовать в случае нарушения прав на этот актив.Благодаря оценке интеллектуальной собственности вы сможете лучше решить, следует ли продолжать судебный процесс, выбрать альтернативное разрешение споров или даже рассмотреть вопрос о передаче актива нарушившей права стороне. Оценка IP также играет важную роль при подсчете убытков.

Методы оценки

Основными методами оценки активов ИС являются:

Метод доходности

Метод дохода — наиболее часто используемый метод оценки интеллектуальной собственности. Он оценивает актив ИС на основе суммы экономического дохода, который он, как ожидается, будет генерировать, с поправкой на его текущую стоимость.Этот метод проще всего использовать для активов ИС с положительными денежными потоками, для тех, денежные потоки которых могут быть оценены с некоторой степенью надежности для будущих периодов, и где можно использовать прокси для риска для получения ставок дисконтирования.

Рыночный метод

Рыночный метод основан на сравнении с фактической ценой, уплаченной за передачу прав на аналогичный актив ИС при сопоставимых обстоятельствах. Преимущество этого метода состоит в том, что он прост и основан на рыночной информации, поэтому его часто используют для определения приблизительных значений для использования при определении ставок роялти, налогов и исходных данных для метода дохода.

Метод расчета затрат

Метод расчета стоимости устанавливает стоимость актива ИС путем расчета стоимости аналогичного (или точного) актива ИС. Затратный метод особенно полезен, когда актив ИС можно легко воспроизвести, а экономические выгоды от актива не могут быть точно определены количественно. Этот метод не учитывает потраченные впустую затраты и не принимает во внимание какие-либо уникальные или новые характеристики актива.

Общие сведения об IP-адресах и двоичных файлах

Кори Нахрейнер, CISSP, директор по стратегии безопасности и исследованиям

Любой, кто использовал сетевой компьютер, вероятно, имеет функциональное представление об адресах Интернет-протокола (называемых для краткости IP).IP — это числовой идентификатор, представляющий компьютер или устройство в сети. IP-адрес вашего компьютера подобен домашнему почтовому адресу.

Конечным пользователям действительно не нужно знать больше об IP. Однако почтальон должен знать о почтовом адресе больше, чем человек, отправляющий письмо. По аналогичным причинам сетевой администратор или любой, кто настраивает устройства WatchGuard XTM и Firebox, должны знать технические детали IP-адресов, чтобы распознавать более широкие возможности управления сетью.

В статье «Основы безопасности» «Интернет-протокол для начинающих» описывается, что такое IP-адреса, но не технически. Напротив, в этой статье основное внимание уделяется математическому описанию IP-адреса вплоть до последних двоичных деталей. Если вы уже знакомы с техническими деталями IP-адресов, можете пропустить эту статью. Однако, если вам интересно, как компьютеры видят IP-адреса, или если вам нужно быстро освежить в памяти двоичную математику, читайте дальше.

Как мы видим IP-адреса

Вы знаете, что IP-адрес — это числа, которые представляют устройство в сети, так как почтовый адрес представляет местонахождение вашего дома.Но для того, чтобы действительно назначать и использовать IP-адреса, вы должны понимать формат этих «числовых идентификаторов» и правила, которые к ним относятся.

Давайте сначала сконцентрируемся на том, как люди читают и записывают IP-адреса. Для нас IP-адрес представляет собой четыре десятичных числа, разделенных точками. Например, вы можете использовать 204.132.40.155 в качестве IP-адреса какого-либо устройства в вашей сети. Вы, наверное, заметили, что четыре числа, составляющие IP, всегда находятся в диапазоне от 0 до 255. Вы когда-нибудь задумывались, почему?

Вы также могли слышать, как люди называют четыре числовых значения в IP-адресе «октетами». Октет — это фактически правильный термин для описания четырех отдельных чисел, составляющих IP-адрес. Но не кажется ли странным, что слово, корень которого означает «восемь», описывает число от 0 до 255? Какое отношение имеет «восьмерка» к этим ценностям? Чтобы понять ответы на эти вопросы, вы должны взглянуть на IP-адрес с точки зрения вашего компьютера.

Компьютеры думают в двоичном формате

Компьютеры видят все в двоичном формате.В двоичной системе все описывается с использованием двух значений или состояний: включено или выключено, истина или ложь, да или нет, 1 или 0. Выключатель света можно рассматривать как двоичную систему, поскольку он всегда либо включен, либо выключен. .

Какими бы сложными они ни казались, на концептуальном уровне компьютеры представляют собой не что иное, как коробки, заполненные миллионами «выключателей света». Каждый из переключателей в компьютере называется бит , сокращенно от b inary dig it .Компьютер может включать и выключать каждый бит. Ваш компьютер любит описывать включение как 1 и выключение как 0.

Сам по себе один бит бесполезен, так как может представлять только одно из двух. Представьте, если бы вы могли считать, используя только ноль или единицу. В одиночку вы никогда не сможете считать больше единицы. С другой стороны, если у вас есть группа друзей, которые также могут считать, используя ноль или единицу, и вы добавляете всех своих друзей вместе, ваша группа друзей может рассчитывать столько, сколько они хотят, в зависимости только от того, сколько друзей вы имел.Компьютеры работают точно так же. Располагая биты в группы, компьютер может описывать более сложные идеи, чем просто включить или выключить. Наиболее распространенное расположение битов в группе называется байтом , который представляет собой группу из восьми битов.

Двоичная арифметика

Создание больших чисел из групп двоичных единиц или битов называется двоичной арифметикой . Изучение бинарной арифметики поможет вам понять, как ваш компьютер видит IP-адреса (или любые числа больше единицы).

В двоичной арифметике каждый бит в группе представляет степень двойки. В частности, первый бит в группе представляет 2 0 [Примечание редактора для нематематических специальностей: математики оговаривают, что любое число, возведенное в степень нуля, равно 1], второй бит представляет 2 1 , третий бит представляет 2 2 и т. Д. Бинарный код легко понять, потому что каждый последующий бит в группе ровно удвоено значения предыдущего бита.

В следующей таблице представлено значение каждого бита в байте (помните, что байт равен 8 битам).В двоичной математике значения битов возрастают справа налево, как и в десятичной системе счисления, к которой вы привыкли:

8 th бит 7 th бит 6 th бит 5 th бит 4 th бит 3 rd бит 2 nd бит 1 st бит
128 (2 7 ) 64 (2 6 ) 32 (2 5 ) 16 (2 4 ) 8 (2 3 ) 4 (2 2 ) 2 (2 1 ) 1 (2 0 )

Теперь, когда мы знаем, как вычислить значение каждого бита в байте, создание больших чисел в двоичном формате — это просто вопрос включения определенных битов и последующего сложения значений этих битов.Так что же представляет собой 8-битное двоичное число, такое как 01101110? В следующей таблице анализируется это число. Помните, что компьютер использует 1 для обозначения «включено» и 0 для обозначения «выключено»:

128 (2 7 ) 64 (2 6 ) 32 (2 5 ) 16 (2 4 ) 8 (2 3 ) 4 (2 2 ) 2 (2 1 ) 1 (2 0 )
0 1 1 0 1 1 1 0

В приведенной выше таблице вы можете видеть, что все биты со значениями 64, 32, 8, 4 и 2 включены.Как упоминалось ранее, вычисление значения двоичного числа означает суммирование всех значений «включенных» битов. Итак, для двоичного значения в таблице 01101110 мы складываем 64 + 32 + 8 + 4 + 2, чтобы получить число 110. Двоичная арифметика довольно проста, если вы знаете, что происходит.

Как компьютеры видят IP-адреса

Итак, теперь, когда вы немного разбираетесь в двоичном коде (каламбур), вы можете понять техническое определение IP-адреса. Для вашего компьютера IP-адрес — это 32-битное число, разделенное на четыре байта.

Помните пример IP-адреса выше, 204.132.40.155? Используя двоичную арифметику, мы можем преобразовать этот IP-адрес в его двоичный эквивалент. Вот как ваш компьютер видит этот IP:

11001100.10000100.00101000.10011011

Understanding binary также предоставляет вам некоторые правила, относящиеся к IP-адресам. Мы задались вопросом, почему четыре сегмента IP-адреса называются октетами. Что ж, теперь, когда вы знаете, что каждый октет на самом деле является байтом или восемью битами, имеет смысл называть его октетом.И помните, как значения для каждого октета в IP-адресе находились в диапазоне от 0 до 255, но мы не знали почему? Используя двоичную арифметику, легко вычислить наибольшее число, которое может представлять байт. Если вы включите все биты в байте (11111111), а затем преобразуете этот байт в десятичное число (128 + 64 + 32 + 16 + 8 + 4 + 2 + 1), эти биты всего 255.

Почему меня это волнует?

Теперь, когда вы понимаете двоичный код и то, как компьютеры видят IP-адреса, вы можете подумать: «Это интересно, но в чем смысл?» Конечным пользователям действительно не нужно понимать двоичное представление IP.Фактически, мы намеренно записываем IP-адреса в десятичном формате, чтобы людям было легче их понять и запомнить. Однако сетевые администраторы должны технически знать, что происходит, чтобы реализовать что-либо, кроме простейшей сети.

В статье «Общие сведения о подсетях», состоящей из двух частей, Рик Фэрроу описывает одну из наиболее важных концепций, необходимых для создания сетей TCP / IP, — подсети. Как вы увидите, понимание двоичного кода является фундаментальным требованием для разбиения на подсети. Подобно тому, как почтальон должен разбираться в системе почтовой доставки, чтобы каждое сообщение доходило до места назначения, вы обнаружите, что возможность просматривать IP-адреса так, как это делает ваш компьютер, поможет вам лучше выполнять свою работу в качестве сетевого администратора. — и еще проще.

Подробнее Основы безопасности »

Обзор патентного процесса | USPTO

Если ваша заявка не заполнена , вы будете уведомлены о недостатках в официальном письме от USPTO, известном как Office Action. Вам будет предоставлен период времени для завершения подачи заявки (может потребоваться дополнительная плата). Если упущение не будет исправлено в течение указанного периода времени, приложение будет возвращено или иным образом утилизировано; пошлина за подачу заявки будет возвращена за вычетом пошлины за обработку, указанной в таблице пошлин.Подробнее об ответах на действия Office.

Оцените, сколько времени пройдет , прежде чем вы получите свое первое официальное письмо от USPTO в ответ на ваше заявление.

После того, как ваша заявка будет принята как заполненная , она будет передана на рассмотрение.

Ваш эксперт изучит содержание заявки, чтобы определить, соответствует ли она требованиям 35 U.S.C. 111 (а) .

  • Если экзаменатор считает, что ваше заявление не соответствует требованиям, он объяснит причину (ы).У вас будет возможность внести поправки или опротестовать возражения экзаменатора.
  • Если вы не ответите на заявку эксперта в течение требуемого времени, ваша заявка будет отклонена.

Если ваша заявка была отклонена дважды, вы можете подать апелляцию на решение эксперта в Совет по патентным испытаниям и апелляциям (PTAB).

  • Если ваш ответ на Окончательное действие не преодолевает все возражения эксперта или если какой-либо из них претензии были отклонены дважды.Вы можете рассмотреть возможность подачи апелляции в Совет по патентным испытаниям и апелляциям (PTAB)

Если вы выбрали юридическое представительство , помните, что после подачи заявки патентным поверенным или агентом USPTO будет связываться только с поверенным. или агент. Изобретатели часто звонят в USPTO для получения обновлений, но у них есть назначенный поверенный или агент, представляющий их. USPTO не ведет двойной переписки с заявителем и практикующим патентом (37 CFR 1.33).

Зарегистрируйтесь, чтобы просматривать ваше заявление и документы, ожидающие рассмотрения, в Private PAIR. Вы также можете подписаться на программу действий PAIR e-Office, чтобы получать уведомление по электронной почте, когда новое сообщение Office доступно для просмотра и загрузки в PAIR.

Рассмотрите возможность собеседования с вашим экзаменатором — USPTO рекомендует экзаменаторам проявлять упреждающий подход к экзамену, обращаясь к нашим заинтересованным сторонам и вовлекая их в усилия для решения проблем и сокращения судебного преследования.

Просмотрите подробную матрицу программ, которые могут помочь вам во время экзамена и после завершения судебного преследования.

Обзор и последствия для фармацевтической промышленности

Реферат

Права интеллектуальной собственности (ПИС) определены как идеи, изобретения и творческие выражения, на основе которых существует общественная готовность предоставить статус собственности. ПИС предоставляют определенные исключительные права изобретателям или создателям этой собственности, чтобы они могли извлекать коммерческие выгоды из своих творческих усилий или репутации.Существует несколько типов защиты интеллектуальной собственности, таких как патент, авторское право, товарный знак и т. Д. Патент — это признание изобретения, которое удовлетворяет критериям глобальной новизны, неочевидности и промышленного применения. Права интеллектуальной собственности являются предпосылкой для лучшей идентификации, планирования, коммерциализации, рендеринга и, следовательно, защиты изобретений или творчества. Каждая отрасль должна развивать свою собственную политику в области ПИС, стиль управления, стратегии и т. Д. В зависимости от области своей специализации. Фармацевтическая промышленность в настоящее время имеет развивающуюся стратегию защиты прав интеллектуальной собственности, требующую более пристального внимания и подхода в грядущую эпоху.

Ключевые слова: Лекарство, интеллектуальная собственность, лицензия, патент, фармацевтика

ВВЕДЕНИЕ

Интеллектуальная собственность (ИС) относится к любому оригинальному творению человеческого интеллекта, например, художественному, литературному, техническому или научному творчеству. Права интеллектуальной собственности (ПИС) относятся к юридическим правам, предоставленным изобретателю или создателю для защиты своего изобретения или создания в течение определенного периода времени. [1] Эти юридические права предоставляют изобретателю / создателю или его правопреемнику исключительное право на полное использование своего изобретения / творения в течение определенного периода времени.Совершенно ясно, что интеллектуальная собственность играет жизненно важную роль в современной экономике. Также было окончательно установлено, что интеллектуальному труду, связанному с нововведением, должно уделяться должное внимание, чтобы от него исходило общественное благо. Произошел качественный скачок затрат на исследования и разработки (НИОКР) с соответствующим скачком инвестиций, необходимых для вывода новой технологии на рынок. [2] Ставки разработчиков технологий стали очень высокими, и, следовательно, необходимость защиты знаний от незаконного использования стала целесообразной, по крайней мере, на период, который обеспечил бы возмещение затрат на НИОКР и других связанных с ними затрат и адекватную прибыль для непрерывного использования. инвестиции в НИОКР.[3] Права интеллектуальной собственности — это мощный инструмент для защиты инвестиций, времени, денег и усилий, вложенных изобретателем / создателем интеллектуальной собственности, поскольку он предоставляет изобретателю / создателю исключительное право на определенный период времени на использование его изобретения / создание. Таким образом, права интеллектуальной собственности способствуют экономическому развитию страны, способствуя здоровой конкуренции и поощряя промышленное развитие и экономический рост. Настоящий обзор представляет собой краткий обзор прав интеллектуальной собственности с особым акцентом на фармацевтические препараты.

КРАТКАЯ ИСТОРИЯ

Законы и административные процедуры, касающиеся ПИС, берут свое начало в Европе.Тенденция выдачи патентов началась в четырнадцатом веке. По сравнению с другими европейскими странами, в некоторых вопросах Англия была технологически развитой и использовалась для привлечения ремесленников из других стран на особых условиях. Первые известные авторские права появились в Италии. Венецию можно считать колыбелью системы интеллектуальной собственности, поскольку большинство юридических размышлений в этой области было сделано именно здесь; законы и системы были созданы здесь впервые в мире, и другие страны со временем последовали за ними [4]. Патентному акту в Индии более 150 лет.Первым из них является Закон 1856 г., который основан на британской патентной системе и предусматривает 14-летний срок действия патента с последующими многочисленными законами и поправками [1].

Типы интеллектуальной собственности и их описание

Первоначально только патенты, товарные знаки и промышленные образцы охранялись как «промышленная собственность», но теперь термин «интеллектуальная собственность» имеет гораздо более широкое значение. IPR способствует развитию технологий следующим образом: [1–4]

  • (a)

    он обеспечивает механизм борьбы с нарушениями, пиратством и несанкционированным использованием

  • (b)

    предоставляет пул информация для широкой публики, поскольку все формы ИС публикуются, за исключением случаев коммерческой тайны.

Защита IP может быть обеспечена различными интеллектуальными усилиями, включая

  • (i) Патенты
  • (ii) Промышленные образцы относятся к элементам любой формы, конфигурации, рисунка поверхности, композиции линий и цветов, нанесенных на изделие, будь то двухмерное, например, текстильное, или трехмерное, например, зубная щетка [5]
  • (iii) Товарные знаки относятся к любому знаку, названию или логотипу, под которым ведется торговля любым продуктом или услугой и с помощью которого указан производитель или поставщик услуг.Товарные знаки можно покупать, продавать и лицензировать. Товарный знак не существует, кроме репутации продукта или услуги, которые он символизирует [6]
  • (iv) Авторское право относится к выражению идей в материальной форме и включает литературные, музыкальные, драматические, художественные, кинематографические произведения, аудиокассеты и компьютер. программное обеспечение [7]
  • (v) Географические указания — это указания, которые идентифицируют товар как происходящий с территории страны, региона или местности на этой территории, где данное качество, репутация или другие характеристики товаров по существу являются обязательными. на свое географическое происхождение [8]

Патент выдается на изобретение, которое удовлетворяет критериям глобальной новизны, неочевидности и промышленного или коммерческого применения.На продукты и процессы могут быть выданы патенты. В соответствии с Законом о патентах Индии 1970 года срок действия патента составлял 14 лет с даты подачи, за исключением процессов приготовления лекарств и пищевых продуктов, срок действия которых составлял 7 лет с даты подачи или 5 лет с даты подачи заявки. патент, в зависимости от того, что наступит раньше. На лекарственные препараты и продукты питания патентов не было. [9] Авторское право, созданное в стране-участнице Бернской конвенции, автоматически защищается во всех странах-участницах без необходимости регистрации.Индия подписала Бернскую конвенцию и имеет очень хорошее законодательство об авторском праве, сопоставимое с законодательством любой страны. Однако авторские права не будут автоматически доступны в странах, не являющихся участниками Бернской конвенции. Следовательно, авторское право не может считаться территориальным правом в строгом смысле слова. Как и любое другое имущество, ПИС может быть передано, продано или подарено. [7]

Роль нераскрытой информации в интеллектуальной собственности

Защита нераскрытой информации наименее известна участникам ПИС, и о ней меньше всего говорят, хотя это, пожалуй, самая важная форма защиты для отраслей, научно-исследовательских организаций и других агентств, занимающихся правами интеллектуальной собственности.Нераскрытая информация, обычно известная как коммерческая тайна или конфиденциальная информация, включает формулу, образец, компиляцию, программу, устройство, метод, технику или процесс. Защита нераскрытой информации или коммерческой тайны на самом деле не новость для человечества; на каждом этапе развития люди разрабатывали методы сохранения в секрете важной информации, обычно ограничивая доступ к знаниям членам своей семьи. Законы, относящиеся ко всем формам ПИС, находятся на разных этапах реализации в Индии, но нет отдельного и исключительного закона для защиты нераскрытой информации / коммерческой тайны или конфиденциальной информации.[10]

Давление глобализации или интернационализации не было сильным в период с 1950-х по 1980-е годы, и многие страны, включая Индию, смогли справиться, не применяя сильную систему защиты прав интеллектуальной собственности. Глобализация, вызванная химической, фармацевтической, электронной и ИТ-отраслями, привела к крупным инвестициям в НИОКР. Этот процесс характеризуется сокращением цикла продукта, времени и высоким риском реверс-инжиниринга конкурентами. Промышленности пришли к выводу, что коммерческой тайны недостаточно для защиты технологии.Трудно воспользоваться преимуществами инноваций, если не существует единых законов и правил о патентах, товарных знаках, авторском праве и т. Д. Так права интеллектуальной собственности стали важной составляющей Всемирной торговой организации (ВТО) [11].

Обоснование патента

Патент — это признание формы интеллектуальной собственности, воплощенной в изобретении. Патенты выдаются на патентоспособные изобретения, которые удовлетворяют требованиям , новизна и полезности , в соответствии со строгими процедурами экспертизы и возражения, предписанными в Законе о патентах Индии 1970 года, но нет даже презумпции prima-facie в отношении срок действия выданного патента.[9]

Большинство стран установили национальные режимы для защиты прав интеллектуальной собственности в пределах своей юрисдикции. За исключением случаев авторских прав, охрана, предоставляемая изобретателю / создателю в стране (например, Индия) или регионе (например, в Европейском Союзе), ограничена той территорией, где испрашивается охрана, и недействительна в других странах или регионах. . [1] Например, патент, выданный в Индии, действителен только для Индии, но не в США. Основная причина патентования изобретения — зарабатывать деньги на эксклюзивности, т.е.е. изобретатель или его правопреемник будет обладать монополией, если

  • (a)

    изобретатель сделал важное изобретение с учетом модификаций, внесенных заказчиком, и

  • (b)

    если патентный поверенный правильно описал и заявил изобретение в составленной спецификации патента, то полученный патент предоставит владельцу патента исключительный рынок.

Патентообладатель может осуществлять свои исключительные права, продавая запатентованное изобретение сам или передавая на него лицензию третьей стороне.

Следующее не может считаться патентом:

  • (i) Изобретение, которое является несерьезным или заявляет что-либо очевидное или противоречащее установленному естественному праву. Изобретение, основное или предполагаемое использование которого противоречило бы закону или морали или наносило ущерб общественному здоровью
  • (ii) Открытие, научная теория или математический метод
  • (iii) Простое открытие любого нового свойства или нового использование известного вещества или простое использование известного процесса, машины или устройства, если только такой известный процесс не приводит к получению нового продукта или не использует по крайней мере один новый реагент
  • (iv) Вещество, полученное простой смесью, приводящей только совокупность свойств его компонентов или процесс производства такого вещества
  • (v) Простое расположение, перекомпоновка или дублирование известного устройства, каждое из которых функционирует независимо друг от друга по-своему
  • (vi) A метод сельского хозяйства или садоводства
  • (vii) Любой процесс медицинского, хирургического, лечебного, профилактического, диагностического, терапевтического или другого лечения людей или любой процесс аналогичного лечения imals, чтобы избавить их от болезней или повысить их экономическую ценность или экономическую ценность своей продукции
  • (viii) Изобретение, связанное с атомной энергией
  • (ix) Настоящее изобретение является традиционным знанием

Обоснование Лицензия

Лицензия — это договор, по которому лицензиар разрешает лицензиату выполнять определенные действия, которые в противном случае были бы незаконными.Например, в патентной лицензии патентообладатель (лицензиар) разрешает лицензиату осуществлять определенные права на патент. Результатом является предоставление лицензиату права делать то, что ему / ей в противном случае было бы запрещено делать, то есть лицензия делает законным то, что в противном случае было бы незаконным. [12]

Лицензиар может также лицензировать «ноу-хау», относящееся к реализации лицензированного патентного права, такое как информация, процесс или устройство, возникающие или используемые в коммерческой деятельности, также могут быть включены вместе с патентным правом в лицензионное соглашение.Вот некоторые примеры ноу-хау:

  • (i)

    техническая информация, такая как формулы, методы и рабочие процедуры, и

  • (ii)

    коммерческая информация, такая как списки клиентов и данные о продажах, маркетинг, профессиональные и управленческие процедуры.

Действительно, любая техническая, торговая, коммерческая или другая информация может подлежать охране. [13]

Преимущества для лицензиара:

  • (i) Открывает новые рынки
  • (ii) Создает новые области для получения доходов
  • (iii) Помогает преодолеть проблему внедрения технологии на различных рынках, особенно в зарубежных странах — более низкие затраты риск и экономия на расходах на распространение и маркетинг

Выгоды для лицензиата:

  • (i) Экономия на НИОКР и устранение рисков, связанных с НИОКР
  • (ii) Быстрое использование рыночных требований до того, как рыночный интерес ослабеет
  • (iii) Обеспечивает наличие новейших продуктов.

Роль Договора о патентной кооперации

Договор о патентной кооперации (PCT) — это многосторонний договор, вступивший в силу в 1978 г.Посредством РСТ изобретатель страны-участницы Договаривающейся страны РСТ может одновременно получить приоритет на свое изобретение во всех или в любой из стран-участниц без необходимости подачи отдельной заявки в интересующих странах, указав их в РСТ. заявление. Вся деятельность, связанная с РСТ, координируется Всемирной организацией интеллектуальной собственности (ВОИС), расположенной в Женеве [14].

Для защиты изобретения в других странах необходимо подать независимую патентную заявку в каждой интересующей стране; в некоторых случаях в установленные сроки для получения приоритета в этих странах.Это повлечет за собой большие инвестиции в короткие сроки для покрытия расходов на регистрацию, перевод, оплату услуг адвоката и т. Д. Кроме того, предполагается, что из-за короткого времени, доступного для принятия решения о том, подавать ли патентную заявку в стране или за ее пределами, может быть недостаточно обоснованным. [15]

С другой стороны, изобретатели договаривающихся государств РСТ могут одновременно получить приоритет на свои изобретения без необходимости подачи отдельной заявки в интересующих странах; таким образом, экономия первоначальных вложений в сборы за регистрацию, перевод и т. д.Кроме того, система обеспечивает гораздо больше времени для подачи заявки на патент в странах-членах. [15,16]

Срок, доступный в соответствии с Парижской конвенцией для обеспечения приоритета в других странах, составляет 12 месяцев с даты первоначальной подачи. В соответствии с РСТ доступное время может составлять от 20 до 31 месяца. Кроме того, изобретатель также получает выгоду от отчета о поиске, подготовленного в рамках системы РСТ, чтобы быть уверенным в том, что заявленное изобретение является новым. Изобретатель также может выбрать предварительную экспертизу перед подачей заявки в другие страны, чтобы быть вдвойне уверенным в патентоспособности изобретения.[16]

Управление интеллектуальной собственностью в фармацевтической промышленности

Лекарства и фармацевтические препараты больше, чем любая другая технологическая область, соответствуют описанию глобализации и нуждаются в сильной системе интеллектуальной собственности. Зная, что стоимость вывода на рынок нового препарата может стоить компании от 300 до 1000 миллионов долларов вместе со всеми сопутствующими рисками на этапе разработки, ни одна компания не захочет рисковать своей интеллектуальной собственностью без адекватной прибыли. .Создание, получение, защита и управление интеллектуальной собственностью должны стать корпоративной деятельностью так же, как сбор ресурсов и средств. Революция в области знаний, свидетелями которой мы обязательно являемся, потребует особого постамента для интеллектуальной собственности и обращения с ней в общий процесс принятия решений [17].

Конкуренция в мировой фармацевтической промышленности определяется научными знаниями, а не производственными ноу-хау, и успех компании будет во многом зависеть от ее усилий в области НИОКР. Следовательно, инвестиции в НИОКР в фармацевтической промышленности очень высоки как процент от общего объема продаж; отчеты предполагают, что это может составлять до 15% от продажи.Одним из ключевых вопросов в этой отрасли является управление инновационными рисками, в то время как один стремится получить конкурентное преимущество перед конкурирующими организациями. Риск провала фармацевтических НИОКР сопряжен с высокими затратами, поскольку разработка потенциальных лекарств, не соответствующих строгим стандартам безопасности, прекращается, иногда после многих лет инвестиций. Для тех лекарств, которые устраняют препятствия при разработке, требуется около 8-10 лет с даты, когда соединение было впервые синтезировано.Поскольку патенты на продукты становятся основными инструментами защиты интеллектуальной собственности, фармацевтические компании должны будут сместить фокус НИОКР с разработки новых процессов производства известных лекарств на разработку новой молекулы лекарства и нового химического соединения (NCE). В течение 1980-х годов, после периода успешного лечения многих краткосрочных заболеваний, центр исследований и разработок сместился на долговременные (хронические) болезни. При поиске глобального рынка необходимо обеспечить выполнение требований различных регулирующих органов.[18]

Подразумевается, что количество документов, которые необходимо подать в регулирующие органы, увеличилось почти втрое за последние десять лет. Кроме того, сейчас регулирующим органам требуется гораздо больше времени для утверждения нового препарата. Следовательно, срок патентной защиты сокращается, что приводит к необходимости прилагать дополнительные усилия для получения достаточной прибыли. Ситуация может быть более серьезной в случае лекарств, разработанных с помощью биотехнологии, особенно тех, которые связаны с использованием генов. Вполне вероятно, что промышленно развитый мир вскоре начнет агитацию за более длительную защиту от наркотиков.Также возможно, что многие правительства будут все больше и больше контролировать цены для достижения общественных целей. Это, с одной стороны, подчеркнет необходимость снижения затрат на разработку, производство и маркетинг лекарств, а с другой стороны, потребует планирования более низкой рентабельности, чтобы окупить затраты в течение более длительного периода. Таким образом, очевидно, что фармацевтической промышленности приходится преодолевать множество противоречивых требований. За последние 10–15 лет было разработано множество различных стратегий для сдерживания затрат и получения торговых преимуществ.Некоторые из них — это аутсорсинг НИОКР, формирование партнерств в области НИОКР и создание стратегических союзов [19].

Природа фармацевтической промышленности

Гонка за раскрытием секретов человеческого генома вызвала бурный рост научных знаний и стимулировала разработку новых технологий, которые меняют экономику разработки лекарств. Биофармацевтические препараты, вероятно, займут особое место, и конечной целью будет создание персонализированных лекарств, поскольку у каждого будет свой собственный геном, нанесенный на карту и сохраненный в чипе.Врачи изучат информацию на чипе (ах) и назначат соответствующее лечение. Важным связанным с этим вопросом интеллектуальной собственности будет защита таких баз данных личной информации. Биотехнологически разработанные препараты будут все больше и больше выходить на рынок. Процедура защиты такого лекарства будет немного отличаться от тех обычных лекарств, которые не разработаны биотехнологически. Штаммы микробов, используемые для разработки лекарства или вакцины, должны быть указаны в патентном документе.Если штамм уже известен и описан в литературе, к которой обычно обращаются ученые, то ситуация проста. Однако многие новые штаммы постоянно открываются и разрабатываются, и они сдаются на хранение в международные депозитарные органы в соответствии с Будапештским договором. При поиске новинок следует также обращаться к базам данных этих депозитариев. Компании обычно не публикуют свои работы, но было бы хорошо сделать практикой не раскрывать изобретение посредством публикаций или семинаров до тех пор, пока не будет подана патентная заявка.[20]

Имея дело с микробиологическими изобретениями, важно поместить штамм в одно из признанных хранилищ, которые дадут штамму регистрационный номер, который должен быть указан в описании патента. Это избавляет от необходимости описывать форму жизни на бумаге. Депонирование штамма также стоит денег, но это немного, если вы не имеете дело, например, с клеточными линиями. Кроме того, для изобретений, включающих гены, экспрессию генов, ДНК и РНК, последовательности также должны быть описаны в описании патента, как это было замечено в прошлом.Альянсы могут преследовать множество различных целей, таких как обмен опытом и средствами НИОКР, использование маркетинговых сетей и совместное использование производственных мощностей. При вступлении в альянс НИОКР всегда рекомендуется заключать официальное соглашение, охватывающее такие вопросы, как право собственности на ИС в разных странах, разделение затрат на получение и поддержание ИС и доходов, получаемых от этого, методы сохранения коммерческой тайны, учет ИС. каждой компании до альянса и IP, созданных в ходе проекта, но не учтенных в плане, урегулирование споров.Следует помнить, что альянс был бы благоприятным, если бы портфель интеллектуальной собственности был сильнее, чем у заинтересованного партнера. В этом соглашении могло быть много других элементов. Многие фармацевтические компании скоро будут использовать услуги академических институтов, частных научно-исследовательских агентств, научно-исследовательских и опытно-конструкторских организаций при правительстве в Индии и за рубежом посредством проведения контрактных исследований. Все вышеперечисленные аспекты, упомянутые выше, будут полезны. Особое внимание следует уделить сохранению конфиденциальности исследований.[1–18]

Текущее состояние фармацевтической промышленности показывает, что права интеллектуальной собственности неоправданно усиливаются и нарушаются в ущерб конкуренции и благосостоянию потребителей. Отсутствие риска и инноваций со стороны фармацевтической промышленности подчеркивает неравенство, которое происходит за счет общественного блага. Это несправедливость, которую нельзя вылечить одной законодательной реформой. В то время как усилия Конгресса по устранению лазеек в текущих законах, наряду с новым законодательством, направленным на сокращение еще более неблагоприятной деловой практики в фармацевтической отрасли, могут обеспечить некоторое смягчение последствий, антимонопольное законодательство должно надлежащим образом вмешаться.[21] В то время как антимонопольное законодательство должным образом изучило определенные методы ведения бизнеса, применяемые в фармацевтической промышленности, такие как слияния и поглощения и соглашения об отказе от конкуренции, существует несколько других практик, которые необходимо рассмотреть. Выдача патентов на второстепенные элементы старого лекарства, изменение рецептур старых лекарств для получения новых патентов, а также использование рекламы и разработки торговых марок для увеличения барьеров для выхода на рынок генериков — все это области, в которых антимонопольное законодательство может помочь стабилизировать баланс между поощрением инноваций и сохранением конкуренции.[20]

Традиционная медицина, связанная с натуральными растительными продуктами, является важной частью здравоохранения во многих развивающихся странах, а также в развитых странах, увеличивая их коммерческую ценность. Мировой рынок таких лекарств достиг 60 миллиардов долларов США с ежегодными темпами роста от 5% до 15%. Хотя лекарства, основанные исключительно на традиционных знаниях, не могут претендовать на патент, люди часто так заявляют. Исследователи или компании также могут требовать ПИС на биологические ресурсы и / или традиционные знания после их незначительного изменения.Быстрый рост патентных заявок, связанных с фитотерапией, ясно показывает эту тенденцию. Заявки на патенты в области натуральных продуктов, традиционной фитотерапии и лекарственных средств на травах регулируются собственной политикой интеллектуальной собственности каждой страны в области пищевых продуктов, фармацевтики и косметики, в зависимости от того, что применимо. Лекарственные растения и связанные с ними растительные продукты являются важными объектами патентных притязаний, поскольку они вызвали большой интерес для глобальной организованной индустрии лекарственных средств и косметики.[22]

Некоторые особые аспекты описания патентов на лекарственные средства

Составление описания патента — это высокопрофессиональный навык, который приобретается в течение определенного периода времени и требует хорошего сочетания научных, технологических и юридических знаний. Формула изобретения в любом описании патента составляет сущность патента, на который испрашивается право собственности. Открытие нового свойства в известном материале не подлежит патентованию. Если кто-то может применить это свойство на практике, он сделает изобретение, которое может быть запатентовано.Открытие того, что известное вещество способно противостоять механическому удару, не будет патентоспособным, но железнодорожные шпалы, изготовленные из этого материала, вполне могут быть запатентованы. Вещество может быть не новым, но было обнаружено, что оно обладает новым свойством. Его можно будет запатентовать в сочетании с некоторыми другими известными веществами, если в сочетании они покажут какой-то новый результат. Причина в том, что раньше никто не использовал эту комбинацию для производства инсектицидов, удобрений или лекарств. Вполне возможно, что изобретатель создал новую молекулу, но ее точная структура неизвестна.В таком случае важную роль будет играть описание вещества, а также его свойства и способ его получения. [23]

Объединение известных веществ в полезные продукты может быть предметом патента, если эти вещества имеют определенную рабочую взаимосвязь при объединении вместе. В этом случае никакой химической реакции не происходит. Это дает лишь ограниченную защиту. Любое использование другими отдельными частями комбинации выходит за рамки патента. Например, патент на царская водка не запрещает никому смешивать две кислоты в разных пропорциях и получать новые патенты.Методы лечения людей и животных не являются патентоспособными в большинстве стран (за исключением США), поскольку они не считаются пригодными для промышленного применения. В случае нового фармацевтического использования известного вещества следует быть осторожным при написании формулы, поскольку она не должна давать представление о методе лечения. Большинство приложений относятся к лекарствам и фармацевтическим препаратам, включая лекарственные травы. Ограниченное количество приложений относится к машиностроению, электронике и химии.Около 62% заявок связаны с лекарствами и фармацевтическими препаратами. [1–24]

ВЫВОДЫ

Очевидно, что управление ИС и ПИС является многомерной задачей и требует множества различных действий и стратегий, которые необходимо согласовать с национальные законы и международные договоры и практика. Это больше не движется исключительно национальной перспективой. ИС и связанные с ней права серьезно зависят от потребностей рынка, реакции рынка, затрат, связанных с переводом ИС в коммерческое предприятие и т. Д.Другими словами, при управлении ПИС важны торговые и коммерческие соображения. Различные формы прав интеллектуальной собственности требуют разного обращения, обращения, планирования, стратегий и взаимодействия с людьми, обладающими знаниями в различных областях, таких как наука, инженерия, медицина, право, финансы, маркетинг и экономика. Каждая отрасль должна развивать свою собственную политику в области ИС, стиль управления, стратегии и т. Д. В зависимости от области своей специализации. Фармацевтическая промышленность в настоящее время развивает стратегию интеллектуальной собственности. Поскольку существует повышенная вероятность того, что некоторые ПИС недействительны, антимонопольное законодательство, следовательно, должно вмешаться, чтобы гарантировать, что недействительные права не утверждаются незаконно для создания и поддержания незаконных, хотя и ограниченных, монополий в фармацевтической промышленности.В этом контексте еще многое предстоит решить.

IP-адресация и создание подсетей для новых пользователей

Введение

В этом документе представлена ​​основная информация, необходимая для настройки маршрутизатора для маршрутизации IP, например, как разбиваются адреса и как работает разбиение на подсети. Вы узнаете, как назначить каждому интерфейсу маршрутизатора IP-адрес с уникальной подсетью. Включены примеры, чтобы помочь связать все воедино.

Предварительные требования

Требования

Cisco рекомендует иметь базовые знания о двоичных и десятичных числах.

Используемые компоненты

Этот документ не ограничивается конкретными версиями программного и аппаратного обеспечения.

Информация в этом документе была создана на устройствах в определенной лабораторной среде. Все устройства, используемые в этом документе, были запущены с очищенной (по умолчанию) конфигурацией. Если ваша сеть работает, убедитесь, что вы понимаете потенциальное влияние любой команды.

Дополнительная информация

Если определения вам полезны, используйте эти термины словаря, чтобы начать работу:

  • Адрес — Уникальный номер ID, присвоенный одному хосту или интерфейсу в сети.

  • Подсеть — Часть сети, которая имеет общий адрес подсети.

  • Маска подсети — 32-битная комбинация, используемая для описания того, какая часть адреса относится к подсети, а какая — к хосту.

  • Интерфейс — Сетевое соединение.

Если вы уже получили свой законный адрес (а) от Информационного центра сети Интернет (InterNIC), вы готовы начать.Если вы не планируете подключаться к Интернету, Cisco настоятельно рекомендует использовать зарезервированные адреса из RFC 1918.

Общие сведения об IP-адресах

IP-адрес — это адрес, используемый для однозначной идентификации устройства в IP-сети. Адрес состоит из 32 двоичных разрядов, которые можно разделить на сетевую часть и часть хоста с помощью маски подсети. 32 двоичных бита разбиты на четыре октета (1 октет = 8 бит). Каждый октет преобразуется в десятичный формат и разделяется точкой (точкой).По этой причине говорят, что IP-адрес выражается в десятичном формате с точками (например, 172.16.81.100). Значение в каждом октете находится в диапазоне от 0 до 255 в десятичном формате или от 00000000 до 11111111 в двоичном формате.

Вот как двоичные октеты преобразуются в десятичные: Самый правый или наименее значимый бит октета имеет значение 2 0 . Бит слева от него содержит значение 2 1 . Это продолжается до самого левого бита или самого старшего бита, который содержит значение 2 7 .Итак, если все двоичные биты равны единице, десятичным эквивалентом будет 255, как показано здесь:

 1 1 1 1 1 1 1 1
  128 64 32 16 8 4 2 1 (128 + 64 + 32 + 16 + 8 + 4 + 2 + 1 = 255) 

Вот пример преобразования октета, когда не все биты установлены на 1.

 0 1 0 0 0 0 0 1
  0 64 0 0 0 0 0 1 (0 + 64 + 0 + 0 + 0 + 0 + 0 + 1 = 65) 

В этом примере показан IP-адрес, представленный как в двоичном, так и в десятичном виде.

 10. 1. 23. 19 (десятичный)
  00001010.00000001.00010111.00010011 (двоичный) 

Эти октеты разбиты, чтобы обеспечить схему адресации, которая подходит для больших и малых сетей. Существует пять различных классов сетей, от A до E. В этом документе основное внимание уделяется классам от A до C, поскольку классы D и E зарезервированы, и их обсуждение выходит за рамки этого документа.

Примечание : Также обратите внимание, что в этом документе используются термины «Класс A, Класс B» и т. Д., Чтобы облегчить понимание IP-адресации и разделения на подсети.Эти термины больше не используются в отрасли из-за введения бесклассовой междоменной маршрутизации (CIDR).

Учитывая IP-адрес, его класс можно определить по трем старшим битам (три самых левых бита в первом октете). На рисунке 1 показано значение трех старших битов и диапазон адресов, которые попадают в каждый класс. В информационных целях также показаны адреса класса D и класса E.

Рисунок 1

В адресе класса A первый октет — это сетевая часть, поэтому в примере класса A на рисунке 1 основной сетевой адрес равен 1.0.0.0 — 127.255.255.255. Октеты 2, 3 и 4 (следующие 24 бита) предназначены для разделения сетевого администратора на подсети и хосты по своему усмотрению. Адреса класса A используются для сетей с более чем 65 536 хостами (на самом деле до 16777214 хостов!).

В адресе класса B первые два октета являются сетевой частью, поэтому в примере класса B на рисунке 1 основной сетевой адрес 128.0.0.0 — 191.255.255.255. Октеты 3 и 4 (16 бит) предназначены для локальных подсетей и хостов. Адреса класса B используются для сетей с числом хостов от 256 до 65534.

В адресе класса C первые три октета являются сетевой частью. Пример класса C на рисунке 1 имеет основной сетевой адрес 192.0.0.0 — 223.255.255.255. Октет 4 (8 бит) предназначен для локальных подсетей и хостов — идеально подходит для сетей с менее чем 254 хостами.

Сетевые маски

Сетевая маска помогает узнать, какая часть адреса идентифицирует сеть, а какая — узел. Сети классов A, B и C имеют маски по умолчанию, также известные как естественные маски, как показано здесь:

 Класс A: 255.0,0.0
Класс B: 255.255.0.0
Класс C: 255.255.255.0 

IP-адрес в сети класса A, которая не была разделена на подсети, будет иметь пару адрес / маска, подобную: 8.20.15.1 255.0.0.0. Чтобы увидеть, как маска помогает идентифицировать сетевую и узловую части адреса, преобразуйте адрес и маску в двоичные числа.

 8.20.15.1 = 00001000.00010100.00001111.00000001
255.0.0.0 = 11111111.00000000.00000000.00000000 

Если у вас есть адрес и маска, представленные в двоичном формате, идентификация сети и идентификатора хоста становится проще.Любые биты адреса, у которых соответствующие биты маски установлены на 1, представляют идентификатор сети. Любые биты адреса, у которых соответствующие биты маски установлены на 0, представляют идентификатор узла.

 8.20.15.1 = 00001000.00010100.00001111.00000001
255.0.0.0 = 11111111.00000000.00000000.00000000
            -----------------------------------
             чистый идентификатор | идентификатор хоста

netid = 00001000 = 8
hostid = 00010100.00001111.00000001 = 20.15.1 

Общие сведения о подсетях

Подсети позволяет создавать несколько логических сетей, которые существуют в одной сети класса A, B или C.Если вы не подсети, вы сможете использовать только одну сеть из своей сети класса A, B или C, что нереально.

Каждый канал передачи данных в сети должен иметь уникальный сетевой идентификатор, при этом каждый узел в этом канале является членом одной и той же сети. Если вы разбиваете основную сеть (класс A, B или C) на более мелкие подсети, это позволяет вам создать сеть из взаимосвязанных подсетей. Тогда каждый канал передачи данных в этой сети будет иметь уникальный идентификатор сети / подсети. Любое устройство или шлюз, которое соединяет n сетей / подсетей, имеет n различных IP-адресов, по одному для каждой сети / подсети, которые оно соединяет.

Чтобы разделить сеть на подсети, расширите естественную маску некоторыми битами из части адреса идентификатора хоста, чтобы создать идентификатор подсети. Например, учитывая сеть класса C 204.17.5.0, которая имеет естественную маску 255.255.255.0, вы можете создать подсети следующим образом:

 204.17.5.0 - 11001100.00010001.00000101.00000000
255.255.255.224–11111111.11111111.11111111.11100000
                  -------------------------- | sub | ---- 

Расширяя маску до 255.255.255.224, вы взяли три бита (обозначенных «sub») из исходной части адреса хоста и использовали их для создания подсетей. С помощью этих трех битов можно создать восемь подсетей. С оставшимися пятью битами идентификатора хоста каждая подсеть может иметь до 32 адресов хоста, 30 из которых могут быть фактически назначены устройству , поскольку идентификаторы хоста, состоящие из всех нулей или всех единиц, не допускаются (очень важно помнить об этом ). Итак, с учетом этого, эти подсети были созданы.

 204.17.5.0 255.255.255.224 диапазон адресов хоста от 1 до 30
204.17.5.32 255.255.255.224 диапазон адресов хоста от 33 до 62
204.17.5.64 255.255.255.224 диапазон адресов хоста от 65 до 94
204.17.5.96 255.255.255.224 диапазон адресов хоста от 97 до 126
204.17.5.128 255.255.255.224 диапазон адресов хоста от 129 до 158
204.17.5.160 255.255.255.224 диапазон адресов хоста от 161 до 190
204.17.5.192 255.255.255.224 диапазон адресов хоста от 193 до 222
204.17.5.224 255.255.255.224 диапазон адресов хоста от 225 до 254 

Примечание : Есть два способа обозначить эти маски.Во-первых, поскольку вы используете на три бита больше, чем «естественная» маска класса C, вы можете обозначить эти адреса как имеющие 3-битную маску подсети. Или, во-вторых, маска 255.255.255.224 также может быть обозначена как / 27, поскольку в маске установлено 27 бит. Этот второй метод используется с CIDR. С помощью этого метода одна из этих сетей может быть описана с помощью обозначения префикс / длина. Например, 204.17.5.32/27 обозначает сеть 204.17.5.32 255.255.255.224. При необходимости, обозначение префикса / длины используется для обозначения маски в остальной части этого документа.

Схема разделения сети на подсети в этом разделе допускает восемь подсетей, и сеть может выглядеть как:

Рисунок 2

Обратите внимание, что каждый из маршрутизаторов на рисунке 2 подключен к четырем подсетям, одна подсеть является общей для обоих маршрутизаторов. Кроме того, у каждого маршрутизатора есть IP-адрес для каждой подсети, к которой он подключен. Каждая подсеть потенциально может поддерживать до 30 адресов хоста.

Это поднимает интересный момент.Чем больше битов хоста вы используете для маски подсети, тем больше подсетей у вас доступно. Однако чем больше доступно подсетей, тем меньше адресов хостов доступно для каждой подсети. Например, сеть класса C 204.17.5.0 и маска 255.255.255.224 (/ 27) позволяет иметь восемь подсетей, каждая с 32 адресами узлов (30 из которых могут быть назначены устройствам). Если вы используете маску 255.255.255.240 (/ 28), разбивка будет:

 204.17.5.0 - 11001100.00010001.00000101.00000000
255.255.255.240–11111111.11111111.11111111.11110000
                  -------------------------- | sub | --- 

Поскольку теперь у вас есть четыре бита для создания подсетей, у вас осталось только четыре бита для адресов хостов. Таким образом, в этом случае у вас может быть до 16 подсетей, каждая из которых может иметь до 16 адресов хоста (14 из которых могут быть назначены устройствам).

Посмотрите, как можно разбить сеть класса B на подсети. Если у вас есть сеть 172.16.0.0, то вы знаете, что ее естественная маска 255.255.0.0 или 172.16.0.0/16.Расширение маски до чего-либо за пределами 255.255.0.0 означает, что вы разбиваете на подсети. Вы можете быстро увидеть, что у вас есть возможность создать намного больше подсетей, чем в сети класса C. Если вы используете маску 255.255.248.0 (/ 21), сколько подсетей и хостов в каждой подсети это позволяет?

 172.16.0.0 - 10101100.00010000.00000000.00000000
255.255.248.0–11111111.11111111.11111000.00000000
                ----------------- | sub | ----------- 

Вы используете пять битов из исходных битов хоста для подсетей.Это позволяет иметь 32 подсети (2 5 ). После использования пяти битов для разделения на подсети у вас остается 11 бит для адресов хостов. Это позволяет каждой подсети иметь 2048 адресов узлов (2 11 ), 2046 из которых могут быть назначены устройствам.

Примечание : В прошлом существовали ограничения на использование подсети 0 (все биты подсети были установлены в ноль) и подсети со всеми единицами (все биты подсети были равны единице). Некоторые устройства не позволяют использовать эти подсети. Устройства Cisco Systems позволяют использовать эти подсети, когда настроена команда ip subnet zero .

Примеры

Пример упражнения 1

Теперь, когда у вас есть понимание разбиения на подсети, примените эти знания на практике. В этом примере вам даны две комбинации адреса / маски, записанные с обозначением префикса / длины, которые были назначены двум устройствам. Ваша задача — определить, находятся ли эти устройства в одной подсети или в разных подсетях. Вы можете использовать адрес и маску каждого устройства, чтобы определить, к какой подсети принадлежит каждый адрес.

 Устройство А: 172.16.17.30 / 20
УстройствоB: 172.16.28.15/20 

Определите подсеть для устройства A:

 172.16.17.30 - 10101100.00010000.00010001.00011110
255.255.240.0–11111111.11111111.11110000.00000000
                  ----------------- | суб | ------------
подсеть = 10101100.00010000.00010000.00000000 = 172.16.16.0 

Посмотрев на биты адреса, у которых соответствующий бит маски установлен в единицу, и установив все остальные биты адреса в ноль (это эквивалентно выполнению логического «И» между маской и адресом), вы увидите, в какой подсети этот адрес принадлежит.В этом случае DeviceA принадлежит подсети 172.16.16.0.

Определите подсеть для устройстваB:

 172.16.28.15 - 10101100.00010000.00011100.00001111
255.255.240.0–11111111.11111111.11110000.00000000
                  ----------------- | суб | ------------
подсеть = 10101100.00010000.00010000.00000000 = 172.16.16.0 

Исходя из этих определений, DeviceA и DeviceB имеют адреса, которые являются частью одной и той же подсети.

Пример упражнения 2

Учитывая сеть класса C 204.15.5.0 / 24, подсеть сеть, чтобы создать сеть, показанную на рисунке 3, с показанными требованиями к хосту.

Рисунок 3

Глядя на сеть, показанную на рисунке 3, вы видите, что вам нужно создать пять подсетей. Самая большая подсеть должна поддерживать 28 адресов узлов. Возможно ли это в сети класса C? И если да, то как?

Вы можете начать с рассмотрения требований к подсети. Чтобы создать пять необходимых подсетей, вам нужно будет использовать три бита из битов хоста класса C.Два бита позволяют использовать только четыре подсети (2 2 ).

Поскольку вам нужно три бита подсети, у вас остается пять бит для части адреса хоста. Сколько хостов это поддерживает? 2 5 = 32 (можно использовать 30). Это соответствует требованиям.

Таким образом, вы определили, что можно создать эту сеть с сетью класса C. Пример того, как вы можете назначить подсети:

 netA: 204.15.5.0/27 диапазон адресов хоста от 1 до 30
netB: 204.15.5.32 / 27 диапазон адресов хоста от 33 до 62
netC: 204.15.5.64/27 диапазон адресов хоста от 65 до 94
netD: 204.15.5.96/27 диапазон адресов хоста от 97 до 126
netE: 204.15.5.128/27 диапазон адресов хоста 129–158 

VLSM Пример

Обратите внимание, что во всех предыдущих примерах разделения на подсети для всех подсетей была применена одна и та же маска подсети. Это означает, что каждая подсеть имеет одинаковое количество доступных адресов узлов. В некоторых случаях это может потребоваться, но в большинстве случаев наличие одинаковой маски подсети для всех подсетей приводит к потере адресного пространства.Например, в разделе «Пример упражнения 2» сеть класса C была разделена на восемь подсетей одинакового размера; однако каждая подсеть не использовала все доступные адреса узлов, что привело к потере адресного пространства. Рисунок 4 иллюстрирует это потраченное впустую адресное пространство.

Рисунок 4

На рис. 4 показано, что из используемых подсетей NetA, NetC и NetD имеют много неиспользуемого адресного пространства хоста. Возможно, это был преднамеренный план с учетом будущего роста, но во многих случаях это просто бесполезная трата адресного пространства из-за того, что для всех подсетей используется одна и та же маска подсети.

Маски подсети переменной длины (VLSM) позволяют использовать разные маски для каждой подсети, тем самым эффективно используя адресное пространство.

VLSM Пример

Учитывая те же сеть и требования, что и в примере упражнения 2, разработайте схему разделения на подсети с использованием VLSM, учитывая:

 netA: должен поддерживать 14 хостов
netB: должен поддерживать 28 хостов
netC: должен поддерживать 2 хоста
netD: должен поддерживать 7 хостов
netE: должен поддерживать 28 хостов 

Определите, какая маска разрешает необходимое количество хостов.

 netA: требуется маска / 28 (255.255.255.240) для поддержки 14 хостов
netB: требуется маска / 27 (255.255.255.224) для поддержки 28 хостов
netC: требуется маска / 30 (255.255.255.252) для поддержки 2 хостов
netD *: требуется маска / 28 (255.255.255.240) для поддержки 7 хостов
netE: требуется маска / 27 (255.255.255.224) для поддержки 28 хостов

* a / 29 (255.255.255.248) допускает только 6 используемых адресов хоста
  поэтому netD требует маску / 28. 

Самый простой способ назначить подсети — сначала назначить самую большую.Например, вы можете присвоить таким образом:

 netB: 204.15.5.0/27 диапазон адресов хоста от 1 до 30
netE: 204.15.5.32/27 диапазон адресов хоста от 33 до 62
netA: 204.15.5.64/28 диапазон адресов хоста от 65 до 78
netD: 204.15.5.80/28 диапазон адресов хоста от 81 до 94
netC: 204.15.5.96/30 диапазон адресов хоста от 97 до 98 

Графически это можно представить, как показано на Рисунке 5:

Рисунок 5

На рис. 5 показано, как использование VLSM помогло сэкономить более половины адресного пространства.

CIDR

Бесклассовая междоменная маршрутизация (CIDR) была введена для улучшения использования адресного пространства и масштабируемости маршрутизации в Интернете. Это было необходимо из-за быстрого роста Интернета и роста таблиц IP-маршрутизации, содержащихся в маршрутизаторах Интернета.

CIDR отходит от традиционных классов IP (Class A, Class B, Class C, и так далее). В CIDR IP-сеть представлена ​​префиксом, который представляет собой IP-адрес и некоторое указание длины маски.Длина означает количество крайних левых смежных битов маски, равных единице. Таким образом, сеть 172.16.0.0 255.255.0.0 может быть представлена ​​как 172.16.0.0/16. CIDR также представляет собой более иерархическую архитектуру Интернета, в которой каждый домен получает свои IP-адреса с более высокого уровня. Это позволяет суммировать домены на более высоком уровне. Например, если интернет-провайдер владеет сетью 172.16.0.0/16, он может предложить клиентам 172.16.1.0/24, 172.16.2.0/24 и т. Д. Тем не менее, при рекламе другим провайдерам интернет-провайдеру нужно только рекламировать 172.16.0.0 / 16.

Дополнительные сведения о CIDR см. В RFC 1518 и RFC 1519.

Специальные подсети

31-битные подсети

30-битная маска подсети позволяет использовать четыре адреса IPv4: два адреса хоста, одну сеть с нулями и один широковещательный адрес с единичными значениями. Соединение «точка-точка» может иметь только два адреса хоста. На самом деле нет необходимости иметь широковещательные адреса и адреса с нулями с двухточечными ссылками. 31-битная маска подсети позволяет использовать ровно два адреса хоста и исключает широковещательные адреса и адреса, состоящие только из нулей, тем самым сводя использование IP-адресов к минимуму для соединений точка-точка.

См. RFC 3021 — Использование 31-битных префиксов в двухточечных каналах IPv4.

Маска 255.255.255.254 или / 31.


Подсеть / 31 может использоваться на настоящих двухточечных каналах, таких как последовательные интерфейсы или POS-интерфейсы. Однако их также можно использовать в интерфейсах широковещательной передачи, таких как интерфейсы Ethernet. В этом случае убедитесь, что в этом сегменте Ethernet требуется только два адреса IPv4.

Пример

192.168.1.0 и 192.168.1.1 находятся в подсети 192.168.1.0/31.

 R1 (config) #int gigabitEthernet 0/1 
R1 (config-if) #ip address 192.168.1.0 255.255.255.254
% Предупреждение: осторожно используйте маску / 31 на не двухточечном интерфейсе

Предупреждение напечатано, поскольку gigabitEthernet является широковещательным сегментом.

32-битные подсети

Маска подсети 255.255.255.255 (подсеть / 32) описывает подсеть только с одним адресом хоста IPv4. Эти подсети нельзя использовать для присвоения адреса сетевым ссылкам, потому что для каждой ссылки всегда требуется более одного адреса.Использование / 32 строго зарезервировано для использования в ссылках, которые могут иметь только один адрес. Примером для маршрутизаторов Cisco является интерфейс обратной петли. Эти интерфейсы являются внутренними интерфейсами и не подключаются к другим устройствам. Таким образом, они могут иметь подсеть / 32.

Пример

 интерфейс Loopback0 
IP-адрес 192.168.2.1 255.255.255.255

Приложение

Пример конфигурации

Маршрутизаторы A и B подключаются через последовательный интерфейс.

Маршрутизатор A
 имя хоста routera
  !
  IP-маршрутизация
  !
  int e 0
  IP-адрес 172.16.50.1 255.255.255.0
  ! (подсеть 50)
  int e 1 IP-адрес 172.16.55.1 255.255.255.0
  ! (подсеть 55)
  int s 0 IP-адрес 172.16.60.1 255.255.255.0
  ! (подсеть 60) int s 0
  IP-адрес 172.16.65.1 255.255.255.0 (подсеть 65)
  ! S 0 подключается к маршрутизатору B
  роутер
  сеть 172.16.0.0 
Маршрутизатор B
 имя хоста routerb
  !
  IP-маршрутизация
  !
  int e 0
  IP-адрес 192.1.10.200 255.255.255.240
  ! (подсеть 192)
  int e 1
  IP-адрес 192.1.10.66 255.255.255.240
  ! (подсеть 64)
  int s 0
  IP-адрес 172.16.65.2 (та же подсеть, что и маршрутизатор A s 0)
  ! Int s 0 подключается к маршрутизатору A
  роутер
  сеть 192.1.10.0
  сеть 172.16.0.0 

Таблица количества хостов / подсетей

 Класс B Эффективный Эффективный
# бит Маска подсети Хосты
------- --------------- --------- ---------
  1 255.255.128.0 2 32766
  2 255.255.192.0 4 16382
  3 255.255.224.0 8 8190
  4 255.255.240.0 16 4094
  5 255.255.248.0 32 2046
  6 255.255.252.0 64 1022
  7 255.255.254.0 128 510
  8 255.255.255.0 256 254
  9 255.255.255.128 512 126
  10 255.255.255.192 1024 62
  11 255.255.255.224 2048 30
  12 255.255.255.240 4096 14
  13 255.255.255.248 8192 6
  14 255.255.255.252 16384 2

Класс C Эффективный Эффективный
# бит Маска подсети Хосты
------- --------------- --------- ---------
  1 255.255.255.128 2 126
  2 255.255.255.192 4 62
  3 255.255.255.224 8 30
  4 255.255.255.240 16 14
  5 255.255.255.248 32 6
  6 255.255.255.252 64 2

  
* Подсеть все нули и все единицы включены. Эти
 может не поддерживаться в некоторых устаревших системах.
* Все нули и все единицы исключены. 

Дополнительная информация

Протокол иммунопреципитации (IP) | Abcam

Иммунопреципитация — это метод очистки белка.Антитело к интересующему белку инкубируют с клеточным экстрактом, позволяя антителу связываться с белком в растворе. Затем комплекс антитело / антиген извлекают из образца с помощью агарозных гранул, связанных с белком A / G. Это изолирует интересующий белок от остальной части образца. Затем образец можно разделить с помощью SDS-PAGE для вестерн-блоттинга.

Содержание



Буферы для лизиса

Идеальный буфер для лизиса минимизирует денатурацию белка при высвобождении достаточного количества белков из образца.Неионные детергенты, такие как NP-40 и Triton X-100, менее агрессивны, чем ионные детергенты, такие как SDS и дезоксихолат натрия. Другие переменные, которые могут повлиять на успех иммунопреципитации, включают концентрацию соли, концентрацию двухвалентных катионов и pH. Чтобы оптимизировать переменные, они должны быть протестированы в следующих диапазонах (из Harlow and Lane, стр. 231):

  • Соли: 0–1 M
  • Моющее средство, неионогенное: 0,1–2%
  • Моющее средство, ионное : 0,01–0,5%
  • Двухвалентные катионы: 0–10 мМ
  • ЭДТА: 0–5 мМ
  • pH: 6–9


Неденатурирующий буфер для лизиса

Используется для антигенов, растворимых в детергенте и распознаются антителом в нативной форме.Тритон Х-100 может быть заменен НП-40.

  • 20 мМ Трис HCl pH 8
  • 137 мМ NaCl
  • 1% Nonidet P-40 (NP-40)
  • 2 мМ ЭДТА

Хранить до 6 месяцев при 4 ° C. Непосредственно перед применением добавляют ингибиторы протеаз.

Для удобства можно приготовить 10% исходный раствор дезоксихолата натрия (5 г на 50 мл). Его необходимо беречь от света.

Буфер для лизиса растворимого белка, не содержащий моющих средств

Некоторые растворимые белки могут не требовать использования детергентов.Используйте этот буфер для механического лизиса клеток, такого как гомогенизация с помощью гомогенизатора Даунса.

PBS, содержащий:

  • 5 мМ ЭДТА
  • 0,02% азид натрия

Хранить до 6 месяцев при 4 ° C. Непосредственно перед применением добавляют ингибиторы протеаз.

Денатурирующий лизисный буфер для растворимых антигенов, не содержащих детергентов

Эпитопы нативных белков недоступны для антител, которые распознают только денатурированные белки. При сборе и лизировании клеток нагрейте клетки в денатурирующем буфере для лизиса.Этот метод также можно использовать для антигенов, которые не могут быть извлечены из клетки неионными детергентами. Использование ДНКазы1 будет способствовать извлечению белков из хроматина.

Хранить до 1 недели при комнатной температуре.

Непосредственно перед использованием добавьте

  • 10 мМ дитиотреитола или бета-меркаптоэтанола
  • Ингибиторы протеазы 15 Ед / мл DNase1

Промывочные буферы

  • 10 мМ Трис; довести pH до 7,4
  • 1 мМ ЭДТА
  • 1 мМ EGTA; pH 8.0
  • 150 мМ NaCl
  • 1% Triton X-100
  • 0,2 мМ ортованадат натрия
  • Смесь ингибиторов протеазы


Хранить до 6 месяцев при 4 ° C. Непосредственно перед применением добавить ингибитор протеазы.



Другие реагенты


Ингибиторы протеаз

Протеолиз, дефосфорилирование и денатурация начинаются, как только клетки лизируются. Помещение образцов на лед замедлит эти процессы, но также доступны коктейли из ингибиторов протеаз и фосфатаз.Если коктейль не используется, PMSF (50 мкг / мл) и апротинин (1 мкг / мл) являются ингибиторами протеазы, обычно используемыми для иммунопреципитации.

Другие реагенты

  • Стерильный PBS pH 7,4
  • Стерильный PBS-BSA 1% мас. / Об. (Фильтрованный)
  • Буфер TBST
  • Буфер для загрузки / образца для вестерн-блоттинга
  • VeriBlot для иммунопреципитации вторичных антител, которые предпочтительно обнаруживают невосстановленное, неденатурированное первичное антитело во время вестерн-блоттинга.
  • 100 мМ маточный раствор EDTA получают из 1,86 г EDTA, растворенного в 40 мл воды. Добавьте NaOH, чтобы довести pH до 7,4. Наконец, доведите общий объем до 50 мл.


Подготовка лизатов


Лизаты из клеточной культуры (неденатурирующие)

  1. Поместите чашку для культивирования клеток на лед и промойте клетки ледяным PBS.
  2. Слить PBS, затем добавить ледяной буфер для лизиса (1 мл на 107 клеток / чашку 100 мм2 / колбу 150 см2; 0.5 мл на чашку 5×106 клеток / 60 мм2 или колбу 75 см2).
  3. Соскребите прилипшие клетки с чашки с помощью холодного пластикового скребка для клеток, затем осторожно перенесите суспензию клеток в предварительно охлажденную микроцентрифужную пробирку.
  4. Поддерживайте постоянное перемешивание в течение 30 минут при 4 ° C.
  5. Центрифуга в микроцентрифуге при 4 ° C.

    Вам может потребоваться изменить силу и время центрифугирования в зависимости от типа ячейки. Рекомендуемое значение — 20 минут при 12000 об / мин, но вы должны оптимизировать это для вашего конкретного эксперимента (например, лейкоцитам необходимо очень легкое центрифугирование).

  6. Осторожно извлеките пробирки из центрифуги и поместите на лед. Аспирируйте супернатант и поместите в свежую пробирку, оставленную на льду, и выбросьте осадок.

Лизаты из клеточной культуры (денатурирующие)

  1. Добавьте 100 мкл денатурирующего лизисного буфера к 0,5–2×107 клеток.
  2. Хорошо перемешайте, энергично взбалтывая в течение 2–3 секунд на максимальной скорости. Перенести клеточную суспензию в пробирку для микроцентрифуги.

    Раствор на этой стадии может быть вязким из-за высвобождения ДНК.

  3. Нагрейте образцы до 95 ° C в течение 5 минут до денатурирования.
  4. Разбавьте суспензию 0,9 мл неденатурирующего буфера для лизиса. Осторожно перемешайте.

    Избыток 1% Triton X-100 в неденатурирующем буфере для лизиса гасит SDS в исходном денатурирующем буфере.

  5. Фрагментируйте ДНК, пропуская лизированную суспензию 5–10 раз через иглу, прикрепленную к шприцу на 1 мл.

    Повторяйте механическое прерывание, пока вязкость не снизится до приемлемого уровня.Если ДНК не полностью переварена и фрагментирована, это может помешать разделению осадка и супернатанта после центрифугирования .

  6. Инкубируйте на льду 5 мин.
  7. Выполните иммунопреципитацию

Лизаты ткани

  1. Рассеките ткань как можно быстрее чистыми инструментами. По возможности делайте это на льду, чтобы предотвратить разложение протеазами.
  2. Поместите ткань в микроцентрифужные пробирки с круглым дном и погрузите в жидкий азот, чтобы быстро заморозить.Храните образцы при -80 ° C для дальнейшего использования или на льду для немедленной гомогенизации.
  3. Для кусочка ткани массой ~ 5 мг быстро добавьте в пробирку ~ 300 мкл лизирующего буфера и гомогенизируйте с помощью электрического гомогенизатора.
  4. Промойте лезвие дважды еще одним 300 мкл буфера для лизиса на одно полоскание, а затем поддерживайте постоянное перемешивание в течение 2 часов при 4 ° C (например, поместите на орбитальный шейкер в холодильник).

    Объемы буфера для лизиса должны определяться в зависимости от количества присутствующей ткани. Белковый экстракт не должен быть слишком разбавленным, чтобы избежать потери белка и минимизировать объем образца для загрузки в гели.Минимальная концентрация — 0,1 мг / мл; оптимальная концентрация — 1–5 мг / мл.

    Если требуются денатурированные образцы, используйте денатурирующий лизисный буфер и выполните шаги 2–5 из описанного выше протокола денатурирования.

  5. Центрифуга в течение 20 минут при 12000 об / мин при 4 ° C в микроцентрифуге. Осторожно извлеките пробирки из центрифуги и поместите на лед, аспирируйте супернатант и поместите в свежую пробирку, хранящуюся на льду. Выбросьте гранулы.


Предварительная очистка лизатов

Предварительная очистка лизата может помочь уменьшить неспецифическое связывание и уменьшить фон.Однако, если окончательное обнаружение белка проводится вестерн-блоттингом, предварительная очистка может не потребоваться, если только контаминирующий белок не мешает визуализации интересующего белка.

  1. Добавьте 50 мкл нецелевого антитела того же вида и изотипа, что и иммунопреципитационное антитело, или нормальную сыворотку (кролик часто предпочтительнее, см. Harlow and Lane, стр. 243) к 1 мл лизата. Инкубируйте 1 ч на льду.
  2. Добавьте к лизату 100 мкл суспензии шариков.
  3. Инкубируйте 10–30 мин при 4 ° C при осторожном перемешивании.
  4. Вращение в микроцентрифуге при 14000 x g при 4 ° C в течение 10 мин.
  5. Отбросить осадок с шариками и оставить супернатант для иммунопреципитации.

    Для увеличения выхода гранулы можно промыть еще 1 или 2 раза в буфере для лизиса, а супернатанты собрать вместе.


Важно убедиться, что удалено как можно больше нормальной сыворотки, поскольку это будет конкурировать с антителом против интересующего антигена. Чтобы проверить это, можно провести тест с буфером для лизиса вместо образца, выполнив все шаги предварительной очистки, как указано выше.

Нанесение геля из полученного супернатанта и окрашивание Кумасси покажет, эффективно ли удаляется сывороточный Ig. Если сыворотка не была удалена в достаточной степени, будут присутствовать полосы 50 и 25 кДа для тяжелых и легких цепей; его присутствие может способствовать слабой иммунопреципитации. Рассмотрите возможность уменьшения количества сыворотки или увеличения количества шариков, инкубируемых с вашими образцами на этапе предварительной очистки



Иммунопреципитация

Существует несколько различных методов иммунопреципитации белков.Первый подход (метод А) заключается в смешивании антитела с образцом белка с последующим добавлением протеина A / G. Этот метод обеспечивает высокую чистоту белка; однако антитела также элюируются вместе с представляющим интерес белком, что иногда создает трудности при вестерн-блоттинге.

Второй подход (метод B) заключается в связывании антитела с гранулами белка A / G и последующем смешивании с антигеном. Этот метод дает меньший выход, чем первый, но позволяет избежать проблемы совместной элюции антител.

Метод A

Иммунопреципитация с антителами в растворе:

  1. На льду в микроцентрифужную пробирку добавьте 10–50 мкг клеточного лизата плюс рекомендуемое количество антител (см. Ниже). Обычно в пилотных экспериментах фиксированное количество белка осаждается за счет увеличения количества антител.

    Рекомендуемую концентрацию антител см. В таблице данных по антителам. В качестве рекомендации используйте

    1–5 мкл поликлональной антисыворотки
    1 мкг аффинно очищенного поликлонального антитела
    0.2–1 мкл асцитной жидкости (моноклональное антитело)
    20–100 мкл супернатанта культуры (моноклональное антитело)

  2. Инкубируйте образец с антителом в течение 1–12 ч при 4 ° C, предпочтительно при легком встряхивании или вращении. Продолжительность инкубационного периода зависит от количества белка и аффинных свойств антитела.
  3. Тем временем подготовьте шарики Sepharose. Если вы используете моноклональные антитела, выберите бусины сефарозы, связанной с G-белком. При использовании поликлональных антител обычно подходят бусинки сефарозы, связанные с протеином А (см. Таблицу «Выбор протеиновых бусинок» ниже).Если гранулы представлены в виде порошка, инкубируйте 100 мг гранул в 1 мл 0,1 М PBS, промойте в течение 1 часа, чтобы они набухли, затем центрифугируйте, удалите супернатант и выбросьте.

    Добавьте 1 мл PBS, 0,1% BSA, перемешайте в течение 1 ч, используя ротатор Eppendorf, и дважды промойте PBS. Удалите супернатант и добавьте 400 мкл буфера, содержащего ингибиторы протеаз (может быть таким же, как буфер для лизиса). Теперь суспензия готова к использованию. Может храниться при 4 ° C несколько дней; в течение более длительного времени держите шарики в PBS с 0,02% азидом (тщательно промойте шарики в день использования и нанесите свежий лизисный буфер).Вы также можете купить предварительно набухшие шарики в виде готовой суспензии.

    Рекомендуется использовать наконечники пипеток с обрезанным концом, чтобы не повредить шарики.

    При использовании антител IgM не используйте гранулы, конъюгированные с протеином A или G. Используйте анти-IgM-связанные с протеином А или шарики с протеином G. Затем IgM свяжется с гранулами путем связывания с антителом против IgM.

  4. Хорошо перемешайте суспензию и добавьте 70–100 мкл шариков в каждый образец. Всегда храните образцы на льду.Бусинки будут прилипать к краям наконечника, поэтому постарайтесь свести к минимуму движение в пипетке и используйте надрез на 5 мм от верха.
  5. Инкубируйте смесь лизатных шариков при 4 ° C и роторном перемешивании в течение 4 часов (оптимальное время инкубации можно определить в предварительном эксперименте).
  6. Выполните следующие действия по стирке.

Метод B

Иммунопреципитация конъюгатом антитело-агароза:

  1. Чтобы приготовить агарозу / сефарозу с белком A или G, выполните шаг 3 в методе A.
  2. Добавьте примерно 70–100 мкл суспензии конъюгата протеин A-, G- или L-агарозы в микроцентрифужные пробирки.
  3. Добавьте 10 мкл первичного антитела. В качестве ориентира используйте разведение, рекомендованное в паспорте антител для иммунопреципитации.
  4. Инкубируйте смесь антитело-гранулы в течение 1–4 ч при 4 ° C, осторожно перемешивая смесь на подходящем шейкере.
  5. Центрифуга при 1000–3000 x g в течение 2 минут при 4 ° C и слить супернатант.
  6. Добавьте к смеси 1 мл буфера для лизиса, продолжая осторожно перемешивать, а затем центрифугируйте при 3000 x g в течение 2 минут при 4 ° C.Повторите этот этап промывки дважды.
  7. После промывания смеси шариков и антител добавьте 10–50 мкг клеточного лизата.
  8. Инкубируйте смесь конъюгата лизат-гранула / антитело при 4 ° C при роторном перемешивании в течение от 4 ч до ночи, если требуется (оптимальное время инкубации можно определить в предварительном эксперименте).
  9. По окончании инкубации продолжите промывку, указанную ниже.


Промывка

  1. Центрифугируйте пробирки, удалите супернатант с шариков и выбросьте.Теперь интересующий белок должен быть специфически связан с антителом, покрывающим шарики.
  2. Промойте шарики промывочным буфером или буфером для лизиса трижды, чтобы удалить неспецифическое связывание. Для каждой промывки осторожно смешайте шарики с промывочным буфером, центрифугируйте при 4 ° C и удалите супернатант.
  3. Осторожно удалите как можно больше промывочного буфера с шариков. Теперь комплекс готов к элюированию с шариков.


Элюция

Для элюирования белка из гранул можно использовать один из трех методов.Буфер SDS является самым жестким, который также элюирует нековалентно связанные антитела и фрагменты антител вместе с интересующим белком. С другой стороны, глициновый буфер мягко элюирует белок с уменьшенным количеством элюированного антитела.

Глицин Буферное элюирование

В этой процедуре комплекс элюируется с гранул путем подкисления с использованием буфера, содержащего 0,1–0,2 М глицина, pH 2,0–3,0. Низкий pH глицина ослабляет взаимодействие между антителом и шариками.Этот метод выгоден, поскольку гранулы можно повторно использовать после удаления глицинового буфера. Однако элюированный образец следует немедленно нейтрализовать трис, pH 8,0–8,5.

  1. Элюируйте шарики (50 мкл) 3 x 50 мкл 0,2 М глицина, pH 2,6 (1: 1), инкубируя образец в течение 10 минут при частом встряхивании перед осторожным центрифугированием.
  2. Объедините элюат и нейтрализуйте, добавив равный объем Трис pH 8,0.

    При необходимости повторите эти шаги.

  3. Нейтрализуйте гранулы, промывая 2 раза 150 мкл лизирующего буфера (без детергента) и объединяя их с элюатом.
  4. Запустите образцы с помощью вестерн-блоттинга, чтобы проверить осаждение белков.

Элюция буфера SDS

Комплекс Ag-Ab элюируется из шариков путем нагревания или кипячения образцов в загрузочном буфере с денатурирующим SDS. Этот метод выгоден тем, что метод экстракции очень эффективен, а полученный образец более концентрированный.

  1. Элюируйте 50 мкл шариков путем нагревания в 50 мкл 2-кратного загрузочного буфера SDS без DTT в течение 10 мин при 50 ° C.
  2. Гранулы гранулы, перенести супернатант в новую пробирку и добавить DTT в концентрации 100 мМ (элюция 1).
  3. Добавить 50 мкл 2 x SDS-буфера с DTT к осажденным шарикам (элюция 2).
  4. Кипятите элюированные образцы в течение 5 минут и анализируйте содержание образца с помощью вестерн-блоттинга. Как правило, целевой белок должен присутствовать как в элюции 1, так и в элюции 2, хотя количество в каждом будет варьироваться, и элюция 2 будет иметь больше контаминации IgG, чем элюция 1.

Элюция буфером мочевины

Этот метод полезен для масс-спектрометрии потому что образец может перевариваться протеолитическими ферментами.

  1. Промыть шарики буфером для предварительной промывки мочевины (50 мМ Трис pH 8,5, 1 мМ EGTA, 75 мМ KCl). Удалите весь остаточный супернатант.
  2. Добавьте 2–5 объемов буфера для элюирования мочевины (6–8 М мочевина, 20 мМ Tris pH 7,5 и 100 мМ NaCl) и вращайте в течение 30 минут при комнатной температуре с частым встряхиванием перед осторожным центрифугированием.
  3. Повторите этот процесс еще как минимум дважды, чтобы убедиться, что весь захваченный комплекс высвободился из бусинок. Гранулируйте шарики и перелейте мочевину в новую пробирку.
  4. Запустите образцы с помощью вестерн-блоттинга, чтобы проверить осаждение белков.


Выбор правильных бусинок — сводная таблица


Ключ:
+++ = Сильное связывание
++ = Среднее связывание
+ = Слабое связывание
— = Нет связывания

Человеческий Ig3 ++

920179

8 ++

8 ++

+

90 175

+++

все изотипы

Овца

Видовой изотип иммуноглобулина

Белок A

Белок G

Человеческий IgG1

Человеческий IgG2

+++

+++

Человеческий IgG3

+++

+++

Человеческий IgM

Использовать антитела против человеческого IgM


Человеческий IgE

+

Человеческий IgA

+++

Мышь IgG2a

+++

+++

Мышь IgG2b

Мышиный IgG3

+

+

Мышиный IgM

Использовать анти-мышиный IgM


12


12

Крысиный IgG2a

Крысиный IgG2b

++

Крысиный IgG2c

+

4

+

Корова все изотипы

++

+++

изотипы

++

Морская свинка все изотипы

+++

++

Хомяк все изотипы

903

Лошадь все изотипы

+

+++

Свинья все изотипы

+

++

Кролик все изотипы

+++

++

+++



Ссылки

Протоколы предоставлены Abcam «AS-IS» на основе экспериментов в лабораториях Abcam с использованием реагентов и продуктов Abcam; ваши результаты от использования протоколов вне этих условий могут отличаться.

Почему вам нужно защищать свою интеллектуальную собственность

Для многих предприятий интеллектуальная собственность защищает не только идею или концепцию — она ​​защищает настоящие бизнес-активы, которые могут быть неотъемлемой частью основных услуг бизнеса и общей долгосрочной жизнеспособности.

Интеллектуальная собственность может состоять из множества различных областей, от логотипов и фирменного стиля до продуктов, услуг и процессов, которые отличают ваш бизнес-предложение.Организация может пострадать, когда эти идеи используются без разрешения. Почти все предприятия, несомненно, извлекли выгоду из Интернета, где продукты, услуги и маркетинговые коммуникации могут достигать широкую аудиторию при относительно низких затратах, но это также увеличивает шансы кражи интеллектуальной собственности. Компании любого размера подвергаются риску посягательства на их уникальные идеи, продукты или услуги, даже если они находятся на другом конце света, что делает защиту интеллектуальной собственности более важной, чем когда-либо.

Сохраняйте свои идеи

Когда у вас есть отличная идея продукта или услуги, всегда найдутся люди, которые захотят повторить ваш успех и продать ваши идеи как свои собственные. В зависимости от конкретных обстоятельств вы можете использовать патенты, товарные знаки или авторские права — все они охватывают различные области интеллектуальной собственности. Их можно использовать для предотвращения использования ваших идей конкурентами или кем-либо еще для получения собственной выгоды без вашего согласия. Подробнее о формах IP.Защита интеллектуальной собственности распространяется на предприятия любого размера; идеи даже огромных корпораций были ущемлены, и они подали иски на миллионы фунтов стерлингов; просто посмотрите на продолжающиеся споры между Apple и Samsung из-за их смартфонов.

Защитите рост бизнеса

Если вы представляете малый бизнес, очень важно защищать любые уникальные продукты или услуги, которыми вы владеете, поскольку конкуренты могут использовать ваш успех, чтобы отнять долю рынка, что приведет к медленному росту или потере доходов.Потеря доли рынка на ранних этапах развития бизнеса может быть разрушительной и отнимать много времени, если пытаться преследовать виновную без какой-либо правовой защиты. Важно помнить, что никто другой не будет проверять, не были ли нарушены права на вашу интеллектуальную собственность; вы несете ответственность за то, чтобы никто другой не использовал ваши активы.

Это проще, чем вы думаете

Сначала это может показаться сложным или трудоемким, но защита вашей IP стоит времени и усилий и не так сложно, как вы думаете.Хотя вы не можете защитить саму идею, вы можете защитить средства, с помощью которых вы претворяете идею в жизнь, и это то, что вы защитите, используя интеллектуальную собственность (IP).

Что касается авторских прав, то фактическая процедура регистрации отсутствует, поскольку защита осуществляется бесплатно и автоматически. Хотя авторское право на самом деле не защищает идею, оно может защитить способ представления идеи — например, брошюры, презентации, веб-сайты, листовки и т. Д.

Если вы хотите подать заявку на патент, зарегистрированный образец или торговую марку, это можно сделать через британское ведомство интеллектуальной собственности самостоятельно или, если вы хотите подать заявку на патент, вместе с патентным поверенным.Если вы хотите узнать больше обо всех областях интеллектуальной собственности, Business & IP Center предлагает ряд деловых мероприятий и услуг, которые могут помочь вам узнать, какие области вашего бизнеса вам необходимо защитить и как это сделать.

Чтобы увидеть полный список событий — щелкните здесь.

.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *